掌跖脓疱病患者血清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素17、22和白细胞介素17F水平的研究

孙昂远 刘越阳 李铁男 孙晓冬 孙晓杰 陈晴燕 王强

掌跖脓疱病是一种病因不明，仅发于掌跖的慢性复发性无菌性脓疱性皮肤病。研究证实［1］，免疫功能紊乱在掌跖脓疱病的发病机制中起重要作用。有报道Th17细胞分泌的细胞因子白细胞介素（IL）17参与银屑病的病理生理过程，随后有研究表明，掌跖脓疱病患者血清和皮损中IL-17和IL-22表达增加［2］。本研究采用ELISA法检测掌跖脓疱病活动期和静止期患者血清中IL-17相关细胞因子水平，探讨它们与掌跖脓疱病发病的关系。

一、资料与方法

1.临床资料：选取沈阳市第七人民医院皮肤科门诊和病房经临床或病理确诊的30例掌跖脓疱病患者和20例健康人对照作为研究对象。所有患者均符合掌跖脓疱病的诊断［3］，男4例，女26例，年龄（45±12）岁，病程中位数为2年。纳入标准：疾病处于活动期（指原皮疹未消，新脓疱不断出现，反复发作），入组前3个月内未接受治疗，未使用生物制剂、免疫抑制剂、糖皮质激素和维A酸类制剂，且均无其他系统性疾病，未合并其他自身免疫性疾病。入组患者前4周口服我院协定方掌跖脓疱汤（辽药制字z04010078号：金银花15 g、连翘 15 g、黄芩 10 g、紫花地丁 15 g、公英 15 g、重楼 30 g、生地 15 g、丹皮 10 g、赤芍 10 g、黄芪 15 g、甘草 10 g），对停服掌跖脓疱汤后1～2周有新发脓疱的患者，给予阿维A和窄谱中波紫外线联合治疗2～4周；患者终止治疗后无新发皮疹时间达1个月以上即判为静止期（指皮疹消退，无新发脓疱时间达1个月以上）。健康人对照组均来自我院健康体检者，男2例，女18例，年龄（42±14）岁。两组间性别构成比及年龄分布差异均无统计学意义。本研究经沈阳市第七人民医院伦理委员会批准，受检者均签署知情同意书。

2.主要试剂与仪器：人TNF-α、IL-17、IL-22和IL-17F ELISA试剂盒均为美国RayBiotech公司产品，酶标仪ST-360为上海科华生物工程股份有限公司产品。

3.ELISA 法检测血清中 TNF-α、IL-17、IL-22、IL-17F 含量：抽取外周静脉血5 ml，室温下充分凝血，离心分离血清存于-80℃冰箱。根据ELISA检测结果的A值绘制标准曲线，换算出细胞因子浓度。

4.统计学方法：采用SPSS17.0软件，细胞因子检测结果非正态分布，以中位数（M）（P25～P75）表示，采用配对秩和检验比较患者组静止期与活动期细胞因子水平的差异，Mann-WhitneyU检验比较组间的差异，P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

各组血清 TNF-α、IL-17、IL-22、IL-17F 水平的比较：掌跖脓疱病患者组活动期外周血TNF-α、IL-17、IL-22表达水平分别高于静止期（T值分别为 1.5、2.0、3.0，均P＜ 0.05）和对照组（u值分别为 4.17、3.84、4.69，均P＜ 0.05），差异有统计学意义；静止期也显著高于对照组，差异有统计学意义（u值分别为 2.71、3.53、2.18，均P＜ 0.05）。但掌跖脓疱病患者活动期外周血IL-17F表达水平分别与静止期（T=76，P＞0.05）、对照组（u=0.98，P＞ 0.05）比较，及静止期与对照组相比（u=1.37，P＞0.05），差异均无统计学意义。见表1。

三、讨论

目前研究认为，掌跖脓疱病与扁桃体炎、牙周炎、金属过敏、吸烟、血浆钙离子失衡等有关，但确切病因仍不清楚。Skov等［4］发现，掌跖脓疱病皮损中IL-8浓度异常升高，采用IL-8单抗HuMab10F8治疗能阻断依赖IL-8的中性粒细胞活化和迁移，皮损中IL-8浓度快速下降，新生脓疱减少50%以上，表明IL-8在掌跖脓疱病发病过程中发挥作用。Ozawa等［5］研究了寻常性银屑病和掌跖脓疱病皮损中IL-8和补体成分的定位，认为中性粒细胞沿IL-8的浓度梯度迁移入表皮内，之后在补体成分引导下到达皮损的角质层下。由此我们推测，与中性粒细胞趋化募集相关的免疫机制和细胞因子在掌跖脓疱病的发病机制中可能发挥重要作用。

Hagforsen等［1］研究表明，促炎介质表达量在掌跖脓疱病患者皮损脓疱和末端汗管内或附近部位增高，其中IL-17表达水平异常增高，掌跖脓疱部位朗格汉斯细胞的浸润也明显增多，CD4+调节性T细胞、朗格汉斯细胞在掌跖脓疱病患者的非皮损部位也较健康对照者明显增多。IL-17的主要生物学功能是促进炎症反应，在中性粒细胞募集方面有重要作用。其主要由Th17细胞分泌，而后者也可产生IL-17F、IL-22、IL-21和IL-23，这些细胞因子很可能协同诱导许多炎症反应，对表皮、内皮、成纤维细胞生长和功能产生影响［6］。IL-17相关性细胞因子包括 IL-17、IL-22、TNF-α、IL-23、IL-8、干扰素γ（IFN-γ）。IL-17参与银屑病的病理生理过程，IL-17/IL-17F通过释放CXC趋化因子促进中性粒细胞募集、活化和迁移，也能上调病变部位IL-8的表达，且IL-17和IFN-γ可增强角质形成细胞产生促炎细胞因子，包括合成和分泌IL-8［7］。Watanabe 等［8］体外研究表明，IL-17F 可以时间依赖的方式刺激正常人角质形成细胞产生IL-8，并且比TNF-α和IL-17A作用更强，因此认为IL-17F是一种选择性中性粒细胞趋化剂，趋化和激活中性粒细胞参与炎症反应。IL-17A刺激角质形成细胞产生趋化因子、细胞因子和促炎介质，由此可通过固有免疫和适应性免疫系统共同导致慢性炎症［9］。IL-22主要由Th17和Th22产生，它能诱导产生CCL20从而募集表达CCR6的Th22、Th17和树突细胞，可增强角质形成细胞过度表达中性粒细胞的趋化因子CXCL1、CXCL5和CXCL8。TNF-α通过增加IL-22R和STAT3的表达，从而通过协同作用趋化中性粒细胞［10-11］，而激活的中性粒细胞也可分泌IL-17A和IL-17F加重炎症反应［12］。IL-22协同IL-17A和IL-17F增强角质形成细胞表达抗微生物肽，促进上皮细胞表达趋化因子如IL-8。IL-22的某些功能可以被IL-17A、IL-17F 和 TNF-α 协同或抑制［13-14］。因此，TNF-α、IL-17、IL-22、IL-17F和角质形成细胞之间相互作用可能参与中性粒细胞趋化募集和慢性炎症。

表1 掌跖脓疱病患者血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）17、IL-22和IL-17F水平［中位数（P25～P75）］ ng/L

本研究发现，掌跖脓疱病患者活动期外周血TNF-α、IL-17和IL-22表达水平显著高于对照组，这一结果与Murakami等［2］研究一致，同时也显著高于静止期水平，表明掌跖脓疱病患者外周血TNF-α、IL-17和IL-22表达水平和疾病活动有关，在掌跖脓疱病的发病机制中可能发挥重要作用。本研究还发现，掌跖脓疱病患者静止期外周血TNF-α、IL-17和IL-22表达也显著高于健康对照组，提示掌跖脓疱病患者即使在静止期也存在免疫异常，可能在各种复杂的内外因素刺激下加重免疫紊乱而再次复发。虽然研究证实IL-17F是一种选择性中性粒细胞趋化剂，但本研究结果显示，各组IL-17F含量均较低，且无明显差异。而Murakami等［2］应用RT-PCR研究掌跖脓疱病患者皮损组织中IL-17F mRNA较对照组显著上调，我们推测IL-17F可能在皮损部位表达，参与本病发病过程。

综上所述，我们推测掌跖脓疱病患者外周血TNF-α、IL-17和IL-22可能参与掌跖脓疱病的发病过程，其机制可能与中性粒细胞的趋化募集有关，但具体机制还需深入研究。

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