补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1与脂联素水平的关系

辛雅萍 付艳芹 张东铭 王崇贤 张苏河 (郑州大学第二附属医院内分泌科，河南 郑州 450014)

肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)为新近发现的一种新型的脂肪细胞因子，为CTRP超家族成员之一，与脂联素(ADPN)具有相似的空间结构〔1〕。国外研究显示，将体外重组补体C1q CTRP1注入小鼠体内能显著降低其血糖水平〔2〕。另有试验表明CTRP1可升高血压，调节血脂，改善肥胖，抗动脉粥样硬化的作用〔3〕。但是目前尚无有关2型糖尿病(T2DM)患者CTRP1的临床研究。ADPN是另一种脂肪细胞因子，其临床降低血糖，降低血脂，改善胰岛素抵抗，拮抗动脉粥样硬化形成的作用已被广泛证实〔4〕。本文旨在探讨CTRP1在健康老年人及T2DM及其并发症患者中的表达水平，重新分组后研究CTRP1的相关因素及其与ADPN的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011年9月至2012年6月郑州大学第二附属医院内分泌科及心内科住院老年患者。非糖尿病组42例，其中男22例，女20例，平均年龄(68.54±7.26)岁，为健康体检者，排除DM、高血压、冠心病(CHD)健康老年人。T2DM组30例，其中男16例，女14例，平均年龄(65.70±7.13)岁;无DM急慢性并发症，未应用胰岛素及胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类治疗。并发症组32例，其中男16例，女16例，平均年龄(69.91±7.93)岁。根据典型的临床表现和典型的心电图或冠脉造影显示管腔直径减少70%～75%确立诊断，亦排除应用胰岛素及胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类治疗者。CHD组31例，其中男15例，女16例，平均年龄(68.81±7.21)岁，亦根据典型的临床表现和典型的心电图或冠脉造影显示管腔直径减少70% ～75%确立诊断。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有研究对象均于清晨空腹抽取肘静脉血4 ml。用于血清CTRP1、ADPN水平及一般生化指标测定。

1.2.2 血清CTRP1水平的测定 采用酶联免疫吸附(ELISA)法。试剂盒购自Biovendor代理公司:上海普迈生物科技有限公司。严格按说明书操作。(1)标准品的稀释，加样。(2)样品稀释，加样。(样品最终稀释度为20倍)。(3)温育:用封板膜封板后置37℃温育30 min。(4)洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5次，拍干。(5)加酶:每孔加入酶标试剂50 μl，空白孔除外。(6)温育:操作同(3)。(7)洗涤:操作同(5)。(8)显色:每孔先加入显色剂A50 μl，再加入显色剂B50 μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 min。(9)终止:每孔加终止液50 μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。(10)测定:以空白孔调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15 min以内进行。

1.2.3 ADPN测定方法同上。试剂盒购自北京岳泰生物技术公司，严格按说明书操作。

1.2.4 体重指数(BMI)及血脂测定 血脂由全日立7060自动生化分析仪测定，甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)采用CHOD-PAD法，试剂购自上海易博生物技术有限公司;高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)采用清除法，试剂盒购自上海金标生物技术公司。

1.3 统计学方法 应用SPSS19.0软件进行正态性检验和方差齐性检验，多组间样本均数的比较采用单向方差分析及最小显著(LSD)t检验;两组间样本均数的比较采用t检验;相关性用Pearson直线相关分析。

2 结果

2.1 各组一般资料比较 见表1。

2.2 非DM组与DM组血清CTRP1水平 DM组血清CTRP1水平〔(602.33 ±145.41)ng/ml〕明显高于非 DM 组〔(448.97 ±213.05)ng/ml〕(P ＜0.05)。

2.3 非DM组与DM组血清CTRP1相关分析 非DM组CTRP1与各指标无明显相关性。DM组 CTRP1与 BMI、TG、FPG、HOMA-IR、TNF-α呈正相关;与ADPN呈负相关。见表2。

表1 各组一般资料比较(s)

表1 各组一般资料比较(s)

与对照组比较:1)P＜0.05;与T2DM组比较:2)P＜0.05;与并发症组比较:3)P＜0.05

组别 n(男/女)AGE BMI(kg/m2)SBP(mmHg)DBP(mmHg)TC(mmol/L)病尿病组 42(20/22)68.54 ±7.26 23.84 ±1.70 114.38 ±10.59 70.81 ±7.44 4.66 ±0.63 T2DM 组 30(16/14)65.70 ±7.13 25.85 ±1.981) 124.70 ±14.811) 78.93 ±11.901) 5.59 ±0.931)并发症组 32(16/16)69.91 ±7.93 26.15 ±2.641) 138.22 ±22.221)2) 80.47 ±13.951) 6.56 ±1.161)2)CHD 组 31(15/16)68.81 ±7.21 24.29 ±1.882)3) 136.94 ±28.731)2)3) 82.97 ±17.551) 4.82 ±1.082)3)组别 TG(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)FPG(mmol)HbA1c(%)糖尿病组 1.50 ±0.91 1.32 ±0.27 2.39 ±0.47 4.45 ±1.05 5.11 ±1.84 T2DM 组 1.91 ±1.44 1.16 ±0.281) 2.90 ±0.571) 8.95 ±0.841) 7.68 ±0.971)并发症组 2.87 ±0.841)2) 1.02 ±0.341) 3.39 ±0.741)2) 11.07 ±1.891)2) 9.04 ±1.471)2)CHD 组 2.32 ±2.171) 1.12 ±0.331) 2.72 ±0.741)3) 5.32 ±0.651)2)3) 4.72 ±0.842)3)

表2 非DM组、DM组CTRP1与各指标相关性

3 讨论

本文实验结果表明，CTRP1与DM相关。国外唯一的临床研究是关于CTRP1与代谢综合征患者的研究，其结果显示，CTRP1与代谢综合征有明显的相关关系〔5〕。本实验结果支持这一结论。其机制可能为CTRP1刺激肾上腺分泌醛固酮，激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统有关〔5〕。

国外动物研究示，ADPN基因敲除的正常喂养小鼠未出现血糖升高及胰岛素抵抗现象，而其体内CTRP1水平显著提高〔6，7〕，提示CTRP1可能存在与ADPN相似的降低血糖改善胰岛素抵抗的生物学作用;另有试验进一步证实将CTRP1注入小鼠体内能显著降低血糖水平。本研究观察了CTRP1与血糖的关系，发现DM组两者存在正相关关系，推测患者CTRP1水平升高可能是血糖升高的反馈结果。而CTRP1水平与ADPN水平存在负相关关系，提示两者为存在动态平衡，当血糖升高时ADPN水平下降，CTRP1水平升高进而起到拮抗血糖进一步升高，维持血糖的作用。有关于DM大鼠的研究显示，DM肥胖大鼠较消瘦的DM大鼠有更高的CTRP1表达，提示CTRP1与肥胖有关。鉴于CTRP1可激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统，有升高血压的作用，但本研究示CTRP1与血压无明显关系，这可能与患者应用降压药物有关。

1 Schäffler A，Buechler C.CTRP family:linking immunity to metabolism〔J〕.Trends Endocrinol Metab，2012;23(4):194-204.

2 Wong GW，Krawczyk SA，Kitidis-Mitrokostas C，et al.Molecular，biochemical and functional characterizations of C1q/TNF family members:adipose-tissue-selective expression patterns，regulation by PPAR-γ agonist，cysteine-mediated oligomerizations，combinatorial associations and metabolic functions〔J〕.Biochem J，2008;416(2):161-77.

3 Peterson JM，Aja S，Wei Z，et al.CTRP1 protein enhances fatty acid oxidation via AMP-activated protein kinase(AMPK)activation and acetyl-CoA carboxylase(ACC)inhibition〔J〕.J Biol Chem，2012;287(2):1576-87.

4 Xu A，Vanhoutte PM.Adiponectin and adipocyte fatty acid binding protein in the pathogenesis of cardiovascular disease〔J〕.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2012;302(6):H1231-40.

5 Chalupova A，Zakovska A，Adamcova K.Development of a novel enzymelinked immunosorbent assay(ELISA)for measurement of serum CTRP1:A pilot study:Measurement of serum CTRP1 in healthy donors and patients with metabolic syndrome〔J〕.Clin Biochem，2013;46(1-2):73-8.

6 Davis KE.Adiponectin:no longer the lone soul in the fight against insulin resistance〔J〕?Biochem J，2008;416(2):e7-9.

7 Nawrocki AR，Rajala M，Tomas T，et al.Mice lacking adiponectin show decreased hepatic insulin sensitivity and reduced responsiveness to peroxisome proliferator-activated receptor γ agonists〔J〕.J Biol Chem，2006;281(5):2654-60.