Skp2/p27在老年女性子宫内膜癌中的表达

徐 跃 崔艳双 范艳艳 (深圳市南山区妇幼保健院，广东 深圳 518000)

子宫内膜癌(EC)可能与月经失调、绝经、外源性雌激素补充或糖尿病有关〔1，2〕。子宫内膜癌与其他恶性肿瘤一样，生物学特征在于细胞周期调节紊乱，影响细胞周期调节的因素都可影响肿瘤发生发展。从影响细胞周期的蛋白着手寻找与子宫内膜癌发生和发展敏感及特异的标志物，有助于在基因诊断或治疗方面提供依据。S期激酶相关蛋白2(Skp2)/p27在众多恶性肿瘤中作为调节细胞周期的通路已得到验证〔3〕，但在子宫内膜癌中的作用较少报道。

1 对象与方法

1.1 对象 收集2010年1月至2014年4月在我院和吉林大学第一医院妇科接受手术并经术后病理检查确诊为子宫内膜癌的老年女性患者的子宫内膜癌标本65例作为子宫内膜癌组，年龄(65.3±5.2)岁。选择同期进行因良性病变切除的子宫标本43例作为对照，年龄(67.1±7.5)岁。患者均知情同意。

1.2 排除标准 合并子宫内膜异位症、腺肌病者;其他妇科恶性肿瘤者;妊娠或哺乳期;术前半年内接受激素治疗、放疗或化疗。

1.3 检测 采用S-P法检测子宫内膜组织中Skp2和P27蛋白表达、放大200倍镜下观察5个视野，每个视野计数100个细胞，计阳性细胞数，将检测结果分为四个等级:着色强度无、弱、中和强分别记分:0～3分，阳性细胞比例计分:0分:＜20%、1分:20% ～50%、2分:50% ～75%，3分:＞75%。综合染色强度与阳性细胞数量两者相加分为3级:0～2分:“～”、3～4分:“+”、＞5分:“++”。

1.4 统计学处理 采用SPSS15.0软件，计数资料组间比较采用χ2检验或方差分析，采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 两组Skp2和p27蛋白表达比较 Skp2主要表达于细胞核中，细胞核染成棕黄色为阳性细胞;p27主要表达于细胞核，细胞质少量表达，呈棕黄色颗粒状。对照组Skp2和p27蛋白阳性例分别为8例〔+5例(11.6%)，⧺3例(7.0%)〕和38例〔+15例(34.92%)，⧺23例(53.5%)〕，子宫内膜癌组 Skp2和p27蛋白阳性例分别为54例〔⧺2例(18.54%)，⧺42例(64.64%)〕与18例〔+13例(20.0%)，⧺5例(7.7%)〕。与对照组比，子宫内膜癌组Skp2蛋白的表达较高(P＜0.01)，p27蛋白表达较低(P＜0.01)，见图1。

2.2 不同组织学分级和临床分期子宫内膜癌患者组织Skp2和p27蛋白表达 不同组织学分级、不同临床分期患者组织中Skp2和p27蛋白表达差异有统计意义(P＜0.05)，见表1。

图1 两组Skp2和p27蛋白表达比较(×200)

表1 不同组织学分级和临床分期子宫内膜癌患者组织Skp2和p27蛋白表达〔n(%)〕

2.3 子宫内膜癌组织中Skp2和p27蛋白表达的相关性Spearman等级相关分析显示Skp2和p27的表达呈负相关(r=－0.38，P ＜0.05)。

3 讨论

Skp2属于人F-box蛋白家族，通过在细胞周期调控因子的泛素依赖性蛋白水解途径的特异性识别底物参与细胞周期的调控。研究显示子宫内膜癌Skp2阳性率是正常分泌期宫内膜的50倍，即便是增殖期仍低于子宫内膜癌的表达，子宫内膜腺癌的Skp2随着组织学级别G1、G2和G3的增高、淋巴结转移、淋巴管浸润等表达阳性率逐渐增高〔4〕。Skp2在细胞周期的调控中发挥重要作用〔5〕。真核细胞通过泛素蛋白酶降解途径降解泛素化的蛋白质调控细胞周期，泛素连接酶复合物作为泛素连接酶，参与细胞周期调控因子的泛素依赖性蛋白水解，Skp2在泛素连接酶复合物对蛋白底物起着特异识别作用，p27、p53及p21均通过Skp2依赖性泛素蛋白酶体途径降解，Skp2的表达水平与组织的恶性程度密切相关。研究显示有丝分裂原不存在但生长抑制因子存在时，Skp2可缩短初期肝细胞G～S期过渡时间，体内肝细胞中转染Skp2可促进大量肝细胞的复制和肝组织增生，提示Skp2参与G～S期过渡调控，具有致癌作用;Skp2参与细胞DNA的合成，具有调控细胞进入S期的作用，敲除Skp2基因的小鼠的细胞核明显增大，细胞内出现多中心体，表现为增长减慢甚至凋亡;Skp2参与转录调控，Skp2在参与c-myc的泛素化作用和蛋白酶体降解时，也作为c-myc的联合转录因子显示协同转录作用，另外，阻断Skp2与转录因子E2F-1的相互作用可使转录因子E2F-1的泛素化降低。本课题结果显示Skp2在正常子宫内膜呈低表达，但在子宫内膜癌组织呈现高表达，活性增强，与文献结果一致〔6，7〕，Skp2 过表达促进子宫内膜癌细胞的增殖，利于肿瘤浸润性生长。

p27蛋白是细胞周期蛋白激酶抑制因子，可抑制CDK2/cyclinE和CDK2/cyclinD复合物活性负性调节细胞周期，阻止细胞由G1期转至S期而停止增殖，在细胞的分化发育中起着重要作用。p27表达异常与肿瘤的发生发展有关，如p27表达的增加能明显提高HT29结肠癌细胞系对诱导分化的敏感性，通过腺病毒载体构建高表达的p27，可以导致裸鼠食道癌的存活素水平下降，诱导食道癌细胞的凋亡，查耳酮通过上调p27的表达水平诱导人乳腺癌细胞凋亡〔8，9〕。本课题显示子宫内膜癌组织的p27蛋白表达降低或缺失，与文献结果一致〔10〕。p27参与控制细胞周期进程，通过抑制 CyclinE-CDK2与 CyclinDCDK4激酶复合物活性，与细胞凋亡发生有着密切关系，其中CyclinE-CDK2是促使细胞通过G/S限制点的关键酶，抑制机制:(1)通过C端Thr磷酸化位点抑制CDK2-Thr160的磷酸化，抑制CyclinE-CDK2前活性状态复合物激活;(2)抑制Cyclin-CDKs组蛋白H激酶活性;(3)抑制Cyclin-CDKs对融合蛋白Rb的磷酸化，使细胞周期停止于G～S期;(4)可部分参与细胞停止分裂和启动细胞分化〔11，12〕。

Skp2与p27存在相互制约，互为增减的关系。在鼠细胞核中cyclinD1与Cdk4表达引起的新生心肌细胞的增殖，Skp2可在细胞周期中降解p27，当剔除鼠心肌细胞的p27，心肌的增殖加速〔13〕。Skp2与p27在许多恶性肿瘤如上皮性腺癌、非小细胞肺癌等存在负相关关系。上皮性腺癌Skp2 mRNA表达水平都增高，同时发现伴随Skp2的表达增加，p27水平下降，Skp2过度表达与预后较差显著相关。本课题中老年女性子宫内膜癌的Skp2与p27表达呈显著的负相关关系，与文献结果一致〔14〕。Skp2有致癌基因的作用，p27蛋白有抑癌基因作用，p27蛋白是Skp2泛素化降解的主要底物，Skp2作用于p27的羧基端，诱导p27与Skpl-Cull-Rbxl-Skp2泛素连接酶复合体结合，被26S蛋白酶体降解，引起cyclinE/CDK活化及Rb蛋白磷酸化，释放转录因子E2F，促进细胞通过G1-S期转换，加快细胞周期行，使细胞增殖失控，因此Skp2蛋白的高表达是p27蛋白水平减少的原因之一〔15，16〕。Skp2-p27可能形成了致癌通路，临床已在一些恶性肿瘤的治疗采用抑制或敲除Skp2基因可以上调p27蛋白表达，达到抑制恶性肿瘤的发生发展，提示也是基因治疗的新靶点，那么子宫内膜癌未来的治疗方向也将朝向基因靶点。

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