栀子化学成分的LC-MSD Trap与UV分析

叶日贵， 白梅荣， 包明兰， 拉喜那木吉拉， 佟玉风， 巴根那

（内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽028000）

栀子化学成分的LC-MSD Trap与UV分析

叶日贵， 白梅荣， 包明兰， 拉喜那木吉拉， 佟玉风， 巴根那*

（内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽028000）

目的采用液质联用技术和紫外检测法，对蒙药栀子的化学成分进行结构鉴定，为其药理作用的进一步研究及临床应用提供科学依据。方法色谱分离采用Venusil MPC18色谱柱（4.6 mm×300 mm，5μm）；流动相为0.1%甲酸水溶液和甲醇，梯度洗脱；体积流量为1.0mL/min；质谱定性采用多级离子阱质谱，负离子模式扫描；紫外检测范围为210～400 nm。结果在优化后的液质联用条件下，通过液相色谱/离子阱质谱 （LC/MSD Trap）法检测出栀子中的13个成分。经文献查阅，化合物3、5、6、8、11为首次经液质联用从栀子中得到。结论LC/MSD Trap联用技术为分离和鉴定栀子中的化学成分确定一种快速、科学的分析方法。

栀子；化学成分；LC/MSD Trap；UV

栀子是一味重要的蒙药药材，别名莫斯勒，是茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的成熟干燥果实，产于我国长江以南各省，以湖南、江西产为佳，10月果实成熟，果皮呈黄色时采摘，除去果柄及杂质，晒干或烘干即得［1］。栀子味苦，性凉，效钝、糙，具有清血热、明目、祛巴达干希日、滋补、调元等功效，主治血热、肝热、面目发黄、血希日性眼病、肾热、膀胱热、口渴等症状［1］。

关于栀子的化学成分分离、结构鉴定研究、药理作用研究已成为时下热门的研究项目［2-6］。研究表明，栀子中含有环烯醚萜类、三萜类、香豆素类、有机酸类、西红花酸类、黄酮类、木脂素类、挥发油、多糖、皂苷及其他类化合物［7-9］。其中，具有代表性，并有药理作用的化合物主要为环烯醚萜类、西红花酸类、三萜类、有机酸类、黄酮类、木脂素类和挥发油［10-12］。诸多药理实验表明，环烯醚萜类成分具有保肝利胆、抗脑缺血损伤、抗焦虑、抗痴呆、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗血栓等活性［13］；挥发油具有止咳祛痰、平喘、消炎、解热镇痛、解痉、健胃、利尿、降压、强心、杀虫和抗癌等作用［14］；木脂素具有促进血液循环、消炎杀菌、活化身体机能细胞、修复细胞等功能［15］。其中，环烯醚萜类成分尤为重要，并且其药理作用也很显著［16］。

本实验采用液相色谱/离子阱质谱（LC/MSD Trap）联用技术，为鉴定栀子化学成分建立一种快速、科学的分析方法。

1 仪器和材料

Agilent1100 series LC-MSD液质联用仪，包括Agilent SL型多级离子阱质谱仪、低压四元梯度泵、二级管阵列检测器 （DAD）、自动进样器、柱温箱、Chemistation化学工作站等（美国Agilent Technologies公司）。栀子（山东嘉泰中药饮片有限公司，批号 120310340）。甲醇、甲酸均为色谱纯（美国Tedia公司）；水为娃哈哈纯净水 （杭州娃哈哈集团有限公司）。

2 实验方法

2.1 分析条件

2.1.1 色谱条件 Venusil MP C18色谱柱（4.6 mm×300 mm，5μm）；流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱 （0～10 min，10%～20%B；10～20 min，20%～40%B；20～40 min，40%～60%B；40～60 min，60%～75% B；60～80 min，75%～85%B；80～90 min，85%～100%B）；柱温35℃；进样体积30μL；体积流量1.0 mL/min；检测波长237 nm。

2.1.2 质谱条件 ESI电离源，负离子模式检测；扫描范围50～800 m/z；干燥气温度350℃；干燥气流量9.0 L/min；雾化气压强35.0 psi（1 psi= 6.895 kPa）；毛细管电压4 kV。实验数据采用Data Analysis软件处理。

2.2 供试品溶液的制备 取栀子药材适量，粉碎后称取1 kg，依次加入10倍量、8倍量、6倍量的水进行加热提取，加热时间分别为1.5、1、1 h，合并3份药液，加热浓缩，烘干后得到浸膏。精密称取栀子浸膏0.25 g，倒入50 mL锥形瓶中，加25 mL甲醇后密塞，称定质量，超声提取30 min，冷却后用甲醇补足质量，摇匀，静置1 h。精密吸取上清液2 mL，置于10 m L量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液，“2.1”项下条件进行分析。

2.3 栀子化学成分表格的制作 查阅有关栀子化学成分的文献，结果共找到118个成分，包括环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、香豆素类、西红花酸类等。接着，制作栀子化学成分表格，包括分子质量、分子式、结构等信息。

3 紫外吸收分析

化合物1～5、7～10、13均为环烯醚萜类。其中，化合物1、2、13的λmax均为236 nm；化合物3～5的λmax均为238 nm；化合物7～10的λmax均为240 nm，即为分子中发色团α，β-不饱和酯的羰基吸收，与文献 ［17］报道一致，并且化合物9与对照品溶液的紫外吸收图一致。

化合物6、11、12为有机酸类，共有两处强吸收。其中，化合物6的 λmax为300 nm，λ次吸收为245 nm；化合物11的λmax为310 nm，λ次吸收为237 nm；化合物12的λmax为314 nm，λ次吸收为232.5 nm，即为有机酸类、酯类、醛类等成分的紫外吸收，与文献 ［17-18］报道一致。

4 结果与讨论

4.1 提取溶剂的选择 因本实验主要针对临床用药，故选择用水回流来提取栀子药材。

4.2 实验条件的优化 本实验在考察乙腈-水和甲醇-水两种体系时发现，甲醇和乙腈的效果相当，考虑到成本因素，选择甲醇作为有机相。另外，还比较了质谱检测方式，发现在负离子模式下，质谱响应更强，并且峰容量更大，故选择ESI负离子模式。

4.3 鉴定过程 在优化后的 “2.1”项条件下，共得到13个峰 （图1和表1），并对其进行了鉴定，发现这些化合物均为环烯醚萜类或有机酸类成分。首先，精确计算出ESI-MS上所得化合物的分子质量，再通过建立的数据库查看是否有同样分子质量者，初步鉴定栀子的化学成分。然后，选择合适的分子离子峰进行裂解，通过二级质谱裂解方式，获得与化合物结构相关的碎片离子，再对比其他碎片信息，结合紫外吸收波长、分子质量、碎片离子峰、保留时间等参数，进一步推断其结构，共鉴定出9个化合物，见图2。

图1 栀子的负离子模式总离子流图Fig.1 Negative total ion ch romatogram of extracts of Gardenia jasm inoides Ellis

表1 栀子化学成分的鉴定Tab.1 Iden tification of chem ical constituents from Gardenia jasm inoides Ellis

以鸡屎藤次苷甲酯为例。首先，通过该峰的准分子离子峰m/z 403.5，可确定其目标分子量为404.5，通过对照数据库后发现，它与鸡屎藤次苷甲酯、去乙酰车叶草苷酸甲酯、栀子苷对应，由于这3种化学成分都是环烯醚萜类，且结构相似，故其紫外吸收没有意义。然后，根据m/z403.5的二级质谱裂解图进行分析，结果发现所得二级质谱图（图3）中有明显的m/z 240.9［M-H-C6H10O5］-、127［M-H-C6H10O5-C5H6O3］-等碎片离子信息，从而推断出其裂解途径，见图4。结合保留时间、紫外吸收波长、碎片离子等参数，最终确定该峰为鸡屎藤次苷甲酯。采用类似的方法，对其他化学成分也进行相应的鉴定。

图2 化合物结构Fig.2 Structures of com pounds

图3 鸡屎藤次苷甲酯二级质谱图Fig.3 Two stagemass spectrum of scandosidemethyl ester

图4 鸡屎藤次苷甲酯裂解途径Fig.4 Fragmentation pathway of scandosidemethyl ester

5 结论

经液相色谱/离子阱质谱（LC/MSD Trap）联用分析，并通过数据库匹配、紫外吸收和二级质谱分析，本实验对蒙药栀子中的化学成分进行结构鉴定，结果确定了9个化合物，包括环烯醚萜类和有机酸类，为今后对栀子的进一步研究、临床用药及质量控制奠定了基础。

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Analysis of chem ical constituents from Gardenia jasm inoides by LC-MSD Trap and UV

Yerigui， BAIMei-rong， BAO Ming-lan， Laxinamujila， TONG Yu-feng， Bagenna*
（College of Mongolian Medicineand Phamacy，Inner Mongolia University for the Nationalities，Tongliao 028000，China）

AIMTo analyze the structures of chemical constituents from traditionalmongolianmedicine Gardenia jasminoides Ellisby LC-MSD Trap and UV，providing scientific basis for further study and clinical application of its pharmacological activities.METHODSVenusilMPC18Column（4.6mm×300 mm，5μm）was used.The mobile phase consisted of0.1%formic acid in water andmethanolwas used in gradient elution；the flow rate was 1.0 m L/min；multistage electrospray ion trap mass spectrometry was applied for qualitative analysis under negative ion mode；the UV detection rangewas210-400 nm.RESULTSUnder optimized conditions，13 constituents in Gardenia jasminoides Elliswere identified by liquid chromatography/ion trapmass spectrometry（LC/MSD Trap）. Through the literature search，compounds3，5，6，8，11were firstly isolated from Gardenia jasminoides Ellis by thismethod.CONCLUSIONA fast and scientific analysismethod is established，which can isolate and identify the chemical constituents of Gardenia jasminoides Ellis.

Gardenia jasminoides Ellis；chemical constituents；LC/MSD Trap；UV

R284.1

：A

：1001-1528（2015）07-1503-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.023

2014-08-25

国家自然科学基金项目 （81360673）

叶日贵 （1988—），女 （蒙古族），硕士生，研究方向为蒙药与方剂学。Tel：15947159161，E-mail：yerigui0205@163.com

*通信作者：巴根那 （1960—），男 （蒙古族），博士，教授，博士生导师，研究方向为蒙药与方剂学。Tel：（0475）8313130，E-mail：bagenna@126.com