高效液相色谱法测定解郁安神颗粒中甘草苷的含量

郑篮君 应翔 王琤帅 舒展

解郁安神颗粒是由甘草、柴胡、远志、栀子、百合、茯苓、当归、半夏等16味中药提取物制成的颗粒剂, 具有舒肝解郁、安神定志的功效。临床用于情志不畅、肝郁气滞所致的失眠、心烦、焦虑、健忘；神经官能症、更年期综合征见上述证候者［1］。甘草苷为君药甘草的主要有效成分［2］。中国药典(2010年版一部)仅收载了栀子苷的含量测定, 为了更有效的控制该中成药的质量, 在该制剂中增加了甘草苷含量测定, 并对其方法学进行验证。

1 仪器与试药

Agilengt 1100型高效液相色谱仪, 包括HP1100系列四元泵, DAD检测器, Agilent 1200自动进样器, HP1100化学工作站；Mettler AE240电子分析天平(梅特勒公司)；DSA100-GL2型超声波清洗器(福州德森精工有限公司)。甘草苷对照品(中国药品生物制品检定所, 批号：11610-200604)；解郁安神颗粒(四平市吉特药业有限公司, 批号：20120702、20120811、20121008)；阴性样品 (自制 )；乙腈 (色谱级, 美国Tedia公司)；水(超纯水)；其他试剂为分析纯。

图1 对照品(A)、供试品(B)和阴性样品(C)色谱图；1.甘草苷

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-SP C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸(55:45)；流速：1.0 ml/min；检测波长：276 nm；柱温：35℃；进样量：10 μl；理论塔板数按甘草苷峰计算, 应不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取甘草苷对照品适量, 加50%乙醇制成每毫升含10 μg的溶液, 即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品研细, 精密称取细粉约0.5 g, 加入50%乙醇50 ml, 称定重量, 超声处理30 min, 放冷, 用50%乙醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例自制不含甘草苷提取物的颗粒, 作为空白制剂, 再按供试品溶液的配制方法制成阴性对照溶液。

2.5 干扰实验 精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各10 μl, 按“2.1”项下色谱条件下测定。结果,供试品溶液中其他成分不干扰测定。结果见图1。

2.6 线性关系考察 精密称取甘草苷对照品适量, 加50%乙醇溶解并制成每毫升含1.05 mg的溶液, 作为储备液。分别精密量取对照品储备溶液适量制成浓度为10.5、21、52.5、84、105 μg/ml的对照品溶液。取10 μl注入高效液相色谱仪,按“2.1”项下进样, 以浓度为横坐标(X), 峰面积(Y)为纵坐标,进行线性回归, 其回归方程为Y=17.452 X-3.9041, r=0.9999。结果表明甘草苷在进样量0.105～10.5 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

2.7 精密度试验 取供试品溶液照“2.1”项下色谱条件重复进样6次, 结果甘草苷峰面积的RSD为0.40%, 表明精密度良好。

2.8 重复性试验 取同一批样品(批号：20120702)5份, 照“2.3”项下方法和“2.1”项下色谱条件制成供试品溶液并测定,计算甘草苷的含量, 其RSD值为0.52%, 表明重复性良好。

2.9 稳定性试验 取精密度试验供试品溶液, 分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定, 结果甘草苷峰面积的RSD为0.55%,表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.10 回收率试验 称取已知含量的供试品(批号：20120702)约0.5 g, 精密称定, 共取6份, 分别精密加入含甘草苷0.1385 mg/ml的对照品溶液各1 ml, 照“2.3”项下方法和“2.1”项下色谱条件制成供试品溶液并测定, 按外标法计算甘草苷含量, 并计算回收率。结果甘草苷的平均回收率为98.1%(n=6), RSD为0.91%。

2.11 样品含量测定 取3批供试品(批号：20120702、2012081、20121008), 按照“2.3”项下方法和“2.1”项下色谱条件制成供试品溶液并测定, 按外标法计算甘草苷含量,结果分别为0.2771、0.2656、 0.2713 mg/g。

3 讨论

3.1 提取方法的选择 作者曾采用甲醇、流动相、不同浓度乙醇提取本品, 结果表明甲醇、流动相提取效率低于乙醇, 考察各种浓度乙醇提取本品, 结果表明50%乙醇提取甘草苷峰面积最大；因此采用50%乙醇为提取溶剂；同时考察不同超声时间对样品测定的影响, 结果表明超声30 min后甘草苷峰面积不再增大；故选择样品处理方法为50%乙醇超声30 min。3.2 检测波长的选择 取甘草苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液采用紫外-可见分光光度计在 190～400 nm进行UV扫描, 结果表明, 在276 nm和312 nm 波长处阴性对照溶液无吸收而甘草苷具有较大的吸收值, 但在276 nm波长处的灵敏度>312 nm, 因此在本方法中选用 276 nm为测定波长。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北京:化学工业出版社, 2010:1195.

［2］郑虎古, 董泽宏, 佘靖, 等.中药现代研究与应用.北京:学苑出版社, 1997:1256.