大叶桉叶中没食子酸的提取研究

吴春燕，蔡 敏，韦后明，易灵红

（广西现代职业技术学院资源工程系，河池 547000）

大叶桉叶中没食子酸的提取研究

吴春燕，蔡 敏，韦后明，易灵红

（广西现代职业技术学院资源工程系，河池 547000）

以大叶桉叶为原料，选择合适的溶剂提取大叶桉叶中的没食子酸。以高效液相色谱为检测手段，用蒸馏水进行提取。通过提取时间、提取温度、固液比、提取次数4个单因素实验，确定正交试验的水平，优化提取工艺。通过正交试验确定没食子酸提取量的影响因素大小是:提取温度＞提取时间＞提取次数＞固液比。最佳工艺条件是:提取时间150min，提取温度100℃，固液比为1∶60，提取次数为3次，在此工艺条件下，没食子酸提取量为5.27mg·g-1。

大叶桉叶；没食子酸 ；正交试验

大叶桉植物的叶子及果实都具有药理活性。大叶桉水煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型链球菌、八叠球菌、伤寒杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌杆菌、奈瑟球菌有较强的抑制作用。大叶桉叶中含有的没食子酸在试管内对流感病毒有抑制作用[1]。此外，没食子酸还可作抗氧化剂，具有抗炎、抗氧化、抗自由基、抗突变等多种生物学活性，可用于制造焦性没食子酸、有机合成和制备药物、试剂等[2-3]。本文通过单因素实验和正交试验，探索了大叶桉叶中没食子酸的提取工艺，为大叶桉叶的综合开发利用提供理论依据。

1 实验

1.1 材料与试剂

原料及试剂:大叶桉叶采自广西河池市内，经50℃烘干、粉碎并过0.178mm筛后备用；没食子酸对照品（≥98%），提取溶剂用甲醇为分析纯，液相色谱用甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，磷酸为分析纯。

仪器:LC-310型高效液相色谱仪，HH型数显恒温水浴锅，FN101-2A型电热恒温鼓风干燥箱等。

1.2 试验方法

1.2.1 没食子酸的提取

取大叶桉叶干粉1g，放入锥形瓶中，加入一定量的提取溶剂，待恒温水浴锅升到设定温度后，放入锥形瓶，提取一定时间后，减压抽滤，将滤渣用等量提取溶剂再次提取后，合并滤液，将滤液转移到250mL容量瓶中，再从容量瓶中吸取25mL转移到250mL容量瓶中，供高效液相色谱分析用。

1.2.2 没食子酸的定量分析

1.2.2.1 色谱条件

色谱柱:Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相:甲醇-0.5%磷酸水溶液（5∶95，v/v）；流速:1.0mL·min-1；检测波长:272nm；柱温:25℃；进样量:10μL。

没食子酸对照品液相色谱图如图1所示。

图1 没食子酸对照品液相色谱图

1.2.2.2 标准曲线的绘制

精确称取没食子酸对照品溶于二次蒸馏水中，配制成400mg·L-1的标准溶液，超声波脱气。再将此溶液稀释为浓度为2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg·L-1的系列标准工作液，超声波脱气。按照1.2.2.1的色谱条件采用外标法进行测定。以没食子酸浓度作为横坐标，吸收峰面积作为纵坐标作图，可得标准工作曲线如图2所示。由图2可知，没食子酸的浓度在2.0～32.0mg·L-1浓度范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系，线性回归方程为Y=15502X-100.35，相关系数为0.9999。

图2 没食子酸含量的标准工作曲线

2 结果与讨论

2.1 单因素实验

2.1.1 提取溶剂对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响

由于没食子酸中含有3个羟基和1个羧基，具有极性，故选择水和甲醇作为提取溶剂。固定提取时间为120min，固液比为1∶50（g∶mL），考察不同浓度下的甲醇-水溶液对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响，结果如图3所示。由图3可知，随着甲醇含量的增大，没食子酸提取量逐渐降低，故选择蒸馏水为提取溶剂。

图3 提取溶剂对没食子酸提取量的影响

2.1.2 提取时间对没食子酸提取量的影响

提取温度为100℃，提取溶剂为蒸馏水，按固液比1∶50（g∶mL）的条件考察提取时间对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响，结果如图4所示。由图4可知，没食子酸提取量随着提取时间延长而逐渐提高。当提取时间达120min后再延长时间提取率变化不大，没食子酸已基本溶解在水中，故提取最佳时间为120min。

图4 提取时间对没食子酸提取量的影响

2.1.3 提取温度对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响

提取时间为120min，提取溶剂为蒸馏水，按固液比1∶50（g∶mL）的条件考察提取温度对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响，结果如图5所示。由图5可知，没食子酸提取量随温度的升高呈逐渐上升的趋势。其原因是高温下没食子酸的溶解、扩散速度加快，从而加快了大叶桉叶中没食子酸的溶出。由于蒸馏水的沸点为100℃，无法再提高提取温度，故提取温度选择为100℃。

图5 提取温度对没食子酸提取量的影响

图6 固液比对没食子酸提取量的影响

2.1.4 固液比对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响

提取时间为120min，提取温度为100℃，提取溶剂为蒸馏水，考察固液比对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响，结果如图6所示。从图6看出，没食子酸的提取量随溶剂量的增大而逐渐提高，但过大的溶剂量一方面会造成溶剂浪费，另一方面也会将大叶桉叶中的其他杂质溶解出来。故选择提取固液比为1∶50（g∶mL）。

2.1.5 提取次数对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响

提取时间为120min，提取温度为100℃，提取溶剂为蒸馏水，固液比为1∶50（g∶mL），考察提取次数对大叶桉叶中没食子酸提取量的影响，结果如图7所示。由图7可知，大叶桉叶提取2次时没食子酸基本提取完成，再增加提取次数没食子酸提取量的增加很小。故选择提取次数为2次。

图7 提取次数对没食子酸提取量的影响

2.2 正交试验

2.2.1 实验因素与水平表

在单因素实验基础上，选取提取时间（min）、提取温度（℃）、固液比（g∶mL）、提取次数4因素，进行L9（34）正交试验，试验因素与水平表见表1。

表1 正交试验实验因素与水平表

2.2.2 结果与讨论

正交试验结果见表2。由表2正交试验结果可知，影响大叶桉叶中没食子酸提取因素顺序为: B＞A＞D＞C，即提取温度＞提取时间＞提取次数＞固液比，以A3B3C3D3为最优组合，即提取时间120min，提取温度100℃，固液比为1∶60，提取次数为3次。

2.2.2 最佳工艺条件的验证

按A3B3C3D3组合，即提取时间120min，提取温度100℃，固液比为1∶60，提取次数为3次，进行3次平行试验，并取平均值，得大叶桉叶中没食子酸提取率的提取量为5.27mg·g-1。

表2 正交试验设计及试验结果

3 结论

通过单因素实验及正交试验可知，以蒸馏水为提取溶剂较为合适，影响大叶桉叶中没食子酸提取顺序为:提取温度＞提取时间＞提取次数＞固液比。最佳工艺条件是:提取时间120min，提取温度100℃，固液比为1∶60，提取次数为3次，在此工艺条件下，没食子酸提取量为5.27mg·g-1。

[1] 王国强.全国中草药汇编（卷二）[M].北京:人民卫生出版社，2014:69.

[2] 李沐涵，殷美琦，冯靖涵，等.没食子酸抗肿瘤作用研究进展[J].中医药信息，2011，28(1):109-111．

[3] 常连举，张宗和，黄嘉玲，等.没食子酸的制备与应用综述[J].生物质化学工程，2010，44(4):48-50.

Extraction of Gallic Acid from Eucalyptus Robusta Leaf

WU Chun-yan, CAI Min, WEI Hou-ming, YI Ling-hong
(Department of Resources Engineering，Guangxi Modem Vocational Technology College，Hechi 547000, China)

Gallic Acid was extracted from eucalyptus robusta leaf with suitable solvents．Applied HPLC as detection method, dstilled water was selected as the extractant．Based on the four single-factor tests of extraction time, extraction temperature, the ratio of solid to liquid and extraction times, optimize extraction process of orthogonal experiments were determined and optimal conditions were obtained: extraction time was 150min, extraction temperature was 100℃, the ratio of solid to liquid was 1∶60 and extraction times was 2 times. The extraction amount was 5.27 mg/g．

eucalyptus robusta leaf; gallic acid; orthogonal experiments

TQ 941

A

1670-9905(2015)05-0036-03

2015年广西高校科研项目(项目编号:KY2015LX736)

吴春燕（1982-），女，广西钦州人，硕士，讲师，主要从事化工教学和研究工作

2015-03-11