原发性胆汁性肝硬化31例抗线粒体抗体和抗核抗体检测结果分析

王明珠 张华 叶震璇 杨必伟 何宇晴

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种病因不明的慢性器官特异性肝脏疾病。常见于女性，以肝脏门脉周围的淋巴细胞浸润、胆管上皮细胞特异性损伤及血清中高滴度抗线粒体抗体（AMA）为主要特征［1］。目前PBC的诊断通过抗线粒体抗体或其M2亚型、碱性磷酸酶的检测及肝脏病理活检3个标准中的两项来确立。因肝脏病理活检存在创伤性及取样误差，自身抗体的检测成为PBC诊断的重要手段，其对该病的发病机制、治疗及预后均有重要意义。本研究通过分析31例确诊PBC患者的自身抗体AMA、AMA－M2、抗核抗体（ANA）检测结果，初步探讨PBC患者自身抗体特点，以期为临床诊断提供实验室参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2011年1月至2014年3月在贵州省人民医院住院的PBC患者31例，男4例，女27例，年龄44～79岁，平均年龄（61.7±9.7）岁。

1.2 入选标准 参照2009年美国肝病学会（AASLD）修订的PBC的临床诊断指南［2］，符合以下两项可入选：（1）胆汁淤积的生化证据，主要基于碱性磷酸酶（ALP）升高；（2）AMA 阳性或 AMAM2阳性；（3）非化脓性破坏性胆管炎及小叶间胆管破坏的组织学证据。

1.3 方法和试剂 采用间接免疫荧光法进行AMA和ANA的检测，以抗体滴度≥1∶100为阳性，判读范围为（1∶100）、（1∶320）、（1∶1000）、（1∶3200）；采用免疫印迹法进行 AMA－M2的检测，以半定量（＋）为阳性，判读范围为（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）。DL1300－1601－3G抗肝抗原谱抗体IgG检测试剂盒（免疫印迹法）及FA1800－1010－2自身抗体谱IgG检测试剂盒（间接免疫荧光法），均为德国欧蒙医学诊断股份公司生产。试剂在有效期内使用，实验操作步骤及判断均按照试剂盒说明书进行。

1.4 统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件进行分析，计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 AMA检出结果 31例患者AMA阳性29例，阳性率93.55%。滴度为1∶100的6例（20.69%），1∶320的16例（55.17%），1∶1000的7例（24.14%），79.31%患者 AMA滴度≥1∶320。

2.2 AMA－M2检出结果 31例患者AMA－M2均为阳性，阳性率100%，半定量（＋）3例（9.68%），（＋＋）1例（3.22%），（＋＋＋）27例（87.10%），90.32%患者AMA－M2半定量≥（＋＋）。可见大部分PBC患者表达高水平的AMA和AMA－M2。见表1。

表1 AMA滴度与AMA－M2半定量表达情况 ［n（%）］

2.3 ANA检出结果 （1）ANA阳性检出结果：31例患者中ANA阳性22例，阳性率70.97%。提示多数PBC患者可伴随有ANA的出现。22例ANA阳性患者中AMA－M2均为阳性，21例合并AMA阳性。（2）ANA的荧光模型检出结果：22例ANA阳性的患者中，单一型荧光模型16例（72.72%），混合荧光模型6例（27.27%）。单一荧光模型为着丝点型6例（27.27%），核颗粒型6例（27.27%），核膜型3例（13.65%），核点型1例（4.54%）。混合荧光模型为核颗粒＋着丝点2例（9.11%），核颗粒＋核点1例（4.54%），核颗粒＋核膜1例（4.54%），核膜＋核点1例（4.54%），核膜＋着丝点1例（4.54%）。可见PBC患者以单一型荧光模型为主，单一型荧光模型中又以着丝点型、核颗粒型、核膜型为主要模型。（3）ANA的滴度检出情况：16例单一型荧光模型患者中滴度为1∶100有4例（25.0%），1∶320有8例（50.0%），1∶1000有4例（25.0%），其中75%的患者滴度≥1∶320。可见伴随ANA出现的PBC患者主要表达高滴度的ANA。（4）ANA与AMA、AMA－M2的关系：ANA在AMA各滴度组的表达，AMA＜1∶100组中ANA阳性1例（4.54%），AMA＝1∶100组中 ANA 阳性6例（27.27%），AMA≥1∶320组中 ANA 阳性15例（68.19%）。AMA≥1∶320组中ANA的阳性率与AMA＜1∶100组、AMA 1∶100组比较，差异有统计学意义（χ2＝33.48，P＜0.05）。ANA在 M2（＋）组中阳性3例（13.63%），在 M2（＋＋～＋＋＋）组中阳性19例（86.37%），两组比较差异有统计学意义（χ2＝142.22，P＜0.05）。说明表达高水平 AMA或AMA－M2的PBC患者ANA发生率明显高于表达低水平患者。

3 讨 论

PBC是最常见的一类自身免疫性肝病。近年来，随着人们对疾病认识的加深和诊断技术的提高，尤其是对自身免疫性肝病相关自身抗体筛查的临床应用，PBC在我国肝病患者中检出率逐年上升。自1965年人们首次发现PBC患者血清中存在AMA以来，该抗体已成为诊断PBC的标志性抗体，AMA可分为9个亚型，其中以M2亚型对PBC的诊断最具特异性［3］，AMA－M2的靶抗原是丙酮酸脱氢酶（PDC）的E2成分，主要存在于PBC患者胆管上皮细胞，有研究［4－5］报道，AMA 和 AMA－M2在 PBC患者的阳性率为92.5%和95%，本研究结果分别为93.5%和100%，较报道略高，可能与地区差异性及样本例数过少有关。本资料中AMA及AMA－M2均呈较高水平表达，与文献报道一致。但出现AMA与AMA－M2的不一致性，提示联合间接免疫荧光法和免疫印迹法检测，可避免漏诊和误诊。

除了AMA外，部分PBC患者中还存在ANA，其中核膜型和核点型ANA对PBC有较高的特异性，其针对的靶抗原主要为gp210和sp100，其敏感度为20%～35%，但特异性高达97%以上，可作为AMA阴性患者诊断PBC的血清学指标［6－8］。本文有1例AMA阴性ANA呈核膜型患者，针对此类较典型的荧光模型，进一步行靶抗原gp210的检测可避免PBC漏诊。本文结果显示PBC患者ANA特征如下：（1）检出率较高，达70.97%；（2）以单一型荧光模型为主，着丝点型、核颗粒型、核膜型是PBC患者ANA的主要荧光模式；（3）ANA主要出现在表达高水平AMA或AMA－M2的PBC患者中，且以高滴度为主。本资料中ANA的主要荧光模型中出现核颗粒型，与文献［9］报道不一致，提示可能重叠其他自身免疫病，可进一步行ANA谱检测，寻找其相应靶抗原，避免其他自身免疫病的漏诊。

AMA和AMA－M2为PBC特征性抗体，而表现为核膜型和核点型的ANA在PBC患者中有很高的特异性。间接免疫荧光法检测AMA、ANA和免疫印迹法检测AMA－M2有很高的诊断价值，两种方法检测结果有不一致性，联合两种方法检测，可提高PBC诊断的敏感性。

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