银杏叶黄酮类活性物质的提取条件研究

张弘

（天津市食品研究所有限公司，天津301609）

银杏（Gingko biloba Linn）又名白果、公孙树，属于我国的特产植物资源，是现存种子植物中最古老的植物，其产量占世界总量的70%以上。黄酮类化合物是银杏叶中主要的药效成分[1]。银杏叶黄酮主要是以黄酮糖苷的形式存在，主要是由山奈酚、槲皮素以及异鼠李素等黄酮苷元与葡萄糖等单糖以O-糖苷键联接而成，以该种形式存在的黄酮占到提取物黄酮总含量的95%以上[2]。

银杏黄酮类化合物的生理活性作用非常广泛[3-4]，具有软化血管、生物抗氧化性、抗衰老、清除自由基作用、降低毛细血管通透性、降血脂降血压作用[5]、抗菌作用、降低血糖作用、免疫作用、抗癌作用、镇痛作用、抗炎作用、对消化性溃疡的保护作用等药用保健功能，其对冠状动脉硬化、高血压及心绞痛等疾病疗效明显，具有较强的药用价值。目前，银杏黄酮化合物的提取方法有超临界流体提取、有机溶剂提取、水提取等方法[6]。本研究通过采用水提法技术分离和提取银杏叶黄酮，以期获得较高的黄酮类化合物得率和黄酮含量的提取工艺，为研究和利用银杏叶黄酮类活性物质提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

干银杏叶：天津阳成生物科技有限公司提供；芦丁标准品：上海豪曼生物科技有限公司；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、盐酸、蒸馏水。

1.2 仪器

DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司；FW135型高速万能粉碎机：北京市永光明医疗仪器厂；FA2004型电子天平：上海精科天平；TDA-8002恒温水浴锅：天津市中环实验电炉有限公司；Spectrum-723可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；LD5-10型低速离心机：北京医用离心机厂；FD-1A-50型真空冷冻干燥机：北京博医康实验仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 银杏叶预处理

取一定量的银杏叶置于高速万能粉碎机中，粉碎2 min后取出，过40目筛，放在烧杯里备用。

1.3.2 水浸法提取银杏叶黄酮类物质

准确称取银杏叶粉末5 g，置于圆底烧瓶中，加入200 mL蒸馏水，在不同的时间、温度、pH、料液比条件下，水浴振荡，离心10 min，取上层清液，摇匀，准确吸取1 mL置于10 mL比色管中，比色。

1.3.3 银杏叶黄酮类物质含量及黄酮得率的测定

银杏叶黄酮含量测定采用NaNO2-AL（NO3）3-NaOH络合吸光法[8]，总黄酮含量测定采用以芦丁为对照的分光光度法。标准曲线的绘制按如下步骤进行：

准确称取6.5 mg芦丁标准样品，用水溶解后定容于50 mL容量瓶，得浓度为0.13 mg/mL芦丁标准液。准确吸取芦丁标准液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于10 mL比色管中，加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min后加入质量分数10%的AL（NO3）3溶液0.3mLl，摇匀，放置6 min后加入质量分数4%的NaOH溶液4.0 mL，再用蒸馏水定容，摇匀，以蒸馏水为空白参比，10 min后用1 cm比色皿于500 nm处测定吸光度A，以吸光值为纵坐标，芦丁取样量为横坐标，绘制标准曲线见图1。

图1 芦丁标准曲线Fig.1 Rutin standard curve

得到芦丁含量Y（mg/mL）与吸光度A间的回归方程：

Y=0. 0809A+0. 0002 R2=0. 9999

取1 mL黄酮浸提液，用1.3.3方法测定浸提液中黄酮含量。

浸提液中总黄酮得率计算公式：

2 结果与分析

水浸提法提取银杏叶黄酮正交实验结果见表1、表2。

表1 银杏叶黄酮水浸提法提取工艺因素水平表L9（34）Table 1 Factor and levels about ginkgo biloba flavonoids water extraction process

如表1和表2所示，通过统计分析结果可知，水浸提法提取银杏叶黄铜的最佳工艺条件为A2B2C1D1，即 pH 为 9.5、固液比为 1∶40（g/mL）、浸提时间为 3.5 h、浸提温度为85℃。其中温度对浸取率的影响最大，其次是浸提时间。采用最佳工艺条件，银杏叶黄酮的提取率达到1.49%，影响因子大小的排序，方差与极差分析结果是一致的。

表2 水浸提法提取银杏叶黄酮正交试验表Table 2 Orthogonal experiment result of water extraction to extract flavonoids from ginkgo

3 结论

银杏叶中黄酮类化合物的浸取可以用水作为浸取剂。以水作浸取剂时，温度对浸取率的影响最大。若温度低，浸取率低；而升高温度有利于浸取率增加，但温度过高，黄酮类化合物的活性易被破坏。试验中选择85℃为佳。固液比（银杏叶∶浸取剂）为1∶40（g/mL），浸取3.5 h时浸取率最高。浸取率随pH的增加而增加，但碱性过强会降低黄酮类化合物的生物活性，因此选择pH=10为宜。采用最佳工艺条件，银杏叶黄酮的提取率达到1.49%。

[1] 苗建英.银杏叶中黄酮类化合物提取工艺研究[J].中成药,2006,28(7)：17-18.

[2] 蔡健,华景清,周翠英.黄酮提取工艺研究进展[J].淮阴工学院学报,2003,12(5)：83

[3] 张小清.酶解溶剂提取银杏叶活性成分工艺条件[J].应用化学,2005,34(10)：641-643

[4] 祝玲,叶曼红.微波辅助萃取银杏叶中的黄酮类物质的研究[J].材料科学,2006(8)：11-12

[5] 康西鹏,张云.银杏叶的研究进展及应用[J].山西食品工业,2001(1)：17-18

[6] 纵伟.酶法提取银杏叶中总黄酮的研究[J].食品与机械,2000(1)：13-15