颈痛舒口服液中葛根素含量测定方法的研究

许广华 李小伟 韩双

【摘要】目的：建立颈痛舒口服液中葛根素含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以甲醇-水（27：73）为流动相：检测波长：250nm;流速：10ml/min;柱温：30℃。结果：葛根素在02808～2808μg范围呈良好的线性关系，平均回收率976%，RSD=132（n=6）;结论：定量测定方法简单、准确，重复性、稳定性良好，精密度高，结果可靠，可作为颈痛舒口服液质量控制的方法，以提高该药的质控水平，更好的发挥其临床疗效，更好地服务于病人。

【关键词】高效液相色谱法;颈痛舒口服液;葛根素

【中图分类号】R286【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）07-0013-02

Abstract：

Keywords：

葛根为豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根，为中风常用的祛风解毒药之一，具有解肌，升阳透疹，解热生津等功效[1]，制剂处方中主药葛根的有效成分为葛根素、黄豆苷、黄豆苷元等黄酮类成分，其中葛根素的含量最高。颈痛舒口服液来自于我院推拿科主任、副主任医师朱向阳的经验方，在长期给予颈椎病患者治疗过程中，除用推拿牵引等非药物治疗的同时服用颈痛舒口服液，以缓解病人因气血不足，而引起的头痛、头晕、手臂麻木、酸痛、活动不利等症状。为了有效控制该药品的质量，根据新药审评有关规定，本文建立了测定颈痛舒口服液中葛根素含量的高效液相色谱法，结果分离度好、重现性好、灵敏度高，可作为控制颈痛舒口服液质量的方法[2]。

1仪器

北京普析L6-DP6型高效液相色谱仪（生产厂家：北京普析通用设备科技有限公司）;101-1A型数显恒温干燥箱（生产厂家：上海光地仪器设备有限公司）;AL-120型电子天平（生产厂家：瑞士梅特勒-托利多仪器公司）;ZF-2三用紫外仪（生产厂家：上海安亭仪器厂）;HS-180型超声波清洗机（生产厂家：宁波海曙金兰教仪科研究所）;GSY电热恒温水浴锅（生产厂家：北京医疗器械厂）

2试药

颈痛舒口服液（太和中医院中药制剂室，批号：20130105，20130203，20130305）;颈痛舒口服液阴性对照品三批（太和县中医院中药制剂室）;葛根素对照品（中国药品生物 ）。

色谱甲醇（生产厂家：安徽时联特种溶剂股份有限公司）;水为新制纯化水;其余试剂均为分析纯。

3葛根素含量测定方法学

31色谱条件色谱柱：依利特 Hypersil ODS（46mm×250mm，5um）;流动相：甲醇-水（27∶73）;检测波长：250nm;流速：10ml/min;柱温：30℃;进样量：20μl。理论塔板数按葛根素峰计应不低于4000，分离度大于15。

32对照品溶液的制备精密称定葛根素对照品适量，加甲醇制成每ml含葛根素对照品50μg的溶液，即得。

33供试品溶液的制备[3]精密量取本品10ml，置50ml具塞锥形瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，超声处理（功率100W，频率40kHz）30分钟，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

34干扰试验取按处方比例及生产工艺制备的不含葛根原药材的颈痛舒口服液，按供试品溶液的制备同法制成阴性对照溶液，按上述色谱条件进行测定，结果表明，葛根素含量测定无干扰，色谱图见图1。

a葛根素对照品b供试品c缺葛根阴性样品

图1颈痛舒口服液HPLC色谱图

35线性关系考察精密称取葛根素对照品351 mg，置25 ml量瓶中，用30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取对照品溶液2，4，8，12 ，20μl，按上述色谱条件进样测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程y=33E+6 x-31256，R=09998。结果表明，葛根素在02808～2808μg范围内线性关系良好。

36精密度试验取葛根素对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，结果葛根素峰面积的RSD为087%。

37重复性试验取同一批样品6份，每份约10ml，按上述方法制成供试品溶液，按“221”项下色谱条件测定，计算葛根素含量。结果葛根素平均含量为352mg/ml，RSD为144%。

38稳定性试验取同一批供试品溶液，室温下放置，按上述色谱条件，分别于配制后0，2，4，6，8，12 h 进样测定，记录葛根素峰面积，结果葛根素峰面积的RSD为126%。

39加样回收率试验[4-5]精密量取已知含量的样品6份，每份约10ml，分别精密加入葛根素对照品适量，按上述方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1葛根素加样回收率试验结果

序号样品量

（ml）样品中含

葛根素量（mg）加入葛根素

对照品量（mg）测得量

（mg）回收率

（%）平均回收率

（%）RSD

（%）110352353 701 9887210352355 702 9859310352374 718 9786410352371 716 98119760

132

510352366 706 9672610352374 709 9545

310样品含量测定取3批样品，按上述方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算含量。结果葛根素的含量分别为351，357，348mg/ml。

4结果与讨论

41考察了甲醇-02%磷酸（体积比27∶73）、乙腈-水（体积比20∶80）、甲醇-水（体积比27∶73）、甲醇-01%磷酸（体积比75∶25）[6]等流动相，以甲醇水（体积比27∶73）的保留时间较为适宜，且分离度良好，其余几种条件葛根素保留时间短，分离度差。

42对样品超声处理时间进行了考察，结果表明样品超声时间30min以上，被测组分含量不再增加，说明超声时间30min即可，故将样品处理的超声时间定为30min。

43采用HPLC法测定颈痛舒口服液中葛根素的含量，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于颈痛舒口服液的质量控制、稳定性考察和有效期，可为颈痛舒口服液的质量标准的建立提供依据。

参考文献

[1]刘玉国，修彦凤，刘玉红.葛根及其制剂中葛根素的含量测定方法概述[J].基层中药杂志，1999，13（1）：42-44.

[2]陆炜琨，曾芳，李媛.反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量[J].广州药学学报，2008，26（5）：475-477.

[3]张雪荣，董小燕，索伟.HPLC法测定颈复康颗粒剂中葛根素的含量测定[J] .中国药品标准，2002，16（6）：56-58.

[4]孙法丽，马 毅，王春香. 高效液相色谱法测定葛瓜降糖胶囊中葛根素含量[J]. 药物鉴定，2007，16（20）：33-34.

[5] 宿 洁，杨晓云，吴爱英. HPLC法测定天乐胶囊中的葛根素含量[J].中国临床药学杂志，2003，12（2）：94-95.

[6]劉必旺，李会芳，赵换，等. HPLC与TLC测定复方葛根胶囊中葛根素含量[J]. 中华中医药杂志，2007，26（4）：695-697.

（收稿日期：20140213）