银杏叶滴丸对脑梗死病人p38活性的调控作用

夏乐敏，费雪洁

银杏叶滴丸对脑梗死病人p38活性的调控作用

夏乐敏，费雪洁

目的 探讨银杏叶滴丸对脑梗死病人的治疗效果及对外周血单个核细胞P38活性的调控作用。方法 将120例脑梗死病人随机分为两组各60例，治疗组采用银杏叶滴丸治疗，对照组采用基础治疗。比较两组疗效，并测定p38与p-p38的表达。结果 治疗组显效率46.67%，总有效率80.00%，对照组显效率33.33%，总有效率50.00%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后p38、p-p38较治疗前显著下降(P<0.05)，且显著低于对照组(P<0.05)。结论 银杏叶滴丸治疗脑梗死疗效佳，其机制可能与调控p38活性有关。

脑梗死；银杏叶滴丸；丝裂原活化蛋白激酶 p38；磷酸化丝裂原活化蛋白激酶 p38；外周血单个核细胞

脑梗死是缺血性卒中的总称，由脑血液供应障碍引起脑部病变。发病机制为血栓形成或栓塞，其症状的性质因病变累及的血管不同而异。临床上银杏叶滴丸治疗脑梗死疗效显著。研究发现，MAPK家族中的p38 MAPK信号通路与脑缺血性疾病有着密切的关系[1]。本研究旨在探讨银杏叶滴丸治疗脑梗死病人的疗效及对p38活性的调控作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月—2014年9月以脑梗死收住入院的120例病人为研究对象，男63例，女57例。所有病例均符合1995年全国第四届脑血管病会议制定的诊断标准，并经头颅CT或磁共振成像(MRI)确诊，其中基底神经节梗死40例，多发性脑梗死20例，脑皮质梗死30例，丘脑梗死13例，脑栓塞15例，出血性脑梗死2例。脑梗死病人中医证型符合中医气虚血瘀型中风病诊断标准(由2名以上高年资主治医师分型)。采取随机、双肓法分为治疗组与对照组各60例，并按照1995年全国第四次脑血管疾病学术会议上制定的神经功能缺损评分标准[2]评分，治疗组神经功能缺损评分为18.51分±10.56分，既往史积分为9.65分±6.27分，伴发病积分为8.57分±6.24分；对照组神经功能缺损评分为16.80分±9.38分，既往史积分为9.56分±6.32分，伴发病积分为8.26分±7.16分。两组病人一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法 两组基础治疗都予以口服尼莫地平片，每次20 mg，每日3次。如果病人有感染或(和)脑水肿颅内压增高征象者，可给予抗生素和20%甘露醇治疗，并根据病情选择降糖、降压等对症治疗。所有病人均未使用溶栓药物。治疗组除常规治疗外，另予以银杏叶滴丸(浙江万邦药业股份有限公司)服用。用法用量：口服，一次5丸，一日用3次，一日3次，1个疗程为30 d。两组病人均要求住院服药4个月～6个月。住院期间嘱咐病人家属定时给病人翻身、按摩肢体、捶背，保持大便通畅和饮食卫生，待病情相对稳定后，嘱病人在医生的指导下适当进行功能锻炼。

1.3 蛋白质印迹法检测外周血单个核细胞p38和p-p38 收集的外周血单个核细胞经磷酸盐缓冲液洗涤2次后，加入细胞裂解液(150 mmol/L NaCl，20 mmol/L Tris pH7.5，1%Triton X- 100，1 mmol/L EDTA，2.5 mmol/L Na4P2O7，1% Na3VO4，0.5 mg/mL亮抑酸肽，Biosail公司)充分裂解。裂解的产物12000 r/min 离心20 min，并收集上清液。运用BCA法测定总蛋白量。每份样品中取50 μg 蛋白加入十二烷基磺酸钠上样缓冲液(终浓度：1×)混匀，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(分离胶：10% gel)，电泳条件为80 V 30 min，120 V 2 h。用半干法转印分离的蛋白到聚偏氟乙烯膜。采用Western blot方法根据试剂盒要求测定p38含量，一抗按1∶300稀释，二抗按1∶2 000稀释，经Quantity One图像分析软件和CIS Array Analysis阵列分析软件对图中印迹区进行定量分析，以目的蛋白及内参蛋白条带的灰度比值作相对定量来比较各组间靶蛋白表达差异。

1.4 疗效评定标准 依据1995年全国第4届脑血管病学术会议通过的标准[3]。基本痊愈：美国国立卫生院卒中量表评分(NIHSS)评分减少91%～100%；显效：NIHSS评分减少46%～90%；有效：NIHSS评分减少19%～45%；无效：NIHSS评分减少不到18%甚至增加，或病例死亡。于治疗前或疗程结束后即行神经功能缺损评分。

2 结 果

2.1 两组临床疗效比较 治疗组显效率46.67%，总有效率80.00%，对照组显效率33.33%，总有效率50.00%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 两组临床疗效比较

2.2 两组治疗前后NIHSS评分比较 治疗组治疗后NIHSS评分较治疗前显著下降(P<0.05)；治疗组治疗后NIHSS评分显著高于对照组(P<0.05)。详见表2。

表2 两组治疗前后NIHSS评分比较(±s) 分

2.3 两组治疗前后p38和p-p38变化 治疗组治疗后p38相对表达量(p-38/GAPDH)、p-p38相对表达量(p-p38/GAPDH)较治疗前显著下降(P<0.05)；治疗组治疗后的p38、p-p38显著低于对照组(P<0.05)。详见表3、见图1。

表3 两组治疗前后p38和p-p38变化(±s)

图1 蛋白质印迹检测外周血单个核细胞p38和p-p38结果

3 讨 论

脑梗死是因为脑动脉粥样硬化，引起血管内膜损伤使脑动脉管腔狭窄，进而因多种因素使局部血栓形成，导致动脉狭窄加重或完全闭塞，使得脑组织缺血、缺氧、坏死，导致神经功能障碍的一种脑血管病，是一类神经内科的多发病和常见病。

p38是1993年由Brewster等[4]首次发现，有360个氨基酸组成的相对分子质量为38 000的蛋白。1994年，Han等[5]从小鼠的肝脏cDNA文库中筛选出编码p38 MAPK的基因，成功证实了Brewster等的研究。Han等后来又发现了P38常见的4个异构体：p38α、p38β、p38γ、p38δ。p38不同的异构体有选择表达在不同组织之中：p38α主要表达于白细胞与骨髓；p38β高表达在大脑和心脏；p38γ表达在骨骼肌；p38δ则富集于肺、胰腺、肾、小肠和睾丸。序列分析研究显示，p38四种不同的异构体的同源性超过了60%[6]。p38可以由细胞外多种刺激，包括热休克、射线、紫外线、促炎症因子、渗透压应激、某些促细胞分裂剂而被最终激活。缺血、缺氧后，脑损伤可通过一系列信号途径转导至细胞核，启动相关基因表达，引起神经元凋亡。研究表明，缺血、缺氧后脑损伤可激活p38 MAPK信号途径，在大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中，p38 MAPK持续活化可诱导神经细胞的凋亡[7，8]。目前，P38 MAPK如何调控细胞凋亡尚不完全清楚，其机制非常复杂[9-13]。

中医认为，脑梗死属于“中风”范畴，发病与痰、瘀、虚、火、风等因素有关。血瘀是导致本病的关键环节，因此，治疗上以活血化瘀为大法。祖国医学认为，活血能使瘀除脑通新血得生。银杏叶滴丸主要成分为银杏叶提取物，有防止血栓形成和抗血小板聚集及对脑部血液循环及脑细胞代谢，有较好的改善及促进作用[14]。本研究发现，银杏叶滴丸对气虚血瘀型脑梗死有良好疗效，且能降低p38活性表达。临床上运用银杏叶滴丸治疗脑梗死治愈率高，其机制可能与调控p38活性有关。

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(本文编辑 郭怀印)

1.上海中医药大学附属曙光医院宝山分院(上海 201999)；2.上海中医药大学附属曙光医院

费雪洁，E-mail：roby_0_0_2000@163.com

R743 R289.5

B

10．3969/j．issn．1672-1349．2015．16．028

1672-1349(2015)16-1893-03

2015-06-08)