乳腺癌血流动力学的超声表现与微血管密度及血管内皮生长因子的研究

2014-12-13夏玉光张成双丁宝维

安徽医药 2014年10期

夏玉光，邓莉，张成双，丁宝维

(中国人民解放军第425医院超声科，海南三亚 572000)

乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，仅次于宫颈癌，随着近几年人们对生育观念的改变及工作压力的增大，乳腺癌有逐年升高的趋势，严重威胁着妇女的生命健康。有研究报道［1－2］，2008年女性乳腺癌的发病率为 60/10 万，病死率为70%～80%。众所周知，彩色多普勒超声主要检测肿瘤内血管生成、血流动力学特点及血管的形态［3］。微血管密度(Microvessel Density，MVD)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是采用免疫组化方法检测微血管生成的定量指标，主要是检测新生血管的数量，是目前公认的评价肿瘤生成的可靠指标［4－5］。因此本研究应用彩色多普勒超声观察乳腺癌患者的血流动力学特点、免疫组化方法检测MVD及VEGF评价乳腺癌的血管生成情况，为临床治疗提供具有价值的决策，尽最大努力减少乳腺癌的复发及转移。

1 资料与方法

1.1 研究对象收集本院普外科2011年至2013年10月术前经彩色多普勒超声诊断为乳腺肿块，并在术后可由病理科获得病理切片的56例患者，年龄在35～62岁，并经病理证实为乳腺癌。

1.2 彩色多普勒超声检查采用阿洛卡F75彩色超声诊断仪，探头频率3～9 Hz。患者采取仰卧位，充分暴露乳房，对乳房肿块的部位、形态、边缘是否整齐、回声是否均匀等情况进行探查。并获取稳定的血流频谱图像，根据Adler的判断标准将血流分级:0级:病灶内无血流显示;Ⅰ级:少量血流，1～2个点状或细短棒状血流信号;Ⅱ级:中量血流，3～4个点状或1条主要的较长血流信号;Ⅲ级:丰富血流，5个以上的点状或是2条较长的血流信号。

1.3 免疫组化方法测量 MVD及 VEGF 购买鼠抗人CD34单克隆抗体、鼠抗人VEGF单克隆抗体、S-P试剂盒和阳性切片。采用S-P法，步骤按照试剂盒说明书进行。

1.3.1 MVD计数参照Weidner血管计数法，首先选择在低倍镜(100)，先选取染色最明显且较清楚的区域，再高倍镜下观察被染成棕色的细胞及细胞丛(作为1个血管)。以5个高倍镜的均数表示血管数。

1.3.2 VEGF染色结果在癌细胞胞质内VEGF蛋白阳性呈棕色，根据染色情况将程度进行分级:未被染色的肿瘤细胞为VEGF阴性;6%～10%的肿瘤细胞着色(+);11%～50%的肿瘤细胞着色(++);＞50%的肿瘤细胞着色(+++)。

1.4 统计学分析采用SPSS 13.0进行统计数据的处理，首先对研究对象的一般特征进行统计描述，然后对乳腺癌患者术前超声血流动力学表现与术后组织MVD和VEGF的关系，以及采用χ2检验进行分析，最后分别计算三者及三者联合的敏感性和特异性。所有检验均为双侧检验，P ＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌患者一般特征的描述本研究共纳入56例患者，其中术前经超声发现淋巴结转移的患者24例，无淋巴结转移者32例。肿瘤血流情况为:0级9个，Ⅰ级18个，Ⅱ级16个，Ⅲ级13个。术后病理发现浸润性导管癌26例，浸润性小叶癌14例，导管内癌9例，黏液癌7例。年龄均在35～62岁，平均年龄为(44.32±2.85)岁。肿瘤位于左侧30例，右侧26例。根据免疫组化结果发现，MVD≤20的患者为22例，≥21的为34例;VEGF阳性患者44例，VEGF阴性患者12例，见表1。

表1 乳腺癌患者术前血流动力学表现与术后组织MVD的比较

2.2 乳腺癌患者术前超声血流动力学表现与术后组织MVD的比较乳腺癌患者术前超声血流动力学与术后组织MVD的比较发现，血流动力学与MVD之间差异具有统计学意义(χ2=10.700，P=0.013)。血流动力学分级 0 级及Ⅰ级时，MVD≤20的患者显著多于MVD≥21的患者;而血流动力学分级为Ⅱ级和Ⅲ级时，MVD≤20的患者显著小于MVD≥21的患者。

2.3 乳腺癌患者术前血流动力学表现与术后组织VEGF的比较乳腺癌患者术前超声血流动力学与术后组织VEGF的比较发现，血流动力学与VEGF之间差异具有统计学意义(χ2=7.993，P=0.046)。血流动力学分级 0 级时，VEGF阳性的患者显著多于VEGF阴性的患者;而血流动力学分级为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级，VEGF阳性的患者也占较大的比例，见表2。

表2 乳腺癌患者术前血流动力学表现与术后组织VEGF的比较

2.4 三种指标以及三者联合诊断乳腺癌的比较术前超声表现、术后组织MVD及VEGF三者联合诊断乳腺癌的敏感性比单一方法诊断显著增高，但特异度低于单一指标，其中超声检查的特异度最高。联合诊断的准确性(90.34%)也较高，见表3。

表3 三种诊断方法以及三者联合诊断乳腺癌的比较(%)

3 讨论

本研究资料表明，乳腺癌患者术前超声血流动力学与术后组织MVD和VEGF之间差异均具有统计学意义。血流动力学分级为Ⅱ级和Ⅲ级时，MVD≥21和VEGF阳性的患者均占较大的比例。这就说明血流动力学分级越大，MVD计数和VEGF阳性的患者就越多。

如其他实体肿瘤一样，乳腺癌的生长也需要新生血管的生成，而血管生成是指在血管生成因子的刺激下，微血管内皮细胞重新进入细胞增殖周期，通过芽生方式形成新生毛细血管的过程［6－7］，生成程度可由MVD计数来进行评价。而VEGF是一种细胞因子，由肿瘤细胞分泌，并作用于血管内皮细胞，以增加血管的通透性，使血管内的营养物质外渗，进一步促进了肿瘤的生长［8－9］。本研究的结果就可以表明，VEGF诱发肿瘤新生血管生长，使肿瘤MVD个数增加，血流供应丰富，血流速度增加。

彩色多普勒超声是评价肿瘤患者血流动力学无创便捷的方法，而且也是诊断乳腺癌首选方法。而且随着近几年超声技术的发展，可根据超声探及多少不等的血流信号，而且敏感性较高。而病灶部位MVD密集且血流丰富的原因可能是［10－11］肿瘤血液循环的建立主要是在肿瘤细胞分泌的各种血管生成因子的诱导下，毛细血管开始朝向肿瘤部位发展，形成更多的新血管，但是肿瘤血管与正常结构的血管并不一致，最主要的特点是分支较多，并且缺乏弹性，这样就会使肿瘤出的血流量增大。

但本研究在术前行超声发现有9例患者病灶处无血流信号，但是MVD计数≥21却有3例，VEGF阳性者有4例，这就说明超声检查的灵敏性不如免疫组化方法，当然也可能是由超声仪器的灵敏度和操作者的熟练程度所致，或者是因为本研究纳入的例数较少，而且进行的回顾性研究，对结果产生一定的影响。此外，本研究还发现术前超声特异度较高，是因为超声对乳腺组织结构显示清晰，可以准确测量肿块内部及周围的血流信号［12］;三者联合诊断乳腺癌的敏感性较高，原因是超声可以在术前对肿瘤血管生成情况及血流状态进行诊断，MVD及VEGF也可以在术后通过切片可以发现病灶的血管生成情况，并且MVD密集程度和VEGF染色情况可以说明肿瘤血管生成的情况，这就表明联合应用这三项指标可以为患者的诊断、治疗及预后提供有效的临床信息，更可以最大程度地降低复发及转移。

综上所述，超声及免疫组化分析(MVD及VEGF)在乳腺癌诊断中具有重要价值，三者联合应用可进一步提高诊断可靠性和准确性，故值得推广。

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