维药材欧绵马的质量标准研究

马燕萍，孙 芸，王东东，3，田 莉，3＊（.新疆医科大学校医院，乌鲁木齐 8300；.新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐8300；3.新疆名医名方与特色方剂学重点实验室，乌鲁木齐 8300）

维药材欧绵马的质量标准研究

马燕萍1，孙 芸2，王东东2，3，田 莉2，3＊（1.新疆医科大学校医院，乌鲁木齐 830011；2.新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐830011；3.新疆名医名方与特色方剂学重点实验室，乌鲁木齐 830011）

目的 研究新疆产维药材欧绵马的质量标准，为该植物资源的开发利用提供科学依据。方法 采用性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱法、紫外可见分光光度法对新疆不同产地的10批欧绵马药材进行研究，对其水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物和总间苯三酚的含量进行测定。结果 对新疆产欧绵马药材的性状、显微特征进行了描述，建立了TLC定性鉴别方法，制订了维药材欧绵马的质量标准：水分、灰分、酸不溶灰分分别不得超过12.0%，15.0%和6.0%；醇溶性浸出物、总间苯三酚含量分别不少于20.0%和5.0%。结论 建立的方法简便、快速、重复性好，适用于欧绵马药材的质量控制。

欧绵马；质量标准；总间苯三酚

维药材欧绵马为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物欧洲鳞毛蕨Dryopteris filix－mas（L.）Schott的干燥根茎及叶柄残基，异名克尔可斯、克里达如［1］，系多年生草本植物，国内主要分布于新疆北部福海、奇台、昌吉、塔城、和布克赛尔、博乐、霍城、尼勒克、新源、巩留等县，国外哈萨克斯坦、俄罗斯和欧洲亦有分布，生长于海拔2 000米左右的阴湿山坡或河谷林下［1－3］，成群落分布。

维吾尔医学认为，欧绵马具有清涤异物、消散寒湿的功效，临床主要用于机体黏液质偏盛、吞酸胃弱、尿频肠阻、肠寄生虫等症，收录于1999年出版的《中华人民共和国卫生部药品标准》（维吾尔药分册）［4］，欧绵马中的间苯三酚类化合物具有驱虫、抗菌、抗病毒、止血、解痉止痛及抗肿瘤等作用［3－5］。欧绵马现行药材标准中［4］仅有粗略的定性鉴别，无定量指标，也未见质量研究的相关文献，为保证其用药安全有效，本文参考相关文献［6］对其质量标准进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Mikroskope Primo Star X2005型数码显微镜（德国麦克奥迪实业有限公司）；XS105型电子天平（德国梅特勒－托利多仪器有限公司）；GBC Cinira－40型紫外可见分光光度计（澳大利亚GBC科学仪器公司）；AK－1000A摇摆式中药粉碎机（温岭市奥为中药机械有限公司）；KQ3200DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；CS101型鼓风干燥箱（中华人民共和国重庆实验设备厂）。

1.2 试药 本实验所用10批欧绵马样品均系野生采集的样品，9批采自新疆伊犁地区，1批采自昌吉地区，经李永和主任中药师鉴定为欧洲鳞毛蕨Dryopteris filix－mas（L.）Schott，将药材阴干，去除根茎及叶柄残基以外的其他部分，粉碎，备用；绵马贯众素ABBA对照品（成都瑞芬思生物科技有限公司，质量分数98%，批号M－040－111008）；坚牢蓝BB盐（上海阿拉丁试剂有限公司，批号F106955）；水为蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 性状 药用根茎，呈圆柱形，长10～15cm，直径1～2cm，覆盖着的叶柄残基可达5cm。呈复瓦状排列，互相密接处复有棕色膜状鳞叶片。表面黑棕色，断面浅绿色，叶柄基部长约2cm，直径0.7～1cm，略弯而侧扁。气微，味苦。

2.2 显微鉴别

2.2.1 根茎的横切面 根茎横切面呈多角形。木栓细胞数列，内含棕色物质；薄壁组织含淀粉粒及色素块，髓心四周有周韧型维管束（分体中柱）8～12个，周韧型；内皮层凯氏点明显；木质部由梯纹、网纹、孔纹管和纤维组成；在薄壁细胞间隙中可见有小腺毛，直径20～50μm；薄壁组织中散在有较多的叶迹维管束。见图1。

图1 欧绵马根茎横切面Fig.1 Transverse section of rhizome of Dryopteris filix－mas（L.）Schott

2.2.2 粉末特征 欧绵马粉末黄棕色。鳞片表皮细胞由黄色狭长薄壁细胞组成，可见椭圆形气孔；管胞棱形或椭圆形，具孔纹；木栓细胞表面类圆形，纵面观呈长方形，常含棕色物质，薄壁细胞多角形或类圆形，含淀粉粒，直径5～15μm；细胞间隙偶见腺毛，常含棕红色物质，管胞孔纹、梯纹，偶有网纹，有的薄壁细胞和木栓细胞具孔纹。见图2。

图2 欧绵马粉末Fig.2 Powder of Dryopteris filix－mas（L.）Schott

2.3 薄层鉴别 取本品粉末0.5g，加环己烷20mL，超声提取30min，过滤，取滤液10mL浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取欧绵马对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。按照《中国药典》（2010年版）一部附录方法，吸取2种溶液各4μL，点于同一硅胶G薄层板上［取硅胶G10g、枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液（pH7.0）10mL、维生素C 60mg、羧甲基纤维素钠溶液20mL，调匀，铺板，室温避光晾干，50℃活化2h后备用］，以正己烷－三氯甲烷－甲醇（30∶15∶1）为展开剂，薄层板置于展开缸中预饱和2h，展开，展距15cm以上，取出，立即喷以1g·L－1坚牢蓝BB盐的体积分数50%乙醇溶液，在40℃放置1h。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显红色斑点。

2.4 检查 水分、总灰分、酸不溶性灰分测定分别参照《中国药典》（2010年版）一部附录测定法；浸出物测定参照《中国药典》（2010年版）一部附录以体积分数50%乙醇为溶剂，采用热浸法测定。结果见表l。

表1 欧绵马水分、灰分、酸不溶性灰分、醇浸出物及含量测定结果Tab.l Determination results of moisture，ash，acid insoluble ash，alcohol－soluble extractives and content of total phloroglucinol of Dryopteris filix－mas（L.）Schott （n＝10）

2.5 含量测定

2.5.1 对照品溶液的制备 精密称取绵马贯众素ABBA对照品适量，用乙醇制成质量浓度为0.08 mg·mL－1的溶液作为对照品溶液。

2.5.2 供试品溶液的制备 取本品约1g，精密称定，精密加入乙醇100mL，称质量，回流提取1h，冷却至室温，称质量，补足减失的质量，混匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液2mL，置于10mL量瓶中，用乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，即得。

2.5.3 线性考察 精密吸取对照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2和1.4mL，置于10mL磨口具塞刻度试管中，均用乙醇稀释至2mL，精密加入1g·L－1坚牢蓝BB盐溶液5mL，混匀，室温放置20 min，以第1管为空白，在476nm波长处测定吸光度，以吸光度（A）对对照品的量C（μg）做标准曲线，得回归方程：A＝6.214 3 C＋0.066 6，r＝0.999 2。表明对照品在16～112μg范围内线性关系良好。

2.5.4 稳定性考察 同一显色后供试品溶液每隔10min测定1次吸光度，90min内吸光度的RSD为2.00%，表明供试品溶液在90min内稳定性良好。

2.5.5 精密度实验 取同一批供试品溶液，精密吸取2mL，平行操作6份，显色，测定，吸光度的RSD为2.62%。

2.5.6 重复性实验 取同一批供试品，按供试品溶液制备方法，平行制备6份，测定，结果RSD为1.37%。2.5.7 回收率实验 取已知含量供试品（质量分数8.58%）约0.5g，平行6份，精密加入对照品溶液20 mL，精密加人乙醇80mL，按照2.6.2项下方法制备，测定吸光度，计算回收率。结果见表2。

表2 回收率实验结果Tab.2 Experiment results of recovery test

2.5.8 样品含量测定 取10批不同地区欧绵马药材样品，按拟定方法制备和测定含量。结果见表1。

3 讨论

欧绵马药用历史悠久，维吾尔医学著作《明净词典》、《注医典》等对其药性及功能主治均有记载［3］，目前研究多为粗提物的活性研究［7－8］。欧绵马曾作为同属植物绵马贯众（Dryopteris crassirhizoma Nakai.）的混用品［9］，后者是《中国药典》收载品种，对其化学成分、质量标准、药理作用和临床应用研究均较为深入。二者外形近似，但欧绵马裂片边缘锐裂成粗齿，根茎质地疏松，绵马贯众裂片边缘矩圆形，根茎质地较坚实，可加以区别。欧绵马在国内主要分布于新疆北部天山和阿尔泰山，主要产区是伊犁地区，质量为优［3］，绵马贯众主要分布在东北，二者分布区没有重叠。

《维吾尔药志》记载［1］∶欧绵马含绵马素（aspidin）、绵马酸（filicic acid）、白绵马素（albaspidin）等间苯三酚衍生物，但TLC鉴别时样品在上述3种对照品相应的位置并未出现相同颜色斑点，故与对照药材进行比较。根据不同地区10批药材质量研究结果，并考虑药材来源差异的实际情况，暂定：水分不得过15.0%，酸不溶性灰分不得超过6.0%，杂质不得超过12.0%，醇溶性浸出物不得少于20.0%，总间苯三酚含量限度不低于6.0%。新疆不同地区的欧绵马中总间苯三酚含量有较大差异，比东北产绵马贯众所含间苯三酚含量略低［10］，此种差异可能与药材的生长环境、生长年限有关，有待进一步地研究。欧绵马尚无人工栽培品，本实验所用均为野生采集，鉴于伊犁地区野生分布较多，品质优，建议药用欧绵马的产地固定为新疆伊犁地区。

［1］ 刘勇民，沙吾提·伊克木.维吾尔药志：上册［M］.乌鲁木齐：新疆人民出版社，1999，320－323.

［2］ 新疆植物志编辑委员会.新疆植物志：第一卷［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1992：45－46.

［3］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：维吾尔药卷［M］.上海：上海科技出版社，2005：232.

［4］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：维吾尔药分册［S］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：59.

［5］ 欧有权，赖永娥，罗润嫦，等.塞来昔布联合间苯三酚缓解结石所致肾绞痛的临床研究［J］.西北药学杂志，2012，27（4）：356－357.

［6］ 刘冲，董红亚，杨伟俊，等.哈萨克药材黑果越橘质量标准初步研究［J］.西北药学杂志，2014，29（2）：123－124.

［7］ 何春霞，曹文尧.新疆欧洲鳞毛蕨黄酮的提取及抗氧化活性［J］.江苏农业科学，2012，40（6）：278－280.

［8］ 周贤春，玛丽亚木·阿布里米提，苏力坦·阿巴白克力，等.新疆欧洲鳞毛蕨中总生物碱的提取及抑菌活性研究［J］.地方通病报，2007，22（5）：14－16.

［9］ 杨纯瑜，李春德.中药贯众的资源及原植物调查［J］.军事医学科学院院刊，1993，17（3）：202－206.

［10］ 高增平，苏雨雷.商品贯众中总间苯三酚含量测定方法研究［J］.北京中医药大学学报，2009，32（4）：259－262.

Study on the quality standard of Dryopteris filix－mas（L.）Schott

MA Yanping1，SUN Yun2，WANG Dongdong2，3，TIAN Li2，3＊（1.Xinjiang Medical University Hospital，Urumqi 830011，China；2.College of TCM，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China；3.Xinjiang Key Laboratory of Famous Prescription and Science of Formula，Urumqi 830011，China）

Objective To establish the quality standard of Dryopteris filix－mas（L.）Schott，thus to provide a basis for herbs applicacion and the plant resource development.Methods The plant was studied by the methods including microscopic identification，thin layer chromatography，and visible spectrophotometry.The contents of water，ash，acid insoluble ash，extraction and total phloroglucinol of samples from ten different output places of Xinjiang were analyzed respectively.Results The morphological characteristics and powder microscopic characteristics were described.A TLC method was set up for qualitative identification analysis.The limits of the ethanol extraction content of moisture，ash，acid insoluble ash were 12.0%，15.0%，and 6.0%，respectively.The minimum contents of the ethanol extraction and total phloroglucinol were no less than 20.0%，and 5.0%，respectively.Conclusion The quality standard established in this paper is suitable for the quality control of Dryopteris filix－mas（L.）Schott.

Dryopteris filix－mas（L.）Schott；quality standard；total phloroglucinol

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.004

R282

A

1004－2407（2015）02－0121－04

2014－10－23）

国家药品（维药）标准提高研究课题（编号：538）；国家中医药管理局全国第四次中药资源普查试点（新疆）项目（编号：2011－2013）

马燕萍，女，主管药师

＊通信作者：田莉，女，博士，副教授