喉癌组织中survivin和caspase-7的表达与相关性研究

张美佳，张爱华，万 歆，王新安，牟基伟

（佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003）

喉癌是耳鼻喉癌症中发生率最高的一种，且喉癌的发生率还在逐年上升［1］。已有研究证实，喉癌及其他多种癌症的发生、发展都与细胞凋亡相关基因存在一定的相关性［2，3］。通过对细胞凋亡相关基因的检测可以对癌症的分期分型等工作提供指导和帮助。因此，通过免疫组化法对比不同分期和分级的喉癌组织中survivin与caspase-7的表达变化，总结survivin与caspase-7的表达与喉癌的关系，对喉癌的检测和治疗具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 标本

收集2011-12～2014-01经病理证实的喉癌标本72例，及正常喉部黏膜组织10例。其中I期患者2例，Ⅱ期患者14例，Ⅲ期患者27例（T1N1M0患者3例、T2N1M0患者4例、T3N0M0患者20例）Ⅳ期患者29例（T4N2M0患者2例、T4N3M0患 者2例、T4N1M0患 者6例、T4N0M0患 者19例）；声门上型22例、声门型41例、声门下型9例。所有病理均为行放化疗治疗。

1.2 试剂

Survivin和caspase-7试剂盒均由上海生工公司提供。

1.3 检测步骤

严格按照说明书进行操作，对材料进行取材、固定、包埋及脱水脱蜡等操作；使用3%H2O2孵育样品10min，灭活内源性过氧化物酶；使用PBS 冲洗样品后滴加封闭液孵育15min；滴加一抗，4℃过夜；使用PBS冲洗样品后滴加二抗，37℃孵育15min；使用PBS冲洗样品后滴加DAB显色液，避光孵育5min。

1.4 结果判定

显微镜下观察不同样品的染色强度，survivin和caspase-7染色阳性细胞的细胞质以黄色或棕黄色为主。对染色层度进行计分：无色计0分，淡黄色计1分，黄色计2分，棕黄色计3分。每个样品随机选取5个不重复事业，计算阳性细胞所占比重及阳性计分，无阳性细胞计0分，0%～10%计1分，10%～50%计2分，50%～75%计3分，＞75%计4分。

1.5 统计学方法

采用SPSS 18.0软件分析，计数资料采用χ2检验，相关分析采用Spearman相关分析法。P＜0.05为具有统计学差异。

2 结果

2.1 survivin和caspase-7在喉癌组织及正常组织中的表达

survivin及caspase-7在喉癌组织中的阳性率均与喉正常组织存在统计学极显著差异（P＜0.01），见表1。

表1 survivin及caspase-7在不同组织中表达阳性率比较

由上表可知，在两种蛋白的表达水平比较中发现，在喉癌组织中，survivin及caspase-7的表达阳性率均与喉正常黏膜组织存在极显著差异（P＜0.01），其中survivin表达量显著增加，caspase-7 表达量显著降低。提示，survivin 及caspase-7的表达与喉癌的发生具有相关性。

2.2 survivin及caspase-7在喉癌组织中的表达与喉癌分级分期的关系

不同的喉癌的发生部位及不同分化程度喉癌组织中survivin及caspase-7的阳性率均存在显著差异，见表2。

表2 survivin及caspase-7在喉癌组织中的表达与病理参数关系

由上表可知，survivin及caspase-7的阳性率在不同发病部位及不同临床分期均具有统计学差异（P＜0.05，P＜0.01）。在不同部位的喉癌类型比较中发现，声门下型的survivin阳性率最高而声门型最低；而在caspase-7阳性率的比较发现，其在声门型中的表达率最高，而声门上型的表达率最低。在不同临床分期的比较中发现，随着临床分期的升高，survivin的阳性率也随之升高，而caspase-7则呈现相反的趋势，随着病情的严重，表达率逐渐下降。

2.3 survivin及caspase-7表达的相关性

在喉癌组织中，survivin及caspase-7的表达具有显著相关性（r=0.631，P＜0.05），两者呈负相关，见表3。

表3 survivin及caspase-7在喉癌组织中的表达相关性

由上表可知，survivin的表达与caspase-7的表达负相关，在喉癌组织中survivin阳性而caspase-7阴性的概率最高，说明在喉癌组织中普遍呈现survivin表达而caspase-7不表达的现象。且证实survivin的表达与caspase-7 的表达负相关。可作为临床检测依据。

3 讨论

目前，对肿瘤的认识已得到了巨大的发展，大部分研究者均认为喉癌及其他种类的发生不仅是细胞的复制功能不受调控导致复制过快，其发生也与细胞凋亡比例降低相关［4］。Survivin是一种已知的功能最为强大的凋亡一直因子，与多种肿瘤的发生具有密切关系［5］。Survivin可抑制细胞凋亡途径中的caspase-7蛋白活性发挥抗凋亡作用，其在多少恶性肿瘤组织中均有表达，而在正常组织中表达量极低或不存在表达［6］。而caspase-7蛋白则是细胞凋亡途径中的重要蛋白之一，参与了细胞凋亡的发生，当caspase-7蛋白的表达及活性受到抑制时，细胞凋亡的发生便会受到抑制［7～9］。目前尚无研究对喉癌组织的Survivin及caspase-7的表达关系进行研究，仅有对喉癌组织中survivin和VEGF的表达研究，或其他癌症中survivin和caspase-7 的研究［10，11］。因此，研究Survivin及caspase-7在喉癌组织中的表达关系，对了解喉癌、治疗喉癌具有重要意义。

研究证实，喉癌组织中的survivin 蛋白表达量显著提高，提示survivin 表达量的升高可能是喉癌发生的原因之一，且通过不同临床分期喉癌组织中survivin表达量的对比研究发现，随着临床分期的增加，患者survivin的表达量也随之增加，这一结果与其在其他癌症中的表现相符。而caspase-7的表达量则是与survivin相反，其在健康人群的喉组织中的检测率为100%，提示其是细胞凋亡途径中的重要组成部分，当caspase-7的表达受到抑制时便会导致癌症的发生。同时，研究对survivin以caspase-7的相关性研究证实了在喉癌组织中survivin的表达与caspase-7的表达负相关。可能的原因是survivin的表达不仅抑制了caspase-7的活性，同时对caspase-7的表达产生了负面影响。

综上所述，在喉癌组织中Survivin及caspase-7的表达与在正常组织细胞中存在有统计学极显著差异（P＜0.05）。Survivin与caspase-7 的表达负相关，提示可能是survivin的过量表达不仅抑制了caspase-7 的活性，不同抑制了caspase-7的表达，从而导致了癌症的发生。

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