高效液相色谱法测定万通炎康片清膏中异嗪皮啶的含量

2015-01-16卢晓华

广西中医药大学学报 2015年1期

卢晓华

（广西万通制药有限公司，广西南宁 530003）

万通炎康片由苦玄参、肿节风经提取加工制成，肿节风为处方中的主药，异嗪皮啶为肿节风药材中抗菌消炎、抗肿瘤的有效成分，是该制剂的含量测定指标［1］。在生产过程中，通过监测万通炎康片清膏的异嗪皮啶含量，在中间环节可有效地控制产品质量，评估药材在生产过程中的转移率。本文应用高效液相色谱法测定万通炎康片清膏中异嗪皮啶的含量，方法简单、结果准确、灵敏度高，现报道如下。

1 实验材料

1.1 仪器高效液相色谱仪：日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，LC-10Atvp泵，SPD-10Avp可变波长检测器；威玛龙色谱工作站；WondaSil GL Sciences C18柱（5.0 μm，4.6 mm×250 mm）。1.2 试药乙腈：色谱纯；水：超纯水；磷酸：色谱纯；异嗪皮啶对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110837-201206，供含量测定用）；万通炎康清膏（由广西万通制药有限公司提供，批号：131101、131104、131106、131110、131112、131128、131130、131201、131203、131205）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Wondasil GL Sciences C18柱（5.0 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（25∶75）；流速：1.0 ml/min；检测波长：344 nm；理论板数按异嗪皮啶计算不低于3 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备取异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取万通炎康片清膏约1 g，精密称定，置锥形瓶中，加水20 ml，超声处理20 min，放冷，转移至分液漏斗中，加三氯甲烷轻轻振摇提取5次，每次10 ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备按处方比例制备缺肿节风药材的万通炎康片清膏，精密称取清膏适量，按供试品溶液的制备方法进行提取制成阴性样品溶液。

取对照品、供试品和阴性样品溶液，分别进样10 μl，异嗪皮啶保留时间大约为9 min，在此色谱条件下，供试品可达到完全分离，阴性样品在9 min出峰处无干扰峰。HPLC图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察取异嗪皮啶对照品适量，精密称定为8.125 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml溶液，分别置于 50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积值，以峰面积值为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，并求得标准曲线回归方程为：Y=35 498 X-15 176，r=0.9998，异嗪皮啶在0.065～0.325 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，峰面积的RSD为0.39%（n=5）。

2.3.3 稳定性试验取同一供试品（批号：131101），依法制备供试品溶液，每隔 2 h（0，2，4，6，8，10 h）进样 1 次，进行了10 h考察，峰面积的RSD为1.28%（n=6），结果表明供试品溶液在10 h内测定保持稳定。

2.3.4 重现性试验分别取同一批样品（批号：131101）5份，每份重约1 g，精密称定，按“样品测定”方法进行提取、测定，计算，结果其平均含量为 250.87 μg/g，RSD 为 0.77%（n=5）。

2.3.5 加样回收率试验取已测知含量的样品（批号：131101，含量为0.2512 mg/g）1 g，精密称定。精密加入异嗪皮啶对照品溶液1 ml（浓度0.2400 mg/ml），按“样品测定”方法进行提取，测定，计算，结果异嗪皮啶平均回收率98.56%，RSD为1.02%（n=6）。见表 1。