HPLC法测定金芪胶囊中芍药苷的含量

彭金香，吴 沣，陈秋凤，陈龙全

1.湖北民族学院中医药学院(湖北恩施445000)

2.恩施自治州中心医院(湖北恩施445000)

金芪胶囊是恩施州中心医院经批准生产的自制制剂，处方由黄芪、白芍、广金钱草、茵陈、川楝子(炒 )、郁金、香附(醋制)、鸡内金(炒)、六神曲(炒)、白术(炒)、黄连、丹参、延胡索等17味中药组成。其功效主要为清肝利胆，和胃止痛。用于急慢性胆管、胆囊炎，慢性胃炎，慢性结肠炎等。该制剂临床疗效准确，作用显著。白芍是君药，为毛茛科植物芍药的干燥根，其质量要求含芍药苷不得少于1.2%[1]。目前对该制剂的质量控制只有部分粉碎药材显微鉴别、黄芪甲苷的定性检验等，没有针对主药进行含量监测。本研究采用高效液相色谱法(HPLC)测定金芪胶囊中芍药苷的含量，该方法操作易行，稳定可靠，可用于金芪胶囊的质量控制。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(LC－20AD，日本岛津);自动进样器(SIL－10ADvp)，检测器(SPD－M10Avp)，十万分之一的电子分析天平(BP211D，德国塞多利斯)，HS6I50型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

芍药苷对照品(110736－200732，中国药品生物制品检定所);甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸、乙醇为分析纯，水为娃哈哈纯净水。金芪胶囊(批号2013203，2014079;2014100)及阴性样品由恩施州中心医院制剂室提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱Hypersil ODS柱(200 mm×4.6mm，5μm);乙腈－0.1%磷酸溶液(12 ∶88) 为流动相[2];流速 1.0mL/min[3];检测波长 230 nm[4]，柱温为30℃[5]，理论板数按芍药苷峰计算不低于2 000[6]，进样量为 10μL[7]。

2.2 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的芍药苷12.24mg，加甲醇并定于100mL量瓶中作为对照液。

2.3 供试品溶液的制备精密称取金芪胶囊内容物5g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50mL[8]，称定质量，超声处理(功率 240 W，频率 24 kHz)[9]，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过 0.45μm 微孔滤膜[10]，即得。

2.4 干扰试验精密称取不含白芍的阴性样品5g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50 mL。称定质量，超声处理(功率240W，频率24kHz)，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。

精密量取芍药苷对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液10 μL分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，供试品与对照品溶液在相应的位置上有相同的峰，而阴性样品不干扰测定，见图1～图3。

图1 芍药对照品

图2 供试品

图3 阴性对照

2.5 标准曲线的制备精密量取对照品溶液2.5，5，10，15，20μL 分别进样，按“2.1”的色谱条件测定，以进样质量为横坐标、峰面积积分值为纵坐标，经线性回归，回归方程为 Y=1.06×10X+6.75×105，r=0.9996。芍药苷在 0.31～2.45 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验精密量取芍药苷对照品溶液(0.1224mg/mL)10 μL，依照“2.1”的色谱条件，连续进样 6次，记录峰面积，计算芍药苷 RSD=0.95%，表明精密度良好。

2.7 稳定性考察取同一批样品，按供试品溶液制备方法制备，分别在 0、3、6、9、12、24 h，进样 10 μL，记录峰面积，RSD=1.09%，表明芍药苷在24 h内稳定。

2.8 重复性试验取同一批金芪胶囊供试品5份，按“2.3”项下方法制备，精密吸取 10 μL，进样，记录峰面积。芍药苷RSD=1.43%，表明重复性良好。

2.9 加样回收率试验精密称取已知含量的金芪胶囊内容物5份，分别加入芍药苷对照品1 mL(0.1224mg/mL)，按“2.3”项下的方法进行处理，进样 10 μL，计算芍药苷的回收率为 99.33%，RSD=0.14%，见表1。

2.10 样品含量测定取3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.1”项下的色谱条件测定，每个样品重复测定3次，记录峰面积，用外标法计算芍药苷含量，结果见表2。

表1 芍药苷加样回收试验结果

表2 样品中芍药苷含量测定结果

3 讨论

芍药苷是白芍的最主要的药用成分，具有镇静、解痉、抗炎等作用。芍药苷的含量越高，药用价值越大，不同白芍的芍药苷含量差别很大，为保证金芪胶囊的疗效稳定，需要监测白芍中芍药苷的含量。芍药苷的性质稳定，受热不分解，目前常用测量方法是HPLC法，其分离效能高、灵敏度高、分析速度快，所以，金芪胶囊中的芍药苷的含量测定适合用HPLC法。

本研究结果说明该实验方法精密度良好，稳定性强，重复性好，回收率高，阴性对照溶液在与芍药苷对照品相同保留时间处未出现色谱峰，认为无干扰，证明本方法准确可靠，可用于金芪胶囊的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版，2010:96－97.

[2] 邓开英，朱必越，朱照静.HPLC同时测定独活寄生丸中的2个活性成分[J].华西药学杂志，2014，29(2):204.

[3] 鲍邢杰，宿树兰.对《中国药典》2010版1部中白芍中芍药苷含量测定方法的探讨[J].时珍国医国药，2012，23(5):1310.

[4] 白雪媛，常桂娟，杨吉平，等.HPLC法测定血复生片中芍药苷的含量[J].中药新药与临床药理，2014，25(2):216.

[5] 张学婷，刘启德，曾武，等.HPLC法同时测定桂附地黄丸中马钱苷、芍药苷、丹皮酚和没食子酸的含量[J].中药新药与临床药理，2014，25(2):201.

[6] 张庆，马骏，辛俐华.高效液相色谱法测定鳖甲煎丸中芍药苷和黄芩苷的含量[J].医药导报，2013，32(3):356.

[7] 盛燕，陈浩，张文婷.百合固金片质量标准研究[J].医药导报，2014，33(2):247.

[8] 陈晓燕，李顺祥.HPLC法测定阿归养血糖浆中芍药苷含量[J].中医药导报，2009，15(3):82.

[9] 周山，周晓东，丁青龙，等.HPLC法同时测定复方五仁醇软胶囊中绿原酸、药苷、五味子醇甲、五味子乙素[J].南京中医药大学学报，2014，30(1):79.

[10] 杜伟锋，胡淑珍，吴芳，等.不同等级杭白芍中3个有效成分的考察[J].中成药，2014，36(2):359.