Twist-2在宫颈癌中的表达及意义

魏 岩，吴 强

(1.南京医科大学附属肿瘤医院妇瘤外科，江苏南京 210000;2.安徽省马鞍山市妇幼保健医院妇科，安徽马鞍山 243011)

宫颈癌是临床上最常见的妇性恶性肿瘤之一，其发病率高居女性恶性肿瘤第二位，次于乳腺癌。我国每年宫颈癌的发病人数约占世界总发病人数的1/5，尤为高发。子宫颈癌的主要病因与高危型人乳头瘤病毒(HPV)的存在癌基因表达有密切关系［1］。据报道，早期宫颈癌行手术治疗患者的5年生存率可高达90%，而中晚期患者的生存预后均不理想。随着诊疗手段的不断发展，新柏氏液基细胞学技术(TCT)的广泛运用为宫颈癌的早期诊断提供了有力支持，但中晚期患者肿瘤细胞的转移及复发目前还没有有效治疗手段。最新研究证实，上皮细胞间质化(EMT)与肿瘤的转移及复发密切相关，其中Twist-2作为EMT的主要转录因子均被证实与很多恶性肿瘤密切相关［2－4］，但在宫颈癌领域的研究国内报道尚不多见。本次试验旨在研究Twist-2在宫颈癌中的表达情况，并为评估宫颈癌患者的生存预后提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 随机选取马鞍山市妇幼保健院及马鞍山市中心医院2006年1月—2008年5月的60例宫颈癌手术患者，平均年龄(50.7±4.6)岁，基本资料完整，术前均未行化疗治疗。同期选取45例CIN病变行宫颈锥切术或子宫全切术患者以及20例因子宫肌瘤行全切术患者作为对照组。

1.2 方法 应用石蜡处理标本后切成厚约为3～4 μm，60℃温箱烤片2 h作为备用。主要试剂:Twist-2抗体为上海群已生物公司的兔抗人单克隆抗体，二抗为美国Epitomics公司的浓缩羊抗兔IgG多克隆抗体，SP免疫组织化学试剂盒来自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化染色所有操作步骤均按试剂盒说明书，抗原修复方式为热修复。PBS代替一抗为阴性对照。

1.3 判定标准 两位病理医师独立看片，根据片中阳性细胞染色占所观察细胞数总数的百分比及阳性细胞或胞浆的染色强度对切片进行评分。染色强度:无色计为0分，淡黄色、棕黄色、棕褐色分别计为1分、2分、3分。阳性细胞所占百分比:小于5%计为0分;5% ～10%计为1分;11%～50%计2分;51% ～75%计3分;大于75%计4分。根据两项指标乘积分成4级:1～3分示阴性(－);4～5分示弱阳性(﹢)，6～7分示中阳性(﹢﹢)，8分及以上示强阳性(﹢﹢﹢)。

1.4 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件对数据结果进行检验，计数数据采用卡方检验，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 Twist-2在不同宫颈组织中的表达 按照免疫组化SP法对组织进行染色，Twist-2主要定位于细胞核与细胞质中，阳性成淡黄色或深褐色表达。20例正常宫颈组织中仅有1例的Twist-2呈弱阳性表达(1/20)，同期45例CIN组织中Twist-2也类似于正常宫颈组织(7/45)，而60例宫颈癌组织中Twist-2表达明显强于以上两种组织(46/60)，差异有高度统计学差异(P ＜0.001，图1、表1)。

2.2 Twist-2表达与临床资料的关系 表2可得出Twist-2的表达与患者的年龄和淋巴转移无明显相关性(P＞0.05)，而与患者的临床分期、分化程度及5年生存存在相关性(P ＜0.05)。

图1 Twist-2在不同类型宫颈组织的表达

表1 Twist-2在不同类型宫颈组织的表达

3 讨论

宫颈癌是我国女性最常见的恶性肿瘤之一，其中鳞癌占到整个宫颈癌发病的80%。以往的研究表明，HPV病毒的感染是宫颈癌发病的最主要因素，尤其以HPV16、HPV18两种亚型为著［5］。随着现代TCT技术的不断普及，使得宫颈癌的发病率得到了有效控制，早期诊断早期治疗的宫颈癌患者5年生存率明显上升，宫颈癌患者主要死于肿瘤的转移及复发，而浸润及转移也是所有肿瘤细胞共同的生物学特性。因此寻找出一种可能在肿瘤发生、发展过程中起决定行作用的因子对宫颈癌患者的诊断及治疗都将起着决定性作用。

表2 Twist-2的表达与宫颈癌患者临床资料的关系

上皮细胞间质化(EMT)是指上皮细胞在特定生理病理情况下向间充质细胞转化的过程［6］。最新研究进展表面，发生EMT的上皮细胞经过结构性的改变，极性丧失，细胞迁移能力和运动能力加强，同时细胞表型由上皮表型发展呈间质表型，因此EMT是恶性肿瘤侵袭转移的最重要因素［7］。EMT的致癌信号通路可以促进上皮性肿瘤细胞的侵袭能力，并增强恶性肿瘤原先生物学特性如抗凋亡，逃避免疫监视，化疗耐药等［8－10］。EMT的过程主要由转录因子Twist家族(Twist-1、Twist-2)、snail家族(ANAL1/snail、ANAL2/snail)以及 ZEB 家族(ZEB1、ZEB2)所控制调控［11－12］。随着人们对EMT分子机制的了解深入，发现EMT过程在很多实体恶性肿瘤中都存在恶性表达，如乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、腺样囊性癌，舌鳞癌等［2－4、13－14］。相关研究表明，作为 Twist家族的重要成员，Twist-2可诱导EMT过程的发生。但目前对于Twist-2的研究还处于初步阶段，国内外关于该因子在宫颈癌细胞中表达的报道也很少见［15］。本组试验中我们以Twist-2为研究对象，测定其在宫颈癌组织中高表达(76.6%)，明显高于宫颈CIN组织(15.6%)及正常宫颈组织(10%)，差异有统计学意义(P＜0.001)。Twist-2的表达与宫颈癌患者的年龄和淋巴转移无明显相关性(P＞0.05)，而与患者的临床分期、分化程度及5年生存存在相关性(P ＜0.05)。

肿瘤细胞的转移及复发是临床上治疗的难点，也是导致患者死亡的最重要原因。本次研究我们发现Twist-2在宫颈癌细胞中存在高表达情况，并与患者的临床分期、肿瘤的分化程度及5年生存直接相关。Twist-2作为EMT的关键因子在宫颈癌的发生发展、侵袭转移过程中均起到的重要作用，为评估宫颈癌患者的生存预后提供理论依据。

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