2013年武汉市呼吸道病毒感染病原谱分析研究

刘琳琳,方斌,李翔,叶国军,李国明

2013年武汉市呼吸道病毒感染病原谱分析研究

刘琳琳,方斌,李翔,叶国军,李国明

目的了解2013年武汉市呼吸道疾病病毒性病原谱构成。方法采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)方法对200份流感样病例标本进行16种病毒性病原体的检测。结果共检测出13种病毒阳性,总阳性率为43%;单病毒感染阳性率排名前3位的为鼻病毒(8.5%)、腺病毒(7.0%)、呼吸道合胞病毒A(4.5%);混合感染的比例占阳性病例的19.77%;性别对病毒感染阳性率并无明显影响;5岁以下婴幼儿是呼吸道病毒的主要感染人群,0～岁和1～5岁年龄组病毒阳性率较高,分别为40.6%和61.8%,60～岁年龄组病毒阳性率最低,为25.0%,且不同年龄组感染的优势病原有所差别;不同病毒感染季节性不同,有的病毒表现出严格的季节性,但总体而言冬春季病毒感染率较高。结论2013年武汉市上呼吸道感染的病原体以病毒为主,尤其在低龄幼儿组,鼻病毒、腺病毒及呼吸道合胞病毒感染为其上呼吸道感染的主要病原体。

呼吸道疾病;病毒性;病原谱

呼吸道病毒是侵犯呼吸系统、诱发呼吸道局部病变及引起呼吸道组织器官病变的一种病毒[1]。研究显示,呼吸道病毒为人类发病与死亡的主要危险因素之一,已经引起了广泛的关注[2-3]。流感样病例(influenza like illness,ILI),即发热(体温≥38℃),伴咳嗽或咽痛之一者。呼吸道病毒性疾病的表现主要以类流感样症状为主。为了解武汉市呼吸道病毒性疾病感染的病原谱,本研究对2013年武汉市两家流感监测哨点医院的病例标本进行了16种病毒性病原体的检测。

1 材料与方法

1.1 实验对象

本研究选择武汉市2所国家级流感监测哨点医院中的流感样病例标本作为实验对象,共收集发病3天内未使用过抗病毒药物的流感样病例标本200份。

1.2 实验方法

采用实时荧光定量PCR方法(Real-Time PCR)对标本进行检测,共检测16种常见呼吸道病毒,即流感病毒A(IVA)、流感病毒B(IVB)、人副流感病毒1(HPIV1)、人副流感病毒2(HPIV2)、人副流感病毒3(HPIV3)、人副流感病毒4(HPIV4)、鼻病毒(RHV)、人腺病毒(h Adv)、呼吸道合胞病毒A(RSVA)、呼吸道合胞病毒B(RSVB)、偏肺病毒(h MPV)、冠状病毒OC43型、NL63型、229E型及HKU1型(coronavirus OC43、NL63、229E、HKU1)、人博卡病毒(Hbov)。实验所需引物探针序列由中国疾控中心传染病监测技术平台项目提供。

1.3 试剂与仪器

选用AB life公司Real-Time PCR检测试剂盒,仪器为ABI公司荧光定量PCR仪7300型。

1.4 统计分析

利用Excel 2007建立数据库,采用SPSS 11.0版本对监测数据进行统计分析,绘制流行病学曲线图及表格。

2 结果

2.1 基本情况

纳入本次研究的200例ILI病例的年龄分布中,0～岁婴儿32例(占16%),1～5岁幼儿68例(占34%),18岁以上中青年96例(占48%),60岁以上老年人4例(占2%)。

2.2 多病原检测总体结果

用PCR方法对200例咽拭子样本进行16种病毒的病原体检测,共检出13种病毒阳性,共计阳性标本86例,病毒阳性检出率为43.00%;其中混合感染17例,占阳性结果的19.77%。阴性样本114例,占总样本量57.00%。

2.3 各呼吸道病毒感染比例

检出的13种病原体中,单一病毒感染病例的检出率由高到低排列依次为:RHV、h Adv、RSVA、IVA、RSVB、IVB、Hbov、OC43、HPIV2、HPIV3、HPIV4、h MPV及NL63;而HPIV、229E及HKU1型未被检出。见图1。共检测出17例病毒混合感染病例(占总体的8.50%,占阳性病例的19.77%),全部为双重感染。混合感染以RHV、RSVA、h Adv联合其他病毒为主。见表1。

表1 ILI标本多病毒混合感染情况 n,%

2.4 不同性别病毒感染情况

200例ILI咽拭子标本患者中,男性101例,女性99例,男女比例1.02∶1。86份病毒阳性标本中,男性病毒阳性标本39份,男性病毒阳性检出率为38.6%(39/101),女性病毒阳性标本47例;女性病毒阳性检出率为47.5%(47/99)。性别阳性率差异无统计学意义(χ2＝1.602,P＝0.253),男性和女性总体病毒感染率差异无统计学意义。

图1 单一病毒感染阳性率分布图

2.5 不同人群病毒检出阳性率

本实验检测显示,5岁以下婴幼儿是呼吸道病毒的主要感染人群,0～岁和1～5岁年龄组病毒阳性率较高,分别为40.6%(13/32)和61.8%(42/68),60～岁年龄组病毒阳性率最低,为25.0%(1/4)。不同年龄组的阳性检出率差异有统计学意义(χ2＝15.779,P＝0.001),0～岁组共检测出6种病毒,未检出h MPV、NL63型、各型流感病毒和副流感病毒;1～5岁组检出病毒种类最多,共检测出13种,其中HPIV3 和HPIV4型仅在混合感染病例标本中检出;18～岁组共检测出10种病毒,未检出hBov、NL63型和RSVB;60岁以上组仅检测出h Adv 1种,其他病毒未检出。hBov阳性标本全部来自5岁以下的婴幼儿,RHV阳性标本主要集中在0～岁婴儿组,HAdv阳性较多出现在1～5岁幼儿组,各型流感病毒和副流感病毒全部分布在1～5岁儿童和18～岁中青年人群。

2.6 不同人群感染的优势病原略有不同

0～岁组以RHV、RSVA多见;1～5岁组以h Adv、RHV、RSVB、IVA多见;18～组以RHV、RSVA、IVA较为多见。见表2。

表2 不同年龄组病毒感染阳性率比较 %

2.7 不同呼吸道病毒感染的时间分布

结合单一病毒感染病例和混合感染病例的病毒感染情况,IVA主要集中出现在秋冬季节9－12月,2月、3月和6月偶有出现,出现的多为H1N1pam。IVB主要出现在6月份和11－12月;冠状病毒感染主要集中在夏秋季7－11月;hBov和h MPV感染均表现出严格的季节性,hBov出现在夏季6－8月份,h MPV出现在冬春季1－3月;RSV在1－3月和7－ 11月均可检出,但其高峰在秋冬季节9－11月;RHV 和h Adv几乎全年都可检测到,没有明显的季节性。见表3。

表3 不同病毒的不同月份感染情况比较 n

3 讨论

呼吸道感染是严重威胁人类健康的疾病之一[4],尤其是对于5岁以下儿童,根据世界卫生组织统计,每年全球约有100万5岁以下儿童死于呼吸道感染[5];我国急性下呼吸道感染也是5岁以下儿童死亡是首要原因,远远高于腹泻和意外窒息等死因[6],而病毒是引起呼吸道感染的常见病原[7]。

本次研究采用Real-Time PCR方法对具备典型呼吸道感染症状的人群进行16种病毒病原体检测,标本采集时间均匀分布至全年,病例的年龄分布主要集中在婴幼儿及青壮年。经过检测发现,2013年武汉市人群呼吸道感染最易感染年龄段为1～5岁幼儿组,这与文献报道一致[8]。分析其原因主要有以下2个方面:①1岁以下的婴幼儿可通过母乳从母体获得被动的抗体,抵抗病毒感染;5岁以后,随着年龄的增长,其自身机体免疫功能趋于完善,病毒感染率下降。而1～5岁的儿童恰好处于两者间的过渡期,此时机体免疫力较低,极易遭受病毒感染。②此时期的儿童认知欲望强烈,活动频繁,日常易接触具有潜在危害的传染源,且个人卫生意识淡薄。本研究显示,不同人群病毒感染的病原谱有所区别,幼儿组较易受到病毒感染,且感染病毒主要为鼻病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒,这与文献报道一致[9],并且混合感染也以这3种病毒联合其他病毒感染阳性率较高,说明武汉市2013年上呼吸道感染病原谱前3位的病毒为鼻病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒;不同病毒感染季节性不同,有的病毒表现出严格的季节性,但总体而言冬春季病毒感染率较高。

通过本次研究,较为全面地揭示了2013年武汉市上呼吸道感染的病毒性病原谱,为临床医师用药、疫苗宣传接种时机和传染性疾病防控提供了具有导向意义的实验室资料,便于克服临床滥用抗生素等现象,可提高诊断的准确性和治疗的及时性。

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[9]彭颖,谢乐云,钟礼立,等.湖南地区2011～2012年急性下呼吸道感染住院儿童的病毒病原研究[J].医学临床研究,2014(4):767-770.

The Study on Pathogen Spectrum of Respiratory VirusInfection in Wuhan City,2013

LIU Linlin,FANG Bin,LI Guoming,et al.The Center for Disease Control and Prevention of Hubei Province,Wuhan,430079,China

ObjectivesTo learn the virus pathogen spectrum of respiratory diseases in Wuhan city,2013.MethodsThe Real-Time PCR was used to detect 16 kinds of virus pathogens in 200 samples.ResultsAltogether there were 13 kinds of virus detected positive and the total positive rate was 43%.The top three highest positive rate of single virus were RHV(8.5%),h Adv(7.0%)and RSVA(4.5%).The proportion of mixed infection was 19.77%.There was no significant effect on the sex to virus infection positive rate.The main infected crowd of respiratory virus was children below 5,and the top two high positive rate were the groups of below 1 and the 1～5 groups,which was 40.6%and 61.8%respectively.The lowest positive rate was up 60 group,which was 25%.There appeared different seasonal outbreak among different virus,and some viruses showed strict seasonal distribution.However,the infection positive rate in winter and spring were higher altogether.ConclusionsThe most proportion of up-respiratory infection was virus infection in Wuhan city,2013.Especially in young children groups,the infection of RHV,h Adv and RSV were the most common pathogens.

Respiratory disease;Virus;Pathogen spectrum

R373.1

ADOI:10.3969/j.issn.1673-5625.2015.05.025

2015-03-31)(本文编辑 杨婷婷)

湖北省医学领军人才培养工程专项资助

湖北省疾病预防控制中心病原微生物检测中心,湖北武汉,430079

李国明