莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞增殖及凋亡作用的影响
2014-12-16徐天娇何宁周丽洪博李晓明
徐天娇 何宁 周丽 洪博 李晓明
(齐齐哈尔医学院医药科学研究中心 黑龙江齐齐哈尔 161006)
莪术(curcuma)为蓬莪术、温莪术或广西莪术的根茎,莪术醇是中药莪术的提取物莪术油中的主要成分,具有抗肿瘤、抗病毒、抗血栓等作用。研究发现,莪术醇在体外可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞,宫颈癌HeLa细胞,肝癌HepG2细胞等。本研究意在探讨莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞增殖及凋亡作用的影响。
1 材料
(1)细胞株。人脑胶质瘤U251细胞株购于中国科学院细胞库。(2)药物与试剂。莪术醇标准品购于上海纯优科技有限公司,MTT、二甲基亚砜购于sigma公司,胎牛血清购于HYCLONE公司,AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。
2 方法
图1 MTT检测莪术醇对U251细胞增殖的影响
图2 莪术醇对U251细胞凋亡的影响
(1)细胞培养。U251接种于50ml培养瓶内,在含10%FCS DMEM培养基中常规培养,待细胞长到80%后,常规消化细胞,1:4传递,取对数生长期细胞进行实验。(2)MTT法检测对U251细胞增殖的影响。将U251接种于96孔板待贴壁后加入莪术醇使终浓度分别为12.5、25、50、100μg/ml,同时设空白对照和调零孔,继续培养24h后,加入MTT(5mg/ml)20μl/孔,继续培养4h,弃去培养液,加入150μl DMSO,混匀,10min后在酶联免疫检测仪波长490nm处读数。(3)流式细胞术检测对U251细胞凋亡的影响。将U251接种于6孔板待细胞贴壁后,加入莪术醇使终浓度分别为12.5、25、50、100μg/ml,对照组不加药。培养24h后用不含EDTA的胰酶消化收集,PBS 洗涤2次,收集细胞,加入500μl Binding Buffer重悬细胞,然后先后避光加入5μL Annexin V-FITC和5μL Propidium Iodide,混匀,避光反应10min,流式细胞仪进行检测。(4)统计学分析。所有数据以均数±标准差表示,采用SPSS 13.0专用数理统计分析软件对数据进行单因素方差分析极显著性检验(P＜0.05)。
3 结果
3.1 莪术醇对U251细胞增殖的影响
用MTT法检测莪术醇对U251细胞增殖的影响,结果显示,不同浓度的莪术醇(12.5、25、50、100μg/ml)与对照组相比较均有显著性差异(P＜0.05),表明莪术醇对U251细胞具有不同程度的抑制作用,并成浓度依赖性。(见图1)
3.2 莪术醇对U251细胞凋亡的影响
用流式细胞仪检测莪术醇对U251细胞凋亡的影响,结果显示,不同浓度的莪术醇(12.5、25、50、100μg/ml)凋亡率较对照组明显升高,具有显著性差异(P＜0.05),表明莪术醇能够诱导U251细胞凋亡。(见图2)
4 讨论
胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,发病率约占颅内原发肿瘤的50%,其中以脑恶性胶质瘤最为突出,生存率不到10%。由于其具有多质性和浸润性,临床上手术、放疗、化疗等综合治疗只能延长患者生命并不能彻底根治,临床迫切需要寻找新的治疗方法。
莪术醇是中药莪术的提取物莪术油中的主要成分,具有抗肿瘤、抗病毒、抗血栓、抑制细胞的增殖、促进细胞的凋亡;抑制血管生成;抑制细胞的侵袭和转移等。近来研究表明莪术醇对胃癌、白血病、妇科肿瘤、肝癌和肺癌等均具有作用。
本研究利用MTT法和流式细胞检测法检测莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞的增殖及凋亡作用的影响,结果显示,莪术醇具有抑制U251细胞增殖和促进U251细胞凋亡的作用,为研制有效的治疗胶质瘤的药物提供了实验基础。
