稳心颗粒剂在大鼠心肌缺血再灌注损伤时对冠脉内皮细胞的影响

王 多 刘艳萍 刘 全 (一汽总医院心内科，吉林 长春 300)

近年来随着再灌注治疗方法的建立和推广，心肌的缺血再灌注损伤十分常见。多年来的研究表明，内皮细胞损伤是缺血再灌注损伤的主要机制，其尽管不是心肌梗死的起因，但其功能的受损却加重了梗死区的扩大及心功能的恶化。因此，采取一系列方法保护内皮细胞成为减轻缺血再灌注损伤的关键。稳心颗粒是一种中成药，主要成分有党参、黄精、三七、甘松，临床主要用于治疗心律失常，有关稳心颗粒对血管内皮特别是冠脉内皮影响的动物实验及进一步研究未见相似报道。本研究拟探讨在心肌缺血再灌注损伤时稳心颗粒对冠脉内皮细胞的影响及其机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组和造模 健康体重约为220～280 g雌雄各半的SD大鼠160只(符合国家动物协会实验动物标准)，随机分为假手术组、缺血再灌注组、稳心颗粒大剂量组和稳心颗粒小剂量组。在缺血再灌注模型建立前4天，假手术组和缺血再灌注组每只每日给予生理盐水(1.0 ml/100 g)灌胃，稳心颗粒大剂量组和稳心颗粒小剂量组分别每日给予生理盐水稀释的稳心颗粒18 g/kg，9 g/kg灌胃。以上四组大鼠在实验前1 h再进行1次灌胃。每组随机分成两个亚组，一组腹主动脉采血检测血清一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，另一组做电镜标本。缺血再灌注组和两组给药组将大鼠用乙醚吸入麻醉后固定在手术台上，沿正中线剪开其胸前的皮肤，在大鼠左前胸第4、5肋间用止血钳拨开，暴露心脏，在左冠状动脉近端下穿3-0号缝线结扎左冠状动脉(缝线打活结)，随后关胸，1 h后松开缝线再灌注6 h，之后用5%戊巴比妥钠(1 ml/100 mg)腹腔麻醉后，开腹在腹主动脉采血。并打开胸廓，将心脏全部取出，在结扎线下取心肌组织，置于4%戊二醛溶液中固定，按常规方法制作电镜标本。假手术组手术方法同上，但不结扎左冠状动脉。

1.2 生化指标测定 取全血放入试管中，2 500 r/min离心10 min，取血清放-20℃冰箱保存。血清NO测定采用硝酸还原酶法，血清中的SOD、MDA测定分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法，所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.3 电镜制作 缺血再灌注组、稳心颗粒大小剂量组每组各取1只，迅速去心脏，在结扎线下损伤的心肌组织处取5 mm×5 mm×2 mm组织各1块，置于4%戊二醛溶液中固定，送电镜室经脱水、包埋、切片、载网、染色后进行电镜(JEM-1200EX/S型透射电镜，日本光学电子公司生产)观察，摄片。

1.4 统计学处理 用SPSS11.5软件进行处理，数据以s表示，各组间数据显著性检验采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 血清中SOD、MDA的改变 血清SOD:与缺血再灌注组比较，假手术组与两给药组显著升高(P＜0.05);与假手术组比较，两给药组差异无显著性;两给药组之间差异无显著性。血清MDA:与缺血再灌注组比较，假手术组与两给药组显著降低(P＜0.05);与假手术组比较，两给药组差异无显著性;两给药组之间差异无显著性。见表1。

表1 各组血清SOD、MDA的改变(n=10)

2.2 血清中 NO的改变 与缺血再灌注组〔(14.66 ±2.58)μmol/L〕比较，假手术组〔(18.84 ±2.56)μmol/L〕与两个给药组血清 NO〔大剂量组(14.24 ±3.74)μmol/L，小剂量组(9.86 ±3.10)μmol/L〕显著升高(P ＜0.05);与假手术组比较，大剂量组升高(P＜0.05);两给药组之间差异显著(P＜0.05)。

2.3 电镜结果 缺血再灌注组可见部分血管内皮细胞核不规则，核内染色质趋边凝聚，基膜溶解，内皮细胞上出现突起，细胞质致密，局部呈水肿状，周细胞体水肿，呈空化。内皮细胞内线粒体轻度肿胀。两给药组可见血管内皮细胞基膜较清楚，内皮细胞表面仍有突起，其内未见染色质趋边凝聚，核内基质轻度空化，内皮细胞内线粒体未见肿胀及空化。

3 讨论

临床实验报道〔1〕，以诊断标准符合WHO推荐的冠心病及诊断标准的冠心病心绞痛患者为研究对象，通过测量肱动脉内径，间接检测血管内皮功能，结果发现稳心颗粒能够改善冠心病患者动脉内皮功能，具体机制尚不清楚，可能与其改善微循环、扩张血管、降低管壁张力、利于受损的血管内皮修复有关。

NO是血管内皮细胞分泌的一种内皮细胞依赖性舒张因子，生理状态下与ET各自维持其生理释放量，保持动态平衡，调节血管的舒缩。本实验结果提示内皮细胞的完整性与血清中NO的含量密切相关，内皮细胞结构越完整，NO含量越高，因此，NO是反映冠脉内皮细胞功能的重要指标。虽然两给药组电镜下结构完整性未见明显差异，但NO分泌量随应用稳心颗粒剂量的增加而增加。该结论与Wei等〔2〕的实验结果一致，应用药物削弱缺血再灌注中NO释放的减少，可以起到保护心肌细胞和内皮细胞的作用。

缺血再灌注时氧自由基的爆发性产生，结果导致心肌SOD活性明显下降，大量产生的氧自由基不能被及时清除，与细胞膜性结构发生脂质过氧化反应，生成大量MDA。而两给药组血中SOD的相对增多说明缺血再灌注损伤可抑制氧化酶的活性，而稳心颗粒通过其抗氧化作用有效地保护对内皮细胞及心肌细胞。

1 张华茹，张勇刚.步长稳心颗粒治疗冠心病心绞痛及对动脉内皮功能的影响〔J〕.步长稳心颗粒临床应用征文论文集，2003;12:377-8.

2 Wei LC，Ching HC，Yang CW，et al.The vascular and cardioprotective effects of liriodenine in ischemia-reperfusion injury via NO-dependent pathway〔J〕.Nitric Ocide，2004;11:307-15.