一株病原性变形杆菌的分离鉴定及药敏试验
2014-12-31张超颖姜正前
张超颖 姜正前
摘要：从浙江省某规模猪场病死仔猪肝脏中分离到1株病原菌，通过细菌形态和培养特性观察、动物攻毒试验、生化鉴定表明该分离菌株为变形杆菌。药敏试验表明，该分离菌株对头孢曲松敏感，对大多数抗菌药物不敏感。
关键词：变形杆菌；分离鉴定；药敏试验
中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）10-0026-02
变形杆菌广泛存在于环境中，是一种条件致病菌，可引起人和多种动物发病。变形杆菌属于肠杆菌科，包括普通变形杆菌、奇异变形杆菌、莫根变形杆菌、雷极变形杆菌和无恒变形杆菌[1]。其中猪的变形杆菌病主要是由奇异变形杆菌引起的。该菌为革兰氏阴性短杆菌，形态多样，有时呈球形或丝状，该菌对营养要求不高，生长速度较快，在固体培养基上呈迁徙性、扩散性生长，形成铺满整个平板、厚薄交替的层层波状菌苔。近年来，我国对人和猪、鸡、牛发生变形杆菌的报道逐渐增多。作为规模化猪场环境中的优势细菌[2]，变形杆菌已成为危害我国养猪业的一种新的细菌。对变形杆菌进行分离鉴定，明确变形杆菌所引起的疾病在规模猪场中的流行情况，对疾病的防治具有重要意义。
2014年9月，浙江省某规模猪场的部分初生仔猪相继发病并死亡，临床症状以拉稀为主，粪便黄、绿色，稀糊状或水样，部分病猪关节有脓胞。曾用多种药物进行治疗，效果均不理想。经流行病学、细菌学、病理学综合诊断，确诊为仔猪变形杆菌病。现将其报道如下。
1 材料与方法
1.1 样品的采集
病料来源于浙江某规模化猪场，无菌采取某病死仔猪的肝脏作为待检材料。
1.2 试验动物
20 g左右的普通级成年昆明小鼠，购自金华市药监所。
1.3 培养基
试验所用培养基（普通营养肉汤、普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板等）购自青岛百博生物有限公司。
1.4 药敏试纸及试剂
庆大霉素等22种常用抗生素药敏试纸片，购自杭州微生物试剂有限公司；细菌微量生化反应管，购自杭州天和微生物试剂有限公司，批号20131120。
1.5 细菌的分离培养及形态观察
无菌操作，用接种环挑取病死仔猪肝脏内部组织划线接种于鲜血琼脂平板上，于37 ℃培养24 h后，挑取优势菌落再分别接种于鲜血琼脂平板和麦康凯琼脂平板，37 ℃条件下培养24 h，观察细菌生长情况。挑取纯培养物进行革兰氏染色和镜检。
1.6 生化鉴定
挑取纯培养物按常规方法[3]进行生化试验，观察并记录结果。
1.7 动物攻毒试验
取分离菌接种于普通营养肉汤，37 ℃培养24 h，腹腔接种5只小白鼠，0.2 mL/只，对照组注射等量的普通营养肉汤，观察其精神状态、食欲等，记录小白鼠的死亡时间。
1.8 药敏试验
用K-B纸片扩散法进行药敏试验[4]，用灭菌棉签将菌液均匀涂布于培养基表面，至菌液被完全吸收后，将不同的药敏纸片贴在培养基的适当位置。37 ℃培养24 h，观察并记录抑菌情况。
2 结果与分析
2.1 细菌的培养特性
分离到的细菌在普通营养肉汤、麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板上均能生长。在鲜血琼脂平板上，血琼脂颜色变暗红，有一股特殊臭味，细菌迁徙性生长覆盖整个平皿，呈半透明波纹状菌苔，无溶血现象。在麦康凯琼脂平板上无迁徙性、扩散性生长现象，呈均匀圆形、半透明的单个无色菌落；在普通营养肉汤中，呈均匀混浊样，管底可见少量沉淀。
2.2 细菌的形态特点
该分离菌革兰氏染色呈阴性，在显微镜下可见粉红色短杆菌，多形态，但较为一致。
2.3 细菌的生化特性
由表1可见，该分离菌符合变形杆菌的生化特征。
注：“+”表示阻性，“-”表示阴性。
2.4 动物攻毒试验
腹腔注射菌液4 h后，试验组小白鼠精神不振，活动能力下降；24 h后试验组小白鼠死亡2只；48 h后试验组小白鼠全部死亡。对照组小白鼠未出现任何异常。检查死亡小白鼠，可见肛门处有稀便粘着、肝脏、心脏具细小出血点。从死亡小白鼠的肝、脾中分离到的细菌，其培养特性、形态特征与之前死亡仔猪肝脏分离到的细菌一致。
2.5 细菌的药敏试验
分离菌株对头孢曲松最敏感，其次为多黏菌素B，对环丙沙星、氧氟沙星、氟哌酸、庆大霉素、丁胺卡那霉素、强力霉素、卡那霉素、氯霉素、林可霉素、先锋5号、痢特灵、磺胺等药物均不敏感。
3 小结与讨论
目前，规模猪场中仔猪腹泻很普遍，是引起仔猪死亡的一个重要原因。应对关键在于能够尽快查清病原，选择合适的药物进行及时准确的治疗。但是现在很多猪场对疾病的治疗多是凭经验自行选药，用药不够规范，抗生素滥用情况非常严重，容易产生耐药性，给细菌病的治疗带来困难，猪场损失严重。从本试验中可以看到，分离到的变形杆菌对大多数药物均不敏感，如果不在药敏试验的结果指导下合理选择治疗药物，将会非常盲目。变形杆菌作为条件性致病菌广泛存在于猪场环境中，当猪只抵抗力低时可以通过消化道、呼吸道等途径传播。该病已经成为危害养猪业的一种新的细菌性传染病，变形杆菌耐药性强，且其作为人畜共患传染病病原，应当引起猪场的高度重视。
参考文献：
[1] 陆承平.兽医微生物学[M].第三版.北京：中国农业出版社，2012.
[2] 李金良，李旭廷，聂 建，等. 2008～2009年西南地区规模化猪场病原菌耐药性流行情况调查[J].中国兽医杂志，2010，46（11）：15-18.
[3] 姚火春.兽医微生物实验指导[M].第二版.北京： 中国农业出版社，2010.
[4] 韩文瑜.病原细菌检验技术[M].长春： 吉林科学技术出版社，1992.
摘要：从浙江省某规模猪场病死仔猪肝脏中分离到1株病原菌，通过细菌形态和培养特性观察、动物攻毒试验、生化鉴定表明该分离菌株为变形杆菌。药敏试验表明，该分离菌株对头孢曲松敏感，对大多数抗菌药物不敏感。
关键词：变形杆菌；分离鉴定；药敏试验
中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）10-0026-02
变形杆菌广泛存在于环境中，是一种条件致病菌，可引起人和多种动物发病。变形杆菌属于肠杆菌科，包括普通变形杆菌、奇异变形杆菌、莫根变形杆菌、雷极变形杆菌和无恒变形杆菌[1]。其中猪的变形杆菌病主要是由奇异变形杆菌引起的。该菌为革兰氏阴性短杆菌，形态多样，有时呈球形或丝状，该菌对营养要求不高，生长速度较快，在固体培养基上呈迁徙性、扩散性生长，形成铺满整个平板、厚薄交替的层层波状菌苔。近年来，我国对人和猪、鸡、牛发生变形杆菌的报道逐渐增多。作为规模化猪场环境中的优势细菌[2]，变形杆菌已成为危害我国养猪业的一种新的细菌。对变形杆菌进行分离鉴定，明确变形杆菌所引起的疾病在规模猪场中的流行情况，对疾病的防治具有重要意义。
2014年9月，浙江省某规模猪场的部分初生仔猪相继发病并死亡，临床症状以拉稀为主，粪便黄、绿色，稀糊状或水样，部分病猪关节有脓胞。曾用多种药物进行治疗，效果均不理想。经流行病学、细菌学、病理学综合诊断，确诊为仔猪变形杆菌病。现将其报道如下。
1 材料与方法
1.1 样品的采集
病料来源于浙江某规模化猪场，无菌采取某病死仔猪的肝脏作为待检材料。
1.2 试验动物
20 g左右的普通级成年昆明小鼠，购自金华市药监所。
1.3 培养基
试验所用培养基（普通营养肉汤、普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板等）购自青岛百博生物有限公司。
1.4 药敏试纸及试剂
庆大霉素等22种常用抗生素药敏试纸片，购自杭州微生物试剂有限公司；细菌微量生化反应管，购自杭州天和微生物试剂有限公司，批号20131120。
1.5 细菌的分离培养及形态观察
无菌操作，用接种环挑取病死仔猪肝脏内部组织划线接种于鲜血琼脂平板上，于37 ℃培养24 h后，挑取优势菌落再分别接种于鲜血琼脂平板和麦康凯琼脂平板，37 ℃条件下培养24 h，观察细菌生长情况。挑取纯培养物进行革兰氏染色和镜检。
1.6 生化鉴定
挑取纯培养物按常规方法[3]进行生化试验，观察并记录结果。
1.7 动物攻毒试验
取分离菌接种于普通营养肉汤，37 ℃培养24 h，腹腔接种5只小白鼠，0.2 mL/只，对照组注射等量的普通营养肉汤，观察其精神状态、食欲等，记录小白鼠的死亡时间。
1.8 药敏试验
用K-B纸片扩散法进行药敏试验[4]，用灭菌棉签将菌液均匀涂布于培养基表面，至菌液被完全吸收后，将不同的药敏纸片贴在培养基的适当位置。37 ℃培养24 h，观察并记录抑菌情况。
2 结果与分析
2.1 细菌的培养特性
分离到的细菌在普通营养肉汤、麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板上均能生长。在鲜血琼脂平板上，血琼脂颜色变暗红，有一股特殊臭味，细菌迁徙性生长覆盖整个平皿，呈半透明波纹状菌苔，无溶血现象。在麦康凯琼脂平板上无迁徙性、扩散性生长现象，呈均匀圆形、半透明的单个无色菌落；在普通营养肉汤中，呈均匀混浊样，管底可见少量沉淀。
2.2 细菌的形态特点
该分离菌革兰氏染色呈阴性，在显微镜下可见粉红色短杆菌，多形态，但较为一致。
2.3 细菌的生化特性
由表1可见，该分离菌符合变形杆菌的生化特征。
注：“+”表示阻性，“-”表示阴性。
2.4 动物攻毒试验
腹腔注射菌液4 h后，试验组小白鼠精神不振，活动能力下降；24 h后试验组小白鼠死亡2只；48 h后试验组小白鼠全部死亡。对照组小白鼠未出现任何异常。检查死亡小白鼠，可见肛门处有稀便粘着、肝脏、心脏具细小出血点。从死亡小白鼠的肝、脾中分离到的细菌，其培养特性、形态特征与之前死亡仔猪肝脏分离到的细菌一致。
2.5 细菌的药敏试验
分离菌株对头孢曲松最敏感，其次为多黏菌素B，对环丙沙星、氧氟沙星、氟哌酸、庆大霉素、丁胺卡那霉素、强力霉素、卡那霉素、氯霉素、林可霉素、先锋5号、痢特灵、磺胺等药物均不敏感。
3 小结与讨论
目前，规模猪场中仔猪腹泻很普遍，是引起仔猪死亡的一个重要原因。应对关键在于能够尽快查清病原，选择合适的药物进行及时准确的治疗。但是现在很多猪场对疾病的治疗多是凭经验自行选药，用药不够规范，抗生素滥用情况非常严重，容易产生耐药性，给细菌病的治疗带来困难，猪场损失严重。从本试验中可以看到，分离到的变形杆菌对大多数药物均不敏感，如果不在药敏试验的结果指导下合理选择治疗药物，将会非常盲目。变形杆菌作为条件性致病菌广泛存在于猪场环境中，当猪只抵抗力低时可以通过消化道、呼吸道等途径传播。该病已经成为危害养猪业的一种新的细菌性传染病，变形杆菌耐药性强，且其作为人畜共患传染病病原，应当引起猪场的高度重视。
参考文献：
[1] 陆承平.兽医微生物学[M].第三版.北京：中国农业出版社，2012.
[2] 李金良，李旭廷，聂 建，等. 2008～2009年西南地区规模化猪场病原菌耐药性流行情况调查[J].中国兽医杂志，2010，46（11）：15-18.
[3] 姚火春.兽医微生物实验指导[M].第二版.北京： 中国农业出版社，2010.
[4] 韩文瑜.病原细菌检验技术[M].长春： 吉林科学技术出版社，1992.
摘要：从浙江省某规模猪场病死仔猪肝脏中分离到1株病原菌，通过细菌形态和培养特性观察、动物攻毒试验、生化鉴定表明该分离菌株为变形杆菌。药敏试验表明，该分离菌株对头孢曲松敏感，对大多数抗菌药物不敏感。
关键词：变形杆菌；分离鉴定；药敏试验
中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）10-0026-02
变形杆菌广泛存在于环境中，是一种条件致病菌，可引起人和多种动物发病。变形杆菌属于肠杆菌科，包括普通变形杆菌、奇异变形杆菌、莫根变形杆菌、雷极变形杆菌和无恒变形杆菌[1]。其中猪的变形杆菌病主要是由奇异变形杆菌引起的。该菌为革兰氏阴性短杆菌，形态多样，有时呈球形或丝状，该菌对营养要求不高，生长速度较快，在固体培养基上呈迁徙性、扩散性生长，形成铺满整个平板、厚薄交替的层层波状菌苔。近年来，我国对人和猪、鸡、牛发生变形杆菌的报道逐渐增多。作为规模化猪场环境中的优势细菌[2]，变形杆菌已成为危害我国养猪业的一种新的细菌。对变形杆菌进行分离鉴定，明确变形杆菌所引起的疾病在规模猪场中的流行情况，对疾病的防治具有重要意义。
2014年9月，浙江省某规模猪场的部分初生仔猪相继发病并死亡，临床症状以拉稀为主，粪便黄、绿色，稀糊状或水样，部分病猪关节有脓胞。曾用多种药物进行治疗，效果均不理想。经流行病学、细菌学、病理学综合诊断，确诊为仔猪变形杆菌病。现将其报道如下。
1 材料与方法
1.1 样品的采集
病料来源于浙江某规模化猪场，无菌采取某病死仔猪的肝脏作为待检材料。
1.2 试验动物
20 g左右的普通级成年昆明小鼠，购自金华市药监所。
1.3 培养基
试验所用培养基（普通营养肉汤、普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板等）购自青岛百博生物有限公司。
1.4 药敏试纸及试剂
庆大霉素等22种常用抗生素药敏试纸片，购自杭州微生物试剂有限公司；细菌微量生化反应管，购自杭州天和微生物试剂有限公司，批号20131120。
1.5 细菌的分离培养及形态观察
无菌操作，用接种环挑取病死仔猪肝脏内部组织划线接种于鲜血琼脂平板上，于37 ℃培养24 h后，挑取优势菌落再分别接种于鲜血琼脂平板和麦康凯琼脂平板，37 ℃条件下培养24 h，观察细菌生长情况。挑取纯培养物进行革兰氏染色和镜检。
1.6 生化鉴定
挑取纯培养物按常规方法[3]进行生化试验，观察并记录结果。
1.7 动物攻毒试验
取分离菌接种于普通营养肉汤，37 ℃培养24 h，腹腔接种5只小白鼠，0.2 mL/只，对照组注射等量的普通营养肉汤，观察其精神状态、食欲等，记录小白鼠的死亡时间。
1.8 药敏试验
用K-B纸片扩散法进行药敏试验[4]，用灭菌棉签将菌液均匀涂布于培养基表面，至菌液被完全吸收后，将不同的药敏纸片贴在培养基的适当位置。37 ℃培养24 h，观察并记录抑菌情况。
2 结果与分析
2.1 细菌的培养特性
分离到的细菌在普通营养肉汤、麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板上均能生长。在鲜血琼脂平板上，血琼脂颜色变暗红，有一股特殊臭味，细菌迁徙性生长覆盖整个平皿，呈半透明波纹状菌苔，无溶血现象。在麦康凯琼脂平板上无迁徙性、扩散性生长现象，呈均匀圆形、半透明的单个无色菌落；在普通营养肉汤中，呈均匀混浊样，管底可见少量沉淀。
2.2 细菌的形态特点
该分离菌革兰氏染色呈阴性，在显微镜下可见粉红色短杆菌，多形态，但较为一致。
2.3 细菌的生化特性
由表1可见，该分离菌符合变形杆菌的生化特征。
注：“+”表示阻性，“-”表示阴性。
2.4 动物攻毒试验
腹腔注射菌液4 h后，试验组小白鼠精神不振，活动能力下降；24 h后试验组小白鼠死亡2只；48 h后试验组小白鼠全部死亡。对照组小白鼠未出现任何异常。检查死亡小白鼠，可见肛门处有稀便粘着、肝脏、心脏具细小出血点。从死亡小白鼠的肝、脾中分离到的细菌，其培养特性、形态特征与之前死亡仔猪肝脏分离到的细菌一致。
2.5 细菌的药敏试验
分离菌株对头孢曲松最敏感，其次为多黏菌素B，对环丙沙星、氧氟沙星、氟哌酸、庆大霉素、丁胺卡那霉素、强力霉素、卡那霉素、氯霉素、林可霉素、先锋5号、痢特灵、磺胺等药物均不敏感。
3 小结与讨论
目前，规模猪场中仔猪腹泻很普遍，是引起仔猪死亡的一个重要原因。应对关键在于能够尽快查清病原，选择合适的药物进行及时准确的治疗。但是现在很多猪场对疾病的治疗多是凭经验自行选药，用药不够规范，抗生素滥用情况非常严重，容易产生耐药性，给细菌病的治疗带来困难，猪场损失严重。从本试验中可以看到，分离到的变形杆菌对大多数药物均不敏感，如果不在药敏试验的结果指导下合理选择治疗药物，将会非常盲目。变形杆菌作为条件性致病菌广泛存在于猪场环境中，当猪只抵抗力低时可以通过消化道、呼吸道等途径传播。该病已经成为危害养猪业的一种新的细菌性传染病，变形杆菌耐药性强，且其作为人畜共患传染病病原，应当引起猪场的高度重视。
参考文献：
[1] 陆承平.兽医微生物学[M].第三版.北京：中国农业出版社，2012.
[2] 李金良，李旭廷，聂 建，等. 2008～2009年西南地区规模化猪场病原菌耐药性流行情况调查[J].中国兽医杂志，2010，46（11）：15-18.
[3] 姚火春.兽医微生物实验指导[M].第二版.北京： 中国农业出版社，2010.
[4] 韩文瑜.病原细菌检验技术[M].长春： 吉林科学技术出版社，1992.
