兔、豚鼠动脉粥样硬化模型的建立

卞 勇，鞠晓云，范乃兵

（南京中医药大学，江苏 南京 210023）

动脉粥样硬化及其并发症严重危害人类健康。动脉粥样硬化的发病机制复杂，是多种因素长期共同作用的结果。探明动脉粥样硬化发病机理、筛选研究有效治疗药物是国内外研究的重点和难点，而建立一种与人类动脉粥样硬化发病机制、临床表现相一致或接近的整体动物模型则是进行上述研究的关键。近年来，国内外学者使用鸟类、鼠类、兔、猪、非人灵长类动物和转基因动物等用于实验性动脉粥样硬化的研究，在取得诸多进展的同时，也逐步发现模型的缺陷和不足，限制了其应用。

1 实验材料

1.1 实验动物

兔，体重2.5～3.0kg，雄性，金陵种兔场，合格证号：SCXK（苏）2012-0003。豚鼠，体重280～310g，雄性，南京江宁区青龙山动物繁殖场，合格证号：SCXK（苏）2012-0008。

1.2 药物及试剂

总胆固醇试剂盒：南京建成生物研究所，批号：20130917。甘油三酯试剂盒：南京建成生物研究所，批号：20130822。高密度脂蛋白试剂盒：南京建成生物研究所，批号：20131024。低密度脂蛋白试剂盒：南京建成生物研究所，批号：20130915。一氧化氮试剂盒：南京建成生物研究所，批号：20130825。肿瘤坏死因子ELISA 试剂盒：南京建成生物研究所，批号：20130711。高脂饲料：1%胆固醇，0.3%胆酸钠，10%猪油，88.7%普通饲料。

1.3 试验仪器

Thermo Multiskan Go酶标仪；日立7100型全自动生化分析仪（751-0082）。

2 实验方法［1～6］

将豚鼠和兔子分别随机分为：正常对照组（饲普通饲料）、模型组（1%胆固醇，0.3%胆酸钠，10%猪油，88.7%普通饲料），每组10只，连续饲养8周。在第4、8周，豚鼠眼眶取血，兔耳缘静脉取血，备用。于末次饲养后禁食不禁水8h，用3%戊巴比妥钠麻醉后将动物固定于手术台，颈总动脉取血，备用。分离主动脉，10%中性福尔马林固定，做组织病理学检测。

3 检测指标

3.1 血脂检测

血液3000r／min，离心10min，吸取上层血清，用日立7100型全自动生化分析仪检测血清中血清TG、TC、HDL、LDL含量。

3.2 血清NO、TNF-α含量检测

血液3000r／min，离心10min，吸取上层血清，按试剂说明检测NO、TNF-α含量。

3.3 主动脉组织病理学检测

取主动脉，10%福尔马林固定。石蜡包埋切片，切片厚约4～5μm，HE染色。由病理专业研究人员阅片，光镜下观察动脉壁（内膜、中膜）的组织学变化。

4 统计学方法

5 实验结果

5.1 对血脂的影响

高脂饲料喂养4 周后，兔模型组TC、TG、LDL 明显升高，与正常组比较有显著性差异，而HDL 降低，与兔模型组比较有显著性差异（P＜0.05，0.01）。豚鼠模型组血脂指标有所改变，但与豚鼠模型组比较无显著性差异（P＞0.05）。见表1。高脂饲料喂养8周后，兔模型组TC、TG、LDL 明显升高，与兔正常组比较有显著性差异，而HDL 降低，与兔模型组比较有显著性差异（P＜0.05，0.01）。豚鼠模型组TC、TG、LDL、HDL 升高，与豚鼠模型组比较有显著性差异（P＜0.05，0.01）。见表2。

表1 高脂喂养4周后对血清TC、TG、HDL、LDL的影响（±s，n=10）

表1 高脂喂养4周后对血清TC、TG、HDL、LDL的影响（±s，n=10）

注：模型组与正常组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

表2 高脂喂养8周后对血清TC、TG、HDL、LDL的影响（±s，n=10）

表2 高脂喂养8周后对血清TC、TG、HDL、LDL的影响（±s，n=10）

注：模型组与正常组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

5.2 对血清NO、TNF-α含量的影响

高脂饲料喂养8 周后，兔模型组NO、TNF-α明显升高，与兔正常组比较有显著性差异（P＜0.05，0.01）。豚鼠型组NO、TNF-α明显升高，与豚鼠正常组比较有显著性差异（P＜0.05）。见表3。

表3 对血清NO、TNF-α含量的影响（±s，n=10）

表3 对血清NO、TNF-α含量的影响（±s，n=10）

注：模型组与正常组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

5.3 主动脉组织病理学检测

（1）兔正常对照组：10／10只动脉内膜内皮细胞完整，排列整齐，内弹力膜清晰完好，中膜平滑肌细胞体积、排列正常，内膜及中膜均未见泡沫细胞及脂质沉积。见图1。

（2）兔模型组：8／10只动脉内膜明显增厚（++），纤维隆起明显（++），内含大量泡沫细胞（++），内皮细胞肿胀、变性、部分缺失，内弹力膜断裂、模糊（++），中膜增厚伴平滑肌细胞增生（++），胞体变大，排列紊乱，内膜及中膜均可见巨噬细胞。见图2。

（3）豚鼠正常对照组：10／10 只各动脉内膜内皮细胞完整，排列整齐，内弹力膜清晰完好，中膜平滑肌细胞体积、排列正常，内膜及中膜均未见泡沫细胞及脂质沉积。见图3。

（4）豚鼠模型组：7／10只动脉内膜轻度增厚（+），纤维轻度隆起（+），内含少量泡沫细胞（+），内皮细胞肿胀、变性、部分缺失，内弹力膜断裂、模糊（+），中膜增厚伴平滑肌细胞增生，胞体变大，排列紊乱，内膜及中膜均可见巨噬细胞。见图4。

图1 兔正常组×200

图2 兔模型组×200

图3 豚鼠正常组×200

图4 豚鼠模型组×200

6 讨论

动脉粥样硬化是动脉硬化中最重要的一个类型，基本损害是动脉内膜局部呈斑块状增厚，故又称动脉粥样硬化斑块或简称斑块，动脉粥样硬化发病率很高，且累及全身动脉血管，主要累及主动脉、冠状动脉、脑动脉、肾动脉、大、中型肌弹力型动脉，最终导致他们的管腔狭窄以致完全堵塞，使这些重要器官缺血缺氧、功能障碍以致机体死亡。动脉粥样硬化是导致心脏疾病和中风的首要原因。

高脂血症与AS的关系已经得到证实，AS的严重程度随血浆胆固醇水平的升高而加重。LDL 是血浆胆固醇的主要存在形式，能在血浆内或动脉内膜下经自由基引发的脂质过氧化而转变为氧化修饰的LDL（低密度脂蛋白ox-LDL）。生理状态下，HDL促进胆固醇逆转录，抗炎抗氧化，抗血栓并促纤溶，具有抗AS 作用。所以血脂水平特别是LDL的升高和HDL的降低与AS发病率呈正相关。但最新的研究表明，在某些病理状态下，HDL 抗动脉粥样硬化作用受损，可促进动脉粥样硬化的形成。所以血脂水平的检测是评价AS病变的一个公认的、必不可少的指标。

本实验在造模方式上采用高脂饲料喂养方式，对动物损伤小，形成病变与人类由膳食结构改变形成的动脉粥样硬化类似。本实验对照组动物整体状况良好，实验组动物随时间推移而渐见疾病症状出现，其血脂水平明显增高。兔模型组血粘度、血浆粘度升高，TC、TG、LDL、NO、TNF-α升高，HDL降低，与正常组比较有显著性差异（P＜0.05，0.01）。豚鼠TC、TG、LDL、HDL、NO、TNF-α升高，与正常组比较有显著性差异（P＜0.05，0.01）。两种动物模型组组动脉病理检测均不同程度出现动脉内膜明显增厚，纤维隆起明显，内皮细胞肿胀、变性、部分缺失，内弹力膜断裂、模糊，中膜增厚伴平滑肌细胞增生，胞体变大，排列紊乱，内膜及中膜均可见巨噬细胞。兔动脉粥样硬化诱导时间比豚鼠短，成模率比豚鼠高，病变更显著。

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