摩腹对雄性去势大鼠皮质醇的影响

马尚清，樊 竹，徐嘉兴，姚慧娟，张 月，陈幼楠

(北京中医药大学针灸推拿学院，北京100029)

随着人们对自身健康关注度的增加，男性更年期越来越受到重视。所谓男性更年期，是一种男性的、伴随增龄而逐渐出现的雄激素水平降低状态［1］，是内分泌系统紊乱的表现，40岁男性人群中雄激素缺乏的发生率为2%～5%，70岁时则升至30%～70%［2］，而其原因多与睾丸的退化有关。雄激素水平的降低将导致下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴(HPA轴)分泌功能的紊乱，而HPA轴分泌功能的紊乱往往导致糖尿病、抑郁症等多种疾病的发生，肾上腺皮质是性腺轴与HPA轴发生相互作用的重要区域［3］。摩腹作为腹部按摩的经典手法直接作用于皮肤，而皮肤与中枢神经系统有相同的神经外胚层来源，与中枢的HPA轴系统可能存在着某种联系［4］。推拿对内分泌疾病有着很好的疗效，因此推测摩腹可能与改善肾上腺皮质的分泌功能有关。本文通过对血清激素的检测及肾上腺皮质的形态观察，探讨摩腹对雄性去势大鼠HPA轴分泌功能的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 健康SPF级SD大鼠，雄性，40只，体质量(200±20)g，由北京斯贝福实验动物技术有限公司提供［SCXK(京)2012-0001］。随机分为模型摩腹组、模型对照组、空白摩腹组、空白对照组，每组10只。对动物的处置符合《关于善待实验动物的指导性意见》。

1.2 主要试剂与仪器 血清皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺激素释放激素(CRH)ELISA检测试剂盒;光学显微镜(日本Nikon公司)。

1.3 模型制备 模型对照组、模型摩腹组的20只大鼠造模方法采用邵氏法［5］。麻醉后大鼠仰卧位固定，将大鼠的睾丸挤入阴囊底部，阴囊术区碘伏消毒，切开阴囊皮肤、内膜和总鞘膜。将睾丸挤出阴囊外，在睾丸上方的精索处结扎，切断精索并摘除睾丸，将精索断端退入鞘膜管内，缝合组织及皮肤。同一程序切除另一侧的睾丸。连续肌注青霉素3 d预防感染，5×104U/只，1次/d，静养1周待伤口愈合。

1.4 干预方法 模型摩腹组大鼠造模后进行摩腹干预，以自制黑布袋套住大鼠头部，减少大鼠恐惧心理。以左手固定大鼠于俯卧位，右手食、中指并排伸至腹部，摩腹区域涵盖肋弓下至下腹部区域，力度以不带动皮肤滑动为准。操作程序为逆时针摩腹5 min(60圈/min)，顺时针摩腹5 min(60圈/min)，隔日摩腹1次，连续10周［6］。模型对照组大鼠造模后同期正常饲养并作套袋处理。空白摩腹组大鼠不造模，与模型摩腹组行相同的摩腹刺激。空白对照组大鼠不造模，同期正常饲养并作套袋处理。由于饲养过程中不确定因素导致死亡者剔除。

1.5 指标检测

1.5.1 样本采集 造模后第3，13周，所有大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉，常规消毒，心脏取血。第13周取血后暴露腹腔迅速剥离左侧肾上腺，以10%中性甲醛缓冲溶液固定。

1.5.2 血清激素水平测定 收集血样后分离血清，采用ELISA法测定各组大鼠血清CORT、ACTH和CRH水平。

1.5.3 肾上腺皮质形态观察 取经10%中性甲醛缓冲液固定的肾上腺组织，常规脱水后石蜡包埋，4～5 μm切片，常规脱蜡、水化，苏木精衬染10 min，水洗1 min，0.5%伊红着色5 min，常规脱水、透明、封片，在光学显微镜下观察各组大鼠肾上腺皮质形态学改变。

1.6 统计学方法 运用SPSS 17.0软件分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，对数据进行正态性检验，采用t检验与非参数检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠体质量比较 各组大鼠随机分组，各组平均体质量基本保持一致(370±10)g，当干预结束后发现空白摩腹组与空白对照组的体质量基本保持一致(440±10)g，模型摩腹组的体质量较其他2组有升高(450±10)g，模型对照组体质量升高更为显著(473±10)g，高于其他各组。

2.2 各组大鼠血清激素水平比较 造模后第3周，两模型组CORT、ACTH、CRH与空白对照组相比含量减少，差异有统计学意义(P＜0.05)，表明模型制备成功。见表1，表2。

表1 造模后第3周雄性大鼠各组激素含量比较(±s)ng/mL

表1 造模后第3周雄性大鼠各组激素含量比较(±s)ng/mL

注:与空白对照组比较，#P＜0.05

CORT ACTH CRH空白对照组 8 37.11 ±13.88 6.58 ±1.69 4.39 ±1.01组 别 n空白摩腹组 8 40.22 ±22.88 6.92 ±1.15 3.84 ±0.33模型对照组 10 2.99 ± 0.94# 4.57 ±0.35# 3.24 ±0.54#模型摩腹组 9 3.72 ± 0.92# 4.63 ±0.38# 3.42 ±0.44#

表2 造模后第13周雄性大鼠各组激素含量比较(±s)ng/mL

表2 造模后第13周雄性大鼠各组激素含量比较(±s)ng/mL

注:与空白对照组比较，#P＜0.05;与模型对照组比较，△P＜0.05

CORT ACTH CRH空白对照组 8 53.07 ±42.74组 别 n 4.28 ±0.93 3.36 ±0.64空白摩腹组 8 124.30 ±97.87 5.07 ±1.29 4.01 ±0.62模型对照组 10 1.20 ± 0.42# 3.93 ±0.44 3.58 ±0.69模型摩腹组 9 2.14 ± 0.68△4.34 ±0.83 3.98 ±0.41

2.3 光镜下肾上腺皮质形态观察 空白对照组肾上腺皮质区球状带见细胞呈低柱状或立方形，排列成球形细胞团，核小而圆，染色深，胞质少，弱嗜碱性，含少量脂肪空泡;束状带细胞体积大，胞核染色浅，位于中央。胞质内有许多小脂肪空泡;网状带见细胞较束状带的小，胞核亦小，染色深，胞质弱嗜酸性，含有少量脂肪空泡和较多脂褐素。空白摩腹组肾上腺皮质区各层细胞与空白对照组形态基本一致;模型对照组束状带、网状带厚度降低，束状带细胞体积减小，核染色深，核仁不明显，固缩细胞增多。模型摩腹组束状带、网状带厚度增加，细胞体积较大，核染色较浅，核仁明显可见，伴行毛细血管较丰富，见图1。

图1 光镜下肾上腺皮质形态观察(×40)

3 讨论

更年期的出现，主要是由于体内的内分泌激素水平发生了剧烈的变化，从而表现出一些自觉症状和体征如潮热盗汗、性情急躁、心悸失眠、腰膝酸软等［7］。男性更年期则大部分是睾丸内分泌功能改变，导致雄激素水平的降低，进而使HPA轴分泌功能发生紊乱，这与大鼠去势后体内发生的变化相似。CORT是HPA轴分泌的重要激素，其变化也是影响男性更年期相关症状的重要因素，它的分泌不仅对人的情绪、免疫细胞的生成、血压的维持，以及结缔组织的维护有影响，而且对人体内蛋白质和脂类的代谢也有一定的作用［8］。

摩法作为最古老的推拿手法之一，很早便有记载，《礼记·内则》云:“灌手以摩之，去其皱”;《素问·病能论篇第四十六》曰:“切之摩之”;《厘正按摩要术》说:“揉法，推、运、搓、摇等法，均从摩法出也。”可见摩法是推拿治疗中的一个大法。作为中医推拿中的一个重要手法，摩法在临床中有着非常广泛的应用，常配合摩膏或单独徒手使用，其治疗内分泌及生殖系统疾病有良好的疗效。所谓摩腹，就是将摩法主要运用于腹部的按摩手法。摩腹不仅运用于治疗，同时也运用于养生保健中，清代《女丹合编选注·女丹要言》介绍妇女自我保健按摩时说“妇女可以按摩之法用之。当早起静坐一刻，以右手向内按定心，左手在腹脐抚摸二十下，随手摩至腰，一揉一拍”。方开的《延年九转法》更是大量论述摩腹，提出长期摩腹具有“却病延年”之功。正是由于摩法在治疗与保健中的特殊作用，《素问·至真要大论》才将整个手法概以“摩之”［9］。有研究［10］表明，推拿按摩手法的适度刺激，经内侧感觉传导系统，使人体处于一种良性的应激状态中，促进人体β-内啡肽等相关物质的合成，从而影响内分泌功能，影响生长发育、消化吸收、损伤康复和免疫应激。

本实验结果提示摩腹对于生理状态下HPA轴代谢无干预作用，但对病理状态下的HPA轴的分泌可起到调节作用。模型摩腹组CORT与模型对照组相比有明显的变化，而ACTH与CRH含量无明显变化，推测可能有如下原因:摩腹作为腹部的一种推拿手法，作用于腹部的皮肤感受器、神经、血管等组织，对腹腔脏器的功能失调有明确的治疗作用;肾上腺位于腹腔后侧，被腹膜覆盖，故当摩腹刺激腹部的各种皮肤、血管感受器时，可能影响了肾上腺皮质的分泌，体现了推拿手法的近治作用［1］。本次实验所测样本来源均为外周血，并未对下丘脑与垂体局部的激素水平进行检测。丘脑和垂体作为HPA轴的上游调节中枢，受多方面的因素调节，这种调节可能对外周血中ACTH和CRH的含量产生影响，这也许是外周血中ACTH与CRH的含量差异无统计学意义的原因。同时，对于上游调节中枢来说，摩腹属于远端干预，这种干预若想对其产生影响必定需要一定量的积累，本次试验仅干预了10周，远少于临床内分泌疾病常规调理时长，ACTH与CRH的阴性结果可能与此也有重要关联。

综上所述，摩腹可以改变病理状态下HPA轴中CORT的分泌状态，这种改变的途径是“局部效应”，体现了推拿按摩可以改善系统的内能，起到调节信息的作用。鉴于本实验关于CORT的研究结果，笔者认为摩腹可作为一种日常改善男性更年期症状的保健手法来应用于临床。

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