癃开颗粒不同制备工艺的主要药效学比较

癃开颗粒不同制备工艺的主要药效学比较

谢家骏1， 乔正东2， 成 苗3
（1.上海中医药大学，上海200127；2.上海市浦东医院，上海 201399；3.上海市中药研究所，上海201401）

目的观察比较癃开颗粒挥发油对其制剂主要药效学活性的影响，为设计合适的制备工艺提供实验依据。方法给丙睾诱发前列腺增生模型小鼠灌胃癃开颗粒含挥发油制剂 （癃开A）或癃开颗粒去挥发油制剂 （癃开B）10、20、40 g/kg，每天1次，连续14 d，末次给药结束24 h后摘取小鼠前列腺，称定质量，并换算成前列腺指数作组间比较。结果癃开A和癃开B对丙睾模型小鼠前列腺湿质量和指数均有一定的抑制作用，但两者相应剂量组之间均无显著性差异 （P＞0.05）。结论癃开颗粒含挥发油制剂与去挥发油制剂比较，两者对前列腺增生的抑制程度相当，提示采用去挥发油制备工艺有药效保障，可用于工业化生产。

癃开颗粒；挥发油；制备工艺；前列腺增生；小鼠模型

良性前列腺增生症（benign prostate hyperplasia，BPH）是一种以前列腺间质和上皮细胞增生为特征，与年龄和性激素相关的中老年慢性疾病［1］，临床主要表现为前列腺肥大，尿频、尿急、夜尿增多及急迫性尿失禁，严重者出现尿潴留、血尿、肾积水。流行病学调查显示，我国＞60岁的常住城乡老年人前列腺增生总患病率为43.68%［2］，国外更高达50%以上［3-4］。随着全球人口老年化进程的加快，其发病率逐年升高，已严重影响到人们日常工作和生活质量［5］。目前，探索良性前列腺增生症发病机理，以及寻找相关治疗药物已成为研究热点［6-7］。癃开颗粒由淫羊藿、黄芪、牛膝等中药组成，具有补肾益气、活血化瘀之功效，可用于改善轻、中度中老年良性前列腺增生症 （肾虚血瘀证）患者出现的夜尿频数、排尿困难、腰膝酸软、小腹胀痛等症状［8］。本实验以丙睾所致小鼠前列腺增生为指标［9］，观察比较癃开颗粒含挥发油制剂与去挥发油制剂对前列腺增生活性的影响，为其有效部位的选定及制备工艺的设计提供科学依据。

1 实验材料

1.1 受试药物 癃开颗粒含挥发油制剂 （癃开A），由淫羊藿、生黄芪、杜仲 （淡盐水炒）、女贞子 （酒制）、怀牛膝、三棱、莪术、赤芍、当归尾、滑石等组成，按标准水提、浓缩、制粒工艺制备而成，每1 g制剂相当于生药2 g（中药研究所药学研究室，批号000801）；癃开颗粒去挥发油制剂 （癃开B，中药研究所药学研究室，批号000802）。

1.2 对照药 保列治（finasteride，MSD），10片/盒，5 mg/片 （美国默沙东公司，批号200541）。

1.3 模型药 丙酸睾酮注射液（testosterone propionate injection，TPI），10支/盒，25 mg/支（上海第九制药厂，批号00105Ⅱ），使用时用液体石蜡稀释至1mg/mL。

1.4 实验动物 ICR小鼠，雄性，体质量18～22 g（上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号SCXK［沪］2003-0002）。环境条件为温度 （22±2）℃，相对湿度60%～70%，不锈钢笼具分笼饲养，饲以鼠用固体高压料。实验前禁食12 h，不禁水。

2 实验方法

ICR小鼠90只，雄性，按体质量随机分成空白组、模型组、癃开A（低、中、高）组、癃开B（低、中、高）组、阳性药组，共9组，每组10只。除空白组皮下注射同容积液体石蜡外，其余各组小鼠分别皮下注射TPI 10mg/kg，每日1次，连续14 d。同时，癃开A和癃开B组小鼠分别灌服癃开A 10、20、40 g/kg和癃开B 10、20、40 g/kg，阳性药组小鼠灌服保列治2 mg/kg，模型组和空白组小鼠则分别灌服蒸馏水，灌服容积均为20 mL/kg，每日1次，连续14 d。末次给药后24 h，处死动物，摘取前列腺称定质量，并换算成前列腺指数作组间比较。前列腺指数计算方法如下。

前列腺指数 （%） =前列腺质量 （g）÷体质量 （g）×100%

采用SPSS 13.0软件进行统计分析，计量资料采用“均数±标准差 （x±s）”表示，两组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有显著性。

3 实验结果

3.1 对体质量的影响 癃开A中、高剂量组和癃开B高剂量组均能减轻模型小鼠的体质量。其中，癃开A中剂量组小鼠的体质量降低程度与模型组和癃开B相应剂量组比较，差异均具有显著性意义 （P＜0.05）。

3.2 对前列腺质量的影响 癃开A与癃开B的低、中、高剂量组，以及阳性药组对丙睾模型小鼠前列腺湿质量和指数均有一定的抑制作用。其中，癃开A低、中剂量组前列腺湿质量和低剂量组前列腺指数、癃开B中、高剂量组以及阳性药组前列腺湿质量和指数与相应模型组比较，均具有显著性或非常显著性差异 （P＜0.05或P＜0.01），而且癃开B还显示出一定的量效关系。另外，癃开A与癃开B相应剂量组之间比较，在抑制模型小鼠前列腺湿质量和指数方面均无显著性差异 （P＞0.05），见表1。

表1 癃开颗粒不同制备工艺对丙睾所致小鼠前列腺增生的影响 (n=10,x±s)

结果显示，癃开A和癃开B对模型小鼠前列腺湿质量和指数均有一定的抑制作用，但将两者相应剂量组比较，均无显著性差异 （P＞0.05）。

4 讨论

癃开颗粒源于国家级名老中医王绵之教授几十年的临床验方，是通过现代提取方法科学加工而成的纯中药制剂。药效学实验结果表明［9］，它可减轻正常幼年小鼠前列腺湿质量及其DNA含有量，对由丙酸睾丸素或植入胎鼠尿生殖窦诱发的前列腺增生具有抑制作用；动物急性及长期毒性实验结果［9-10］显示，该药最大给药量为临床拟用剂量的100倍。另外。以临床拟用剂量50倍给药，每日1次，连续3个月，发现除动物前列腺组织腺上皮轻度萎缩，细胞由柱状向扁平或梭形移生，以及腺腔变小外，其他指标 （如一般行为变化、全血、血清生化、尿液检测、以及组织病理学镜检）均未发现明显异常，提示了癃开颗粒对良性前列腺增生症有疗效，且安全无明显毒副作用。

前列腺是性激素的依赖性器官，其中雄性激素对前列腺的生长、结构和功能起着重要的作用。在前列腺组织内，雄性激素的主要作用形式是睾酮转化为其代谢产物双氢睾酮 （DHT）［11］。血浆中游离型睾酮进入前列腺细胞内，在5a-还原酶作用下首先不可逆地转变为DHT，并与雄性激素受体结合形成复合物，作用于其特异性的DNA位点上，诱导雄性激素依赖性基因的复制和转录增加，蛋白合成增多。当DHT异常升高时，其可促使前列腺组织广泛增殖，导致良性前列腺增生症的发生［12］。基于此双氢睾酮学说，加上为了便于产业化，我们在对该药工艺路线的研究过程中，制备了含挥发油部位的癃开颗粒制剂 （癃开A）和去挥发油部位的癃开颗粒制剂 （癃开B）。按照药物的定义，癃开A与癃开B处方一致，剂量相同，提取溶媒均为水，故其提取物应同属一种药物。然而，两者也有区别，主要在于提取工艺模拟临床使用方法程度的掌控。癃开A的制备工艺采用先萃取挥发油，后将其加入到水提浸膏中，故富集了处方药材中的挥发油；癃开B的制备工艺采用直接煎煮提取，其中的挥发油在长时间沸腾状态下大量挥发，从而基本消失。因此，评价该两种制备工艺对其产物主要药效学及强度的影响，对于制定含或去挥发油的工艺路线至关重要。遵照国家CFDA颁布的 《药品注册管理办法》有关要求，参照临床用药实际情况，考虑到处方中挥发油成分对主要药效学活性的潜在影响，课题组设计了富含或不含挥发油的两条工艺路线，将所得到的提取物通过主要药效学实验进行比较，用于指导合理的制备工艺路线［13］。

癃开颗粒主要治疗肾虚瘀阻证型良性前列腺增生症，即前列腺肥大，故课题组设定的用于临床疗效评价的客观指标是前列腺大小、最大尿流率 （Qmax）和残余尿量［8］，其中前列腺大小是核心指标。由于中成药中未见有明确抗前列腺增生的药物，故选用保列治作为阳性药物。在受试药物的剂量设定上，结合主要药效学实验结果，将受试药物癃开A与癃开B的低、中、高组剂量均设置为10、20、40 g/kg，分别相当于临床剂量的5、10、20倍。为了便于产业化，我们制备了含和去挥发油部位的癃开颗粒制剂，并以丙睾诱发小鼠前列腺增生为指标，观察比较两者对其活性的影响。结果显示，癃开颗粒含和去挥发油部位制剂对丙睾诱发小鼠前列腺增生均有一定的抑制作用，但相应的同剂量组之间无显著性差异。由此可知，癃开颗粒含挥发油部位并非是防治良性前列腺增生症的主要活性部位，这也为选用生产成本比较低的去挥发油制剂工艺路线和癃开颗粒产业化提供了科学依据。

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R285.6

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：1001-1528（2015）07-1568-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.038

2014-09-12

谢家骏 （1959—），男，研究员，硕士生导师，研究方向为药理毒理学研究与中药新药开发。Tel： （021）51322395，E-mail：xiejj001@163.com