鼠神经生长因子联合激素治疗对格林巴利综合征患者血清IL-12、IL-18的影响

王 刚，刘力婕，郝 光

鼠神经生长因子联合激素治疗对格林巴利综合征患者血清IL-12、IL-18的影响

王 刚，刘力婕，郝 光

目的 探讨鼠神经生长因子联合激素治疗对格林巴利综合征患者血清白细胞介素(IL)-12、IL-18的影响。方法 采用双盲法将我院2013年10月—2014年10月收治的格林巴利综合征患者80例随机分为观察组和对照组，各40例。观察组采用鼠神经生长因子联合激素进行治疗，对照组单纯采用甲泼尼松龙进行治疗。观察对比两组患者治疗前后血清中IL-12、IL-18的蛋白表达情况和淋巴白皮细胞IL-12、IL-18受体的mRNA表达情况，分析两种治疗方法对二者的影响。结果 两组患者治疗后IL-12和IL-18蛋白表达均有所降低(P<0.05)，观察组降低水平明显比对照组低(P<0.05)。而且二者蛋白表达和受体mRNA的蛋白表达都具有正相关性。观察组治疗总有效率为95.0%，明显高于对照组的80.0%(χ2=3.645，P<0.05)，观察组患者不良反应发生率为2.5%，对照组为5.0%，两组比较差异无统计学意义(χ2=0.985，P>0.05)。结论 鼠神经生长因子联合激素治疗格林巴利综合征患者可以有效抑制IL-12和IL-18的蛋白表达，从而抑制促炎症因子，疗效显著。

格林巴利综合征；鼠神经生长因子；激素；白细胞介素-12；白细胞介素-18

格林巴利综合征(GBS)是儿童中比较常见的周围神经性疾病，又被称为急性炎症性脱髓鞘性多发性神经根炎[1]，其特点是周围神经急性炎性脱髓鞘。格林巴利综合征的临床表现为四肢麻痹、无力，且呈对称性；严重的经常累计颅神经支配的肌肉，甚至出现呼吸肌无力，死亡等[2]。白细胞介素(IL)-12和IL-18都是促炎症因子，IL-12诱导Th0细胞分化成为Th1细胞，并最终成长为炎症效应细胞，而IL-18的作用是协同并增强IL-12的诱导分化作用[3]。目前格林巴利综合征的主要治疗方法是血浆置换、丙种球蛋白、激素疗法等。其中丙种球蛋白可以缩短疗程，减缓病情。有学者研究表明[4]，鼠神经生长因子(MNGF)可以对周围神经损伤进行修复，并且可以促进神经细胞的生长、发育。为了更好的治疗格林巴利综合征患者，同时探究格林巴利综合征患者治疗前后血清白介素IL-12、IL-18的改变状况。本研究选取2013年10月—2014年10月收治的格林巴利综合征为研究对象，探讨研究鼠神经生长因子联合激素对格林巴利综合征患者血清IL-12、IL-18的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机抽取我院2013年10月—2014年10月收治的确诊为格林巴利综合征的患者共80例，男46例，女34例，年龄1岁～11岁(5.3岁±1.2岁)。所有患者病历均符合公认的Asbury标准，并且没有其他炎症、肿瘤、风湿疾病，血细胞沉降率指标在正常范围内，无外伤和应激反应等。将80例患者平均分为两组，观察组40例，男23例，女17例；年龄5.2岁±1.3岁；病程7.8月±2.1月。对照组40例，男23例，女17例；年龄5.4岁±1.1岁；病程7.9月±2.3月。两组患者在年龄、性别、文化程度、家庭状况、临床表现、平均病程等方面差异无统计学意义。

1.2 方法 两组患者入院之后都需要接受相应的治疗，包括应用抗菌药物，使呼吸道保持顺畅，还有各种维生素和能量支持治疗方法。对照组采用单纯的激素治疗方法：给予甲泼尼松龙(Upjon公司生产)15 mg/kg～30 mg/kg，溶于150 mL～250 mL 5%的葡萄糖注射液中静脉输注，连续输注5 d后，改为每天口服泼尼松1.5 mg～2.0 mg，需要持续2周～3周，具体需要根据实际病情酌量减少或者停用。观察组在对照组的基础上每天肌肉注射鼠神经生长因子30 μg。两组均治疗1个月。

1.3 检测指标及方法 观察两组IL-12和IL-18的蛋白表达情况、淋巴细胞表面IL-12和IL-18受体mRNA的表达情况以及治疗效果、不良反应发生情况。

1.3.1 IL-12和IL-18的蛋白表达 所有患者第2天早晨空腹情况下抽取10 mL静脉血，然后取出淋巴细胞分离液10 mL加入到试管中，取5 mL抗凝血剂沿着试管壁小心地加入到上层的分离液中，离心5 min，对上层血清进行分装，放置在-20 ℃的环境下保存备用。用吸管小心地吸取2 mL中间白膜层即淋巴细胞[5]，置入10 mL含有10%胎牛血清的PBS中，离心5 min，撇去上层清液，置入50 μL PBS悬浮淋巴细胞(总数约为6×106/L)。严格按照血清蛋白试剂盒(由美国Sigma公司生产)的使用说明书，逐步测定IL-12和IL-18的蛋白表达情况。

1.3.2 淋巴细胞表面IL-12和IL-18受体mRNA的表达 利用Trizol方法[6]提取出细胞总RNA，取其逆转录2 μg，PCR反应条件分别为：94 ℃预变性5 min，55 ℃，45 s；95℃，45 s；72 ℃，90 s。引物由杭州联科生物技术有限公司设计合成：其中β-actin共20个循环；IL-12受体mRNA共30个循环；IL-18受体mRNA共30个循环。然后取出5 μL PCR的样品，使用2%的琼脂糖凝胶进行电泳。依据公式[7]：蛋白表达强度Rv=ILR/β-actin。

2 结 果

2.1 两组患者IL-12、IL-18蛋白表达情况 两组治疗后外周血清中和脑脊液中两种蛋白表达情况都比治疗前有所降低，但是观察组的效果更为显著。而且IL-12与IL-18在外周血清和脑脊液中的蛋白表达都呈正相关性(r值分别为0.865，0.754，P<0.05)。详见表1。

表1 两组患者IL-12、IL-18蛋白表达情况(±s) pg/mL

2.2 两组淋巴细胞表面IL-12和IL-18受体mRNA表达情况 治疗后两组患者外周血淋巴细胞表面IL-12、IL-18受体的mRNA表达均比治疗前有所降低(P<0.05)，且两者的蛋白表达呈现显著的正向相关性(r=0.848)。详见表2。

表2 两组治疗前后IL-12、IL-18受体的mRNA蛋白表达(±s)

2.3 两组患者治疗效果及不良反应情况 观察组患者痊愈12例，明显好转15例，好转10例，无效2例，总有效率95.0%；对照组患者痊愈8例，明显好转10例，好转14例，无效8例，总有效率80.0%。观察组总有效率明显高于对照组(χ2=3.645，P<0.05)。观察组患者不良反应发生率为2.5%，对照组为5.0%，两组比较差异无统计学意义(χ2=0.985，P>0.05)。

3 讨 论

格林巴利综合征是自身免疫系统性周围神经病，其发病率为0.6/10万～4.0/10万[8]。目前为止，其发病机制尚未明确，也没有显著的治疗方法。有研究表明[9]，格林巴利综合征是因为感染或者其他原因导致机体免疫系统功能损坏，从而对周围神经免疫的耐受性进行破坏，T细胞被激活，成为自身的免疫应答细胞，然后释放出大量的促炎症因子，使得周围神经的脱髓鞘炎症受损，包括IL-12和IL-18在内的大量Th1细胞因子增强表达，而包括IL-4、IL-6、IL-10等在内的拮抗细胞因子Th2的蛋白表达则显著下降。促炎症因子和抑炎症因子协调失衡，导致炎症的发生。IL-12在Th1细胞因子的活化增强过程中，起到了至关重要的促进作用，同时IL-18起到辅助增强的作用。有研究认为鼠神经生长因子可以对周围神经损伤进行修复，并且可以促进生精细胞的生长、发育，有效抑制IL-12、IL-18的蛋白表达，以及两者受体的mRNA的蛋白表达，从而抑制促炎症因子的作用[10-12]。有文献指出，激素可以促进IL-4、IL-6、IL-10等Th2细胞因子的表达，增强抑炎症因子的作用[13，14]。本研究通过对比鼠神经生长因子联合激素的治疗方法和单纯地使用鼠神经生长因子对格林巴利综合征患者进行治疗，结果显示，鼠神经生长因子联合激素疗法可以有效抑制IL-12和IL-18的蛋白表达，对治疗格林巴利综合征效果显著，而且IL-12、IL-18两者的蛋白表达具有一定的正相关性。但是本研究中由于所取患者有一定的局限性，而且样本稍少，难免存在一定的偏颇，还需要广大学者进一步来完善结论，为格林巴利综合征患者的治疗提供新的可行方案。

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(本文编辑 郭怀印)

河北北方学院附属第一医院(河北张家口 075000)，E-mail：394185134@qq.com

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10．3969/j．issn．1672-1349．2015．10．031

1672-1349(2015)10-1227-02

2015-04-06)