pH-时滞结合型丹皮酚结肠靶向片的包衣处方考察

徐本亮， 蔡芸芸， 张 琦， 浦益琼， 王 冰*， 张 彤， 陶建生， 吴佩颖

（1.上海中医药大学，上海201203；2.复旦大学附属肿瘤医院闵行分院，上海200240；3.上海杏灵科技药业股份有限公司，上海201703）

[制剂]

pH-时滞结合型丹皮酚结肠靶向片的包衣处方考察

徐本亮1， 蔡芸芸2#， 张 琦1， 浦益琼1， 王 冰1*， 张 彤1， 陶建生1， 吴佩颖3*

（1.上海中医药大学，上海201203；2.复旦大学附属肿瘤医院闵行分院，上海200240；3.上海杏灵科技药业股份有限公司，上海201703）

目的对丹皮酚片进行包衣，制备pH-时滞结合型丹皮酚结肠靶向片剂。方法通过确定各包衣层增重，考察体外积累释放度。结果以美多秀E6为隔离层增重1.7%，以10%PVP苏丽丝为时滞层增重3%，以雅克宜为肠溶层增重3.5%，制得结肠靶向制剂在0.1mol/L HCl 2 h、PBS（pH 6.8）3 h释药小于10%，在PBS（pH 7.8～8.0）2 h后药物累计释放达到80%以上。结论制得的pH-时滞结合型丹皮酚结肠靶向片能够控制药物在模拟胃液pH环境中不释药或少释药，而在模拟小肠pH环境 （3 h后）和模拟结肠pH环境中大量释放，体外释放结果表明能够达到结肠定位释药目的。

丹皮酚；pH-时滞结合；结肠靶向；包衣工艺

炎症性肠病（IBD）是多见于回肠末端和临近结肠的肉芽肿结肠炎、节段性肠炎或局限性肠炎，是一种原因不明的直肠和结肠的慢性炎症性疾病［1］。现代医学普遍认为IBD发病机理的研究主要集中在感染炎症反应和免疫异常等方面［2］。丹皮酚（paeonol）是从中药徐长卿Cynanchum panic-ulatum Kitag.和牡丹Paeonia suffruticosa Andr.中提取分离出来的一种活性成分［3］，具有抗炎、抗变态反应、免疫调节、抗肿瘤等多种药理作用［4-6］，目前临床主要用于风湿炎症、抗过敏等［7］。因其稳定性差、水溶性低、易挥发，药动力学表明其体内半衰期短，吸收主要在小肠部位，常规口服制剂难以到达结肠部位，不适合用于IBD［8-10］。本实验根据人体胃肠道生理特点采用多层包衣的方法 （即以肠溶衣膜保护制剂安全通过胃部而不受胃不规则排空的影响，以时滞型包衣控制制剂到达结肠再大量释药）［11-13］，制备pH-时滞结合型丹皮酚结肠靶向制剂，尝试开发丹皮酚结肠靶向剂型，为IBD临床用药的开发提供前期研究基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent1200高效液相色谱系统（Agilent公司）；SK5200H超声波清洗仪 （上海科导超声仪器有限公司）；RCZ-6C1型药物溶出度仪（上海黄海药检仪器厂）；PHS-3C pH计 （上海精密科学仪器公司）；BS124S电子天平 （塞多利斯科学仪器有限公司）；BYW型无极调速包衣机 （宝鸡建华制药机械有限公司）；ZB-0.10/B-F30空气压缩机 （上海捷豹压缩机制造有限公司）；HT-833远红外线测温仪 （宏诚集业电子科技有限公司）；TGL-20B高速离心机 （上海安亭科学仪器厂）。

1.2 材料 丹皮酚片芯 （自制，含丹皮酚80 mg/片）；丹皮酚对照品 （0708-9704，中国食品药品检定研究院）；Methocel E6 LV（美多秀E6，上海卡乐康包衣技术有限公司）；水性乙基纤维素分散体（苏丽丝Surelease，上海卡乐康包衣技术有限公司）；水性丙烯酸树脂肠溶系统 （雅克宜93O，上海卡乐康包衣技术有限公司）；聚维酮 K30（PVP K30，ISP公司）；甲醇为色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 丹皮酚测定方法

2.1.1 色谱条件［10］迪马Diamonsil C18色谱柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动相为甲醇-水（65 ∶35）；柱温为25℃；体积流量为 1.0 mL/min；检测波长为274 nm。理论塔板数按丹皮酚峰计算应不低于5 000。

2.1.2 标准曲线制备 称取丹皮酚对照品10 mg 3份，精密称定，分别置于50 mL量瓶中，加15 m L甲醇溶解完全，再以0.1 mol/L HCl、磷酸盐缓冲液（PBS pH 6.8、7.8～8.0）定容得对照品母液。精密移取 0.125、0.625、1.25、2.5、5、7.5、10 mL置25 mL量瓶中，分别加0.1 mol/L HCl、PBS（pH 6.8）、PBS（pH 7.8～8.0）稀释至刻度，配制成系列浓度溶液，摇匀，微孔滤膜过滤，作为对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液各20μL分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以质量浓度 （μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算得0.1 mol/L HCl回归方程Y=97.938X+20.199，r=0.999 9，线性范围为1.035～82.8μg/mL；PBS（pH 6.8）回归方程Y= 95.566X+45.086，r=0.999 6，线性范围为1.035～82.8μg/mL；PBS（pH 7.8～8.0）回归方程Y=94.749X+21.78，r=0.999 8，线性范围为1.093～87.44μg/mL。

2.2 累积释放度测定方法 释放度测定介质为0.1 mol/L HCl、PBS（pH 6.8）、PBS（pH 7.8～8.0）（模拟胃液、小肠液、结肠液的pH环境），浆法转速100 r/min，温度（37±0.5）℃，以模拟包衣片在胃肠道pH环境中的释药行为。具体各包衣层释放度测定方法见表1。设定取样时间取样，每次取样1 mL，用微孔滤膜滤过，HPLC法测定，计算丹皮酚的体外累积释放度。不同溶出介质更换应于5 min内完成，每次取样后补充相同温度、体积的新鲜介质。

表1 累积释放度考察方法Tab.1 In vitro conditions for release test

根据实验设计，隔离层应在小肠下端、盲肠或结肠部位开始溶蚀，隔离层包衣所使用材料溶解不受pH影响，故使用PBS（pH 6.8）做溶出介质；时滞层应在进入小肠后开始暴露，其材料主要是水不溶性的乙基纤维素 （EC），同样不受pH影响，因此也使用PBS（pH 6.8）做溶出介质；肠溶衣是经胃进入小肠后开始溶蚀，其考察方法为先在0.1 mol/L HCl释放2h，再置PBS（pH 6.8）考察；完整复合包衣片应模拟人体胃肠道pH环境，先后在0.1 mol/L HCl 2h、PBS（pH 6.8）3 h和PBS（pH 7.8-8.0）3 h进行考察。

表1中隔离层为在片芯基础上包以胃溶型美多秀衣膜，时滞层为在隔离层基础上包以苏丽丝衣膜，肠溶层为隔离层基础上包以雅克宜肠溶衣膜，时滞-肠溶结合为在隔离层基础上先包以时滞层再包上肠溶层衣膜。

2.3 包衣方法 本实验采用多层包衣的方法制备结肠靶向片，将片芯由内至外先后包上隔离层、时滞层和肠溶层。首先将素片芯使用水溶性包衣材料包覆一层保护隔离衣，然后将包有隔离层的药片包以时滞层和肠溶层，考察在PBS（pH 6.8）中药物缓释3.5 h左右所需的时滞层增重和0.1 mol/L HCl中不释药所需的肠溶层增重。在考察达到肠溶效果所需的肠溶衣厚度时，为了避免缓释层的影响（有缓释层的药片在0.1 mol/L HCl中2 h内也只少量释药），采用包有隔离层的片芯直接包上肠溶衣膜方法考察肠溶层增重。考虑到完整包衣时，时滞层可能和肠溶层会相互影响，最后根据隔离层、时滞层、肠溶层考察结果，制备复合包衣片，考察药物释放以优化包衣处方。

包衣过程中包衣锅45°倾角，转速 40～50 r/min，压缩空气压力0.3～0.4 MPa，喷枪口径为1.5 mm。

2.3.1 隔离层包衣方法 将美多秀E6粉末分散于无水乙醇中，在不断搅拌条件下缓慢滴加蒸馏水，使乙醇∶水为6∶4，继续搅拌至完全溶解呈透明溶液，浓度6%（m/V）。

将片芯置包衣锅中，开动包衣锅，充分打磨片芯30 min，去除不合格的片芯，冷风吹去细粉尘，称定质量，包衣锅内预热，喷入包衣液，调节喷雾流量、包衣锅转速达到较佳的包衣效果，片床温度保持在30～35℃。

2.3.2 时滞层包衣方法 苏丽丝是卡乐康公司开发上市的乙基纤维素水分散体，其不受酸、碱度影响，依靠包衣厚度来控制释药时间，其含固量为25%的乙基纤维素水分散体，较黏稠，应根据其一般配制方法将其稀释至含固量为8%～15%。

15%苏丽丝配制：在不断搅拌条件下，缓慢滴加蒸馏水稀释，使其含固量为15%。

10%PVP K30-苏丽丝配制：称取相当于所需苏丽丝含固量10%的PVP K30，溶于蒸馏水后，在不断搅拌条件下缓慢滴加至苏丽丝原液中，稀释至总固质量分数为15%。

取包有隔离层片芯置包衣锅中，包衣锅内预热，喷入包衣液，调节喷雾流量、包衣锅转速达到较佳的包衣效果，片床温度保持在40℃。

2.3.3 肠溶层包衣方法 雅克宜是卡乐康公司开发的完全配方的全水肠溶包衣材料，可以快速分散在水溶剂中，使用方便，无需另外添加增塑剂，肠溶效果持久稳定。

在不断搅拌蒸馏水条件下，加入雅克宜粉末，使其含固量为20%（m/m），继续搅拌30 min，使其均匀分散。

取包有隔离层片芯或时滞层片芯置包衣锅中，包衣锅内预热，喷入包衣液，调节喷雾流量、包衣锅转速达到较佳的包衣效果，片床温度保持在30℃。

3 结果

3.1 隔离层包衣增重考察结果 因本层仅为起隔离作用，增重不需很大，经考察当增重达到1%以上时，片芯不会因40℃高温长时间加热而使丹皮酚含有量下降，能够保持片芯光滑完整，且包美多秀E6时片芯不易粘连，说明可以起到很好的隔离作用，对片芯能够起到很好的包覆作用，因此确定隔离层增重为1%～2%。同时考察隔离层对药物释放的影响，结果见图1。

图1 片芯与隔离层包衣片释放曲线比较 (n=6)Fig.1 Cumulative paeonol-release curves of different tablet cores and shielded-layers(n=6)

从图1中可以看出，美多秀E6的隔离层包衣对药物释放影响较小，与片芯相比释药稍慢，但在30～40 min内也可以将药物释放达到80%以上，基本可以认为隔离层对丹皮酚的释放不构成太大影响。

3.2 时滞层包衣增重考察结果 苏丽丝为乙基纤维素的水分散体，单纯包以苏丽丝能够达到缓控释作用，但通过预试验发现单纯以苏丽丝包衣较难以控制药物释放，可能由于片芯较大，较小的包衣增重变化对药物释放的延迟影响较大。如图2所示，单纯包苏丽丝当增重2.6%与3%时两者溶出释放曲线比较，可见当苏丽丝包衣增重2.6%基本无缓释作用，而增重3%时12 h释放仍未达到15%。因此，加入适量致孔剂能够更易于控制药物释放。常用致孔剂有HPMC、PVP、乳糖等，HPMC与苏丽丝相容性不是很好，一般多用PVP K30作致孔剂。本研究中采用PVP K30常用剂量，即相当于苏丽丝固含量的10%。

图2 不含致孔剂缓释层增重对丹皮酚释放度影响(n=6)Fig.2 Cumulative paeonol-release curves of different sustained-release coating layers w ithou t porogen (n=6)

考察含10%PVP时滞层包衣不同增重：当包衣增重2%、2.7%、3.1%、3.3%、4%时考察包衣片在PBS（pH 6.8）中的药物释放情况。药物释放结果见图3。

图3 含10%PVP不同缓释层增重对丹皮酚释放度影响(n=6)Fig.3 Cumulative paeonol-release curves of different weight gains of sustained-release coating layers w ith 10%PVP(n=6)

由上图可知，当包衣增重越大时，药物释放时间延长，即时滞性越好，当包衣增重2%，释药时滞仅为0.5 h，增重2.7%时约为1 h，增重达到3.1%时大量释药约在2 h之后，3.3%时约为3.5 h，而增重达到4%时包衣膜较难破裂而无法大量释药。原设计时滞时间在3.5 h左右，因此这里选用时滞层增重为3.3%。

3.3 肠溶层包衣增重考察结果 当肠溶衣包衣增重3.5%、7%、10%时，考察包衣片在0.1 moL/L HCl中2 h及PBS（pH6.8）中药物释放情况。药物释放结果见图4。

图4 不同肠溶包衣增重对丹皮酚释放度影响 (n=6)Fig.4 Cumulative paeonol-release curves of different weight gains of enterosoluble coating levels (n=6)

由上图可知，当包衣增3.5%以上时，0.1 mol/LHCl中2 h，药物释放度基本没有药物释放，在PBS（pH 6.8）中10 min药片就开始崩解，1.5 h累积释放都能达到80%以上，2 h达到95%以上。就单纯肠溶包衣，只要达到一定厚度后，增重大小对释放曲线影响不大，增重3.5%以上时就能保障药片在0.1 mol/L HCl中不释药，而较大增重时，由于片芯本身崩解快的原因，虽然肠溶衣膜没有完全溶蚀掉，包衣片也能较快崩解，药物也能较快释放，因此考虑到再包上时滞层后肠溶层不能快速溶蚀，肠溶层不宜包衣太厚。从3.5%肠溶层在0.1 mol/L HCl中情况看，时间达到3～4 h后，虽无药物释放但有肠溶层鼓起情况出现，因此肠溶层也不能太薄。综合考虑，这里选用肠溶层增重4%。

3.4 包衣工艺验证及优化 根据包衣工艺考察结果，制备两批双层包衣片，处方1时滞层增重3.2%、肠溶层增重4.4%，处方2时滞层增重3%、肠溶层增重3.5%，分别在0.1 mol/L HCl溶液2 h、PBS（pH 6.8）3 h、PBS（pH 7.8～8.0）至结束测定丹皮酚释放度。结果发现包衣片在pH 6.8以上溶液中时滞时间约为4.5 h以上，缓释时间略长于设计，因此调整时滞层及肠溶层包衣增重为3%、3.5%，释放结果见图5。

图5 包衣工艺优化(n=6)Fig.5 Cumulative paeonol-release curve of coated tablets (n=6)

从图5中可以看出，按处方1、2包衣方案两者都能保证在0.1 mol/L HCl中不释药，处方1在 pH 6.8以上PBS中时滞约为4.5 h以上，而处方2时滞约为3.5 h，因此确定采用处方2的包衣工艺，即时滞层增重3%，肠溶层增重3.5%。

4 讨论

随着包衣材料的研究和包衣技术的发展，包衣工艺越来越成熟，应用更方便。尤其是包衣材料水分散体的开发和应用，更有利于劳动保护和生产使用［14］，本实验所采用的苏丽丝和雅克宜均为水分散体。

丹皮酚性质不稳定，易挥发［15］，本实验采用美多秀做隔离层，较少的增重就能很好防止丹皮酚在包苏丽丝时大量挥发，又可以防止片芯粘连，但隔离层对药物溶出也有一定的影响，增重不宜过大。

苏丽丝为乙基纤维素的水分散体，文献报道，以乙基纤维素为主要成分的薄膜衣控制药物释放，对片芯要求较高，片芯具有良好的崩解性能的同时，崩解时限也不能相差太多［16］，否则包衣片药物释放差异较大。苏丽丝虽然是很好的缓释包衣材料，但直接包衣较难控制药物释放，加入10% PVP作为致孔剂后可以改善包衣可操控性。但从溶出曲线可以看到丹皮酚前期几乎很少或没有释放，且增重较小的差异对溶出影响很大，原因一方面可能是由于药片较大 （Φ8 mm），较小的增重衣膜厚度已增加不少，阻滞药物溶出，这样的工艺在小试实验研究时尚能控制，但大量包衣工艺可能还需要进一步研究；另一方面，可能由于丹皮酚水溶性差，在药片完整状态时溶出速度较慢。随着水分子通过膜孔进入内部，片芯吸水膨胀致使衣膜破裂，从而药物大量释放，这也是本实验时滞设计的原理，但包衣片衣膜破裂片芯崩解时间有一定的差异性，这一问题还有待进一步研究。

雅克宜作为全配方肠溶包衣材料，包衣温度、工艺要求都很低，对于普通肠溶制剂只要达到一定范围就能达到肠溶效果，但与时滞包衣结合时就要严格控制增重范围，包衣太少衣膜层薄水易渗透，达不到隔水效果，太厚则肠溶层不能快速溶蚀，水分子不能及时渗透过时滞层造成时滞过长。

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Study on coating pH-tim e process for colonal delayed-release Paeonol Tablets

XU Ben-liang1， CAIYun-yun2#， ZHANG Qi1， PU Yi-qiong1， WANG Bing1*， ZHANG Tong1，TAO Jian-sheng1， WU Pei-ying3*
（1.Shanghai University of Traditional ChineseMedicine，Shanghai201203，China；2.Minhang Branch of Shanghai Tumor Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai 200240，China；3.Shanghai Xingling Science and Technology Pharmaceutical Co.，Ltd，Shanghai 201703，China）

AIMTo develop satisfactory Paeonol Tablets coatwith pH-time for its delayed release in the colon.METHODSTo find the optimal procedure through investigation on the co-relationship between coatingmaterials，the weight-gain of every coating layer，and the cumulative release rates in vitro.RESULTSWith the use of Methocel E6 LV（1.7%weightgain）as shielded layer，Surelease（3%weightgain）as colonaldelayed-release layer and Acryl-EZE（3.5%weightgain）as enterosoluble layer，the release rate of the tabletwas less than 10% in 0.1 mol/L HCl（within 2 h）and in PBS（pH 6.8）（within 3 h）.However，more than 80%of release achieved in PBS（pH 7.8-8.0）（within 2 h）.CONCLUSIONAn optimal pH-time（0.1 mol/L HCl）coating process for Paeonol Tablets delayed-release in colon can restrain the active ingredient from releasing effectively，while in an environmentof PBS（pH 6.8，within 3 h）and PBS（pH 7.8-8.0），most colonal release can be expected

paeonol；pH-time delayed；colon-targeting；coating procedure

R944

：A

：1001-1528（2015）07-1447-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.012

2014-11-10

国家自然科学基金 （81303233），上海市教委知识服务平台项目，上海市教委预算内项目 （2014YSN28）

徐本亮 （1983—），男，助理研究员，从事中药口服靶向制剂研究。E-mail：xbl2004000@126.com #并列第一作者：蔡芸芸 （1984—），女，在职硕士，从事中西医结合临床。E-mail：14231230032@fudan.edu.cn

*通信作者：王 冰，女，副教授，从事中药纳米给药系统研究。E-mail：annabel_cn@163.com吴佩颖，男，教授，从事中药制药新技术研究及其产业化。E-mail：wupeiyingsh@163.com