益母草注射液有效部位对大鼠离体子宫活动的影响

谢晓芳， 熊 亮， 李 丹， 李 燕， 李梦婷， 彭 成*

（1.成都中医药大学药学院，四川成都610075；2.成都中医药大学药学院，中药材标准化教育部重点实验室，中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川成都610075）

益母草注射液有效部位对大鼠离体子宫活动的影响

谢晓芳1，2， 熊 亮1，2， 李 丹1，2， 李 燕1，2， 李梦婷1， 彭 成1，2*

（1.成都中医药大学药学院，四川成都610075；2.成都中医药大学药学院，中药材标准化教育部重点实验室，中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川成都610075）

目的探讨益母草注射液有效部位对正常大鼠离体子宫平滑肌活动的影响。方法由益母草注射液浸膏 （LH）制备益母草注射液水溶性非生物碱部位 （LH-1-A）和水溶性总生物碱部位 （LH-1-B），分别配成43.0、7.8、9.3 mg/mL，分别给予低、中、高剂量的LH（0.081、0.162、0.324mg/mL）、LH-1-A（0.029、0.058、0.116mg/mL）和LH-1-B（0.035、0.070、0.140 mg/mL）作用于正常雌性大鼠非痉挛性离体子宫，对缩宫素所致痉挛子宫给予高剂量，采用BL-420E生物机能系统记录子宫收缩的频率、张力 （最大值、最小值和平均值）和活动力，比较给药前后的变化。结果LH和LH-1-B可使正常大鼠非痉挛性离体子宫收缩张力 （最小值、平均值）和活动力明显增强，LH-1-A使子宫收缩频率、张力和活动力均明显下降，与给药前比较均有显著性差异 （P＜0.05或P＜0.01）；LH和LH-1-A对痉挛性离体子宫可明显降低张力最大值、平均值和活动力，LH-1-A还明显减少收缩频率，而LH-1-B则升高张力最小值和降低张力最大值、平均值，与造模后比较均有显著性差异 （P＜0.05或P＜0.01）。结论益母草注射液在体外具有收缩子宫和缓解子宫痉挛作用，其中水溶性生物碱部位是子宫收缩作用的主要物质基础，水溶性非生物碱部位是缓解子宫痉挛的主要物质基础。

益母草注射液；有效部位；离体子宫

益母草注射液是由中药益母草制备而来的中成药，属子宫收缩药，常用于产后子宫修复和产后止血，临床效果显著［1］。目前关于益母草注射液缩宫止血的临床研究很多，显示疗效显著、可靠，但其调节子宫活动的药理作用机制和活性物质基础尚不明确。虽有研究报道益母草生物碱是其缩宫的活性部位，但其非生物碱部位药理作用不明［2-3］。鉴于益母草注射液是缩宫止血药，课题组在前期研究中对益母草注射液的不同提取部位开展了活血作用物质基础研究，发现益母草注射液中存在止血和活血的双重成分，其中水溶性总生物碱部位具有止血作用，而水溶性非生物碱部位具有活血作用，是益母草注射液缩宫止血的重要物质基础［4］。然而，这些活性部位对子宫活动的作用尚不清楚。因此，本课题采用大鼠离体子宫肌条模型，初步研究益母草注射液水溶性总生物碱部位和水溶性非生物碱部位对离体子宫活动的作用，以揭示益母草注射液缩宫止血的药效物质基础，为优化益母草注射液生产工艺、提升产品质量提供科学依据。

1 材料

1.1 药物 益母草注射液浸膏，由成都第一药业集团有限公司提供，为益母草注射液制备工艺中最后稀释制备成品前的浓缩浸膏，每1 g相当于1 mL/支益母草注射液成品为0.2 g/支；益母草注射液水溶性总生物碱部位 （LH-1-B）和水溶性非生物碱部位（LH-1-A）由益母草注射液浸膏提取制备，与成品的换算分别为0.046 7、0.038 9 g/支。用前将3个样品均用蒸馏水配成0.2支/mL，按提取物计算即分别配成43.0、7.8、9.3 mg/mL，备用。

1.2 动物 SD大鼠，普通级，全雌，体质量180～220 g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，质量合格证号：SCXK（川）2008-11，检疫后用。

1.3 主要试剂及仪器 缩宫素注射液 （河南辅仁怀庆堂制药有限公司，批号1204021）；苯甲酸雌二醇注射液 （天津金耀氨基酸有限公司，批号1005051）。NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖试剂，均由成都市科龙化工试剂公司生产，采用去离子水配置洛氏液（配制方法1 000mL含NaCl9.2 g、KC1 0.42 g、CaCl20.24 g、NaHCO30.15 g、葡萄糖1.0 g）。

BL-420E生物机能系统，HW-400型张力换能器，恒温水浴平滑肌槽，均由成都泰盟科技有限公司生产。AL 104电子天平由Mettler Toledo公司生产。

2 方法

2.1 分离制备提取物 将益母草注射液浸膏1 200 g，稀释至1 300 mL过大孔树脂柱，用100%纯水洗脱得到LH-1，将LH-1过离子交换树脂，用纯水洗脱得到LH-1-A，然后用3 mol/L NaCl溶液洗脱得到LH-1-B。

2.2 离体子宫的制备 参考文献［5］方法制备。取健康、成年雌性未孕大鼠，实验前2日每日肌肉注射苯甲酸雌二醇1 mg/kg以造成动情期。于第3天颈椎脱臼处死动物，迅速剪开腹腔剖取子宫置于盛有洛氏液的玻璃皿中，轻轻剥离子宫上附着的结缔和脂肪组织。取离体子宫中间段2～3 cm，一端固定于盛有洛氏液20 mL的浴槽，另一端连接张力换能器，浴槽中营养液保持在 （37.0±0.5）℃，并通以（95%O2+5%CO2）的混合气体，速度1～2个小气泡/s，前负荷1 g。用BL-420E生物机能系统记录子宫收缩曲线。

2.3 给药方法 待曲线稳定30 min，加入LH、LH-1-A和LH-1-B，采用累积给药方式给药，分别为：LH 37.5μL、37.5μL、75μL（终质量浓度为LH 0.081、0.162、0.324 mg/mL），LH-1-A 75μL、75μL、150μL（终质量浓度为LH-1-A 0.029，0.058，0.116mg/mL）和LH-1-B 75μL、75 μL、150μL（终质量浓度为LH-1-B 0.035，0.070，0.140 mg/ML）；每次加药后记录10 min离体子宫收缩活动，三次加完后用洛氏液冲洗3次，再加入等量的洛氏液，待曲线稳定后，用同样的加药方式加入下一组药物；加入1 U/ML缩宫素160μL（终浓度为0.008 U/mL），记录痉挛曲线10 Min后，分别加入LH、LH-1-A、LH-1-B的高剂量的药液记录10min，观察离体子宫收缩活动的变化。空白组给予蒸馏水。曲线下面积代表收缩活力，如下公式计算抑制率：

子宫抑制率=（给药前活力-给药后活力）/给药前活力×100%

2.4 统计学方法 用SPSS 17.0统计软件进行配对t检验统计分析给药前后的变化，结果以 （x±s）表示，P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为极显著性差异。

3 结果

3.1 益母草注射液提取部位对正常大鼠非痉挛子宫收缩活动的影响 由表1可见，蒸馏水对正常大鼠离体子宫的收缩张力最大值、最小值和平均值无明显影响；与给药前比较，益母草注射液浸膏可升高子宫收缩张力最小值和平均值，其中低、高剂量组最小值和中、高剂量组平均值均显著高于给药前（P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-A明显降低收缩张力最大值和平均值，中剂量也明显降低平均值 （P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-B高、中、低剂量组均可升高收缩张力的最大值、平均值和最小值，其中高剂量组对3个张力均有显著效果，低、中剂量分别对最小值和最大值有显著效果（P＜0.05或P＜0.01）。

表1 益母草注射液提取部位对正常大鼠非痉挛离体子宫收缩张力的影响 （x±s）

由表2可见，与给药前比较，空白组蒸馏水对子宫收缩频率和活力无明显影响；益母草注射液浸膏中、高剂量组和LH-1-A高、中、低剂量组收缩频率明显降低，但浸膏高、中剂量组收缩活力明显增强，而LH-1-A中、低剂量组收缩活力明显下降，与对应给药前比较均有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-B对正常大鼠离体子宫收缩频率无明显影响，但可均加收缩活力，且高剂量组与给药前比较差异显著 （P＜0.05）。从抑制率可看出，益母草注射液浸膏和LH-1-B为促进子宫收缩作用，LH-1-A为抑制子宫收缩作用。

表2 益母草注射液提取部位对正常大鼠非痉挛离体子宫收缩频率和活力的影响 （x±s）

3.2 益母草注射液提取部位对正常大鼠痉挛性离体子宫收缩活动的影响 由表3～表5可见，当给予缩宫素终浓度为0.008 U/mL时，大鼠离体子宫立即出现痉挛状态，表现为收缩张力基线明显抬高，收缩频率增大或呈持续高直线状态，收缩张力最大值、最小值和平均值明显升高，收缩活力也明显增加 （P＜0.01）；待稳定10 min后给予浸膏或不同提取部位高剂量，其中浸膏组收缩张力最大值、平均值和收缩活力均明显下降，LH-1-A组收缩频率、最大值、平均值和收缩活力均明显下降，LH-1-B组收缩平均值和最大值均明显降低，但最小值升高，以上差异均有统计学意义 （P＜0.05或P＜0.01）。从抑制率看，益母草注射液浸膏和LH-1-A主要表现为抑制缩宫素所致子宫平滑肌痉挛，LH-1-B作用不明显，但亦无协同作用。

表3 益母草注射液提取部位对正常大鼠痉挛性离体子宫收缩频率和张力平均值的影响 （x±s）

表4 益母草注射液提取部位对正常大鼠痉挛性离体子宫收缩张力最大值、最小值的影响 （x±s）

表5 益母草注射液提取部位对正常大鼠痉挛性离体子宫收缩活力的影响 （x±s）

4 讨论

益母草是一味常用的活血调经、利水消肿的中药，常用于治疗月经不调、产后腹痛、尿不利、水肿等［6］。益母草注射液是益母草单方制剂，临床常与缩宫素联合使用预防或治疗产后和流产后子宫出血，疗效显著［7-8］。离体子宫收缩试验是常用的评价药物对子宫收缩作用的试验，方法经典，操作简单、用药量少。因此，本实验采用正常大鼠离体子宫研究益母草注射液中不同提取物对大鼠离体子宫活动的影响，以期明确益母草注射液对子宫活动的调节作用及其药效物质基础。

现代药理研究显示，益母草具有调经作用，其中水部位和正丁醇部位是主要物质基础［9］，当前明确报道对子宫有活性的益母草单体化合物有益母草碱和水苏碱盐［10］；如有报道盐酸益母草碱可明显减少不完全流产大鼠的阴道出血量和缩短出血时间，机制与促进子宫收缩频率和张力、升高血清雌二醇水平有关［11］；另有报道盐酸益母草碱0.03、0.06、0.09 mg/mL和盐酸水苏碱0.12、0.18 mg/mL对缩宫素所致大鼠离体子宫痉挛分别表现为抑制和协同增强作用［12］。益母草注射液是由益母草制备而来，主要含有益母草水溶性部位，现以水苏碱为其定量测定指标。然而，虽然有大量基于临床观察的实验研究报道益母草注射液联合缩宫素对产后和流产后阴道出血有良好作用，但基于临床前观察的缩宫止血研究报道未见，其作用机制和药效物质基础更不清楚。因此，本课题在前期益母草注射液止血作用研究基础上，开展益母草注射液的缩宫作用物质基础研究，将对产品的二次开发有重要意义。

在本实验的剂量范围内，益母草注射液浸膏给药剂量是其不同提取部位剂量的50%。实验结果显示，益母草注射液浸膏和LH-1-B对正常大鼠离体子宫有兴奋作用，二者的兴奋作用都主要是通过增强子宫收缩张力增强其活动力，对收缩频率无明显影响；同时，在高剂量下，益母草注射液流浸膏抑制缩宫素所致正常大鼠离体子宫痉挛，LH-1-B则可与缩宫素协同增强子宫收缩张力平均值和最小值。另一方面，LH-1-A对正常大鼠离体子宫呈现抑制作用，并可抑制缩宫素所致子宫痉挛状态，主要是通过降低收缩频率和张力而抑制活动力，其中LH-1-A抑制作用强于LH。以上结果表明，益母草注射液中存在兴奋子宫收缩和抑制子宫收缩的不同物质，其中LH-1-B是益母草注射液缩宫作用的主要有效部位，其他部位是抑制成分；其次，相对剂量小的浸膏抑制缩宫素引起的正常大鼠离体子宫收缩，而相对剂量大的LH-1-B可增强缩宫素引起的子宫痉挛，表明益母草注射液的缩宫作用与剂量相关，与缩宫素联合用药的缩宫作用需要较大剂量才能起效。

本研究提示，益母草注射液的缩宫止血作用是多成分、多途径共同作用的结果，至少包括水溶性生物碱部位的缩宫作用和水溶性非生物碱部位的止血作用，但两者之间的关系及深层机制有待进一步研究。

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R285.5

：B

：1001-1528（2015）05-1103-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.041

2014-06-18

国家 “十二五”科技支撑计划 （2011BAI13B05）；国家 “973”项目 （2012CB723502）；国家自然科学基金资助项目（81303209）；四川省科技厅青年科技创新研究团队专项计划项目 （2014TD0007）

谢晓芳 （1983—），女，博士，研究方向为中药药理与毒理。Tel：13980522864，E-mail：xxf14544@163.com

*通信作者：彭 成 （1964—），男，教授，博士生导师，研究方向为中药药理与毒理。Tel：（028）61800005，E-mail：pengchengchengdu@126.com