全自动血液培养系统在血流感染诊断中的价值及影响因素＊

马楠，李国智，马俊（四川省江油市九〇三医院：.检验科；.重症医学科；.妇产科 6700）

血流感染为最严重的临床感染之一，致病的微生物包括病毒、细菌及寄生虫等，病死率较高［1］。据报道，全球每年约发生2×106例血流感染，病死率为20%～50%［2］。第6代全自动血培养BacT／Alert3D240系统的引进和推广使用，为败血症及严重感染的诊断和治疗提供了十分有利的条件。为了进一步了解抗菌药物治疗浓度、送检时间、温度、不同细菌浓度、采血量及采集套数对血培养结果的影响，现选择该院2009年1月至2013年3月374例住院患者，回顾分析了BacT／Alert3D240全自动血液培养系统的检测结果，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料2009年1月至2013年3月该院门、急诊及住院发热或全身性感染患者374例。血培养系统采用BacT／Alert3D240全自动血液培养系统（法国梅里埃公司）。血培养瓶使用BacT／Alert的专用配套血培养瓶，包括成人需氧血培养瓶、成人厌氧血培养瓶、儿童专用瓶、树脂瓶（法国梅里埃公司）。

1.2 方法

1.2.1 采取患者血液标本按BacT／Alert操作规程加入相应的血培养瓶。

1.2.2 阳性培养瓶的处理阳性标本采用常规步骤斜瓶，及时转种血琼脂平板、巧克力琼脂和中国蓝平皿，置35℃培养18～24h。每一阳性培养瓶必须做涂片行革兰染色并做直接药敏试验，以确定细菌类型，将初步结果通知临床作为血培养的一级报告，为临床医师初步诊断提供依据，同时将分离出的菌落做药敏试验和生化鉴定，经17～22h培养后，作为最终血液培养报告。

1.2.3 阴性培养瓶的处理培养监测7d系统报告的阴性瓶，可发出无菌生长报告。同时用无菌注射器或系统附带采样针取材转种血琼脂和巧克力平皿，35℃培养18～24h后，仍无细菌生长，则确定为阴性。

1.2.4 假阳性和假阴性的判断如果系统报警提示有菌落生长，但分离不到细菌且革兰染色涂片未检测到微生物即为假阳性；5d未显示报警而转种涂片后发现细菌即为假阴性。

1.2.5 细菌鉴定按Microscan仪操作程序进行，个别细菌辅以常规方法。

1.2.6 细菌浓度对检出时间的影响分别用ATCC25922大肠埃希菌、ATCC49619肺炎链球菌、ATCC25923金黄色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853铜绿假单胞菌，分别制成1×102、1×104、1×106cfu／mL 菌液，按血培养操作规程分别注入1mL菌液，置于血培养瓶内，立即放入BacT／Alert3D240全自动血液培养系统35℃孵育。

1.2.7 不同温度放置对检测结果的影响将ATCC25922大肠埃希菌、ATCC49619肺炎链球菌、ATCC25923金黄色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853铜绿假单胞菌制成1×102cfu／mL 的菌液，按血培养操作规程分别注入1 mL菌液置于血培养瓶内，放置4、10、25℃12h后移入BacT／Alert3D240全自动血液培养系统35℃孵育。

1.2.8 不同时间放置后对检测结果的影响将ATCC25922大肠埃希菌、ATCC49619肺炎链球菌、ATCC25923金黄色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853铜绿假单胞菌制成1×102cfu／mL的菌液，按血培养操作规程分别注入1 mL菌液置于血培养瓶内，放置2、4、8、12、24h后移入BacT／Alert3D240全自动血液培养系统35℃孵育。

1.2.9 抗菌药物对培养结果的影响培养瓶接种完菌液后加入抗菌药物，同时将菌液加入不含抗菌药物的培养瓶作为对照。

1.2.10 采样量及采样套数对检测结果的影响对成人采集2～5mL、5～10mL血液，对儿童采集1～2mL、2～5mL，分别采用1、2、3套，比较其对检测结果的影响。

1.3 统计学处理应用SPSS 18.0软件进行统计学处理。组间比较采用配对t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 菌株的种类与检出时间的关系374份血标本中共检出63株病原菌，阳性率为16.8%，其中65.1%的细菌在24h内检出，28.5%的细菌在24～48h内检出，6.3%的细菌在48h后检出。见表1。

2.2 假阳性与假阴性的检出率在374份标本中假阳性4株，假阳性率为1.1%；假阴性为1株，假阴性率为0.2%。

2.3 不同细菌浓度的检出时间不同细菌浓度与检测时间的关系，见表2。

2.4 不同温度对检测结果影响血培养瓶放置4、10、25℃3种温度与检测时间的关系，见表3。

2.5 送检时间对检测结果的影响放置2、4、8h的血培养检出时间之间差异无统计学意义（P＞0.05），放置2h的血培养检测结果与放置12、24h比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

2.6 抗菌药物对检测结果的影响选择常用的几种抗菌药物分别加入接种菌液的培养瓶中，同时将菌液加入不含抗菌药物的培养瓶作为对照。见表5。

2.7 采样量及采样套数对检测结果的影响成人采血量为2～5mL时检出率为55.13%，5～10mL 检出率为90.21%；儿童采血量为1～2mL时检出率为46.75%，2～5mL 时检出率为87.68%；采集数为3套时检出率最高（96.87%）。见表6。

表1 菌株的种类与检出时间的关系（n）

表2 3种不同细菌浓度与检出时间的关系（%）

表3 放置3种不同温度细菌与检出时间的关系（%）

表4 送检时间对检测结果的影响（%）

表5 抗菌药物对检测结果的影响（%）

续表5 抗菌药物对检测结果的影响（%）

表6 采样量及采样套数对检测结果的影响（%）

3 讨论

BacT／Alert3D240全自动血液培养仪是第6代全新的血培养系统，通过自动连续不断地监测细菌在生长过程中消耗氧，产生氢气、二氧化碳和氮气，通过pH 及颜色变化及培养瓶内压力改变，可报警提示培养液中细菌数量。有研究显示，BacT／Alert3D240全自动血液培养仪具有操作简便、灵敏度高、准确性好、特异性强、误诊率及污染率低的特点［3－4］。本组374份标本中假阳性4株，假阳性率为1.1%，假阴性1株，假阴性率为0.2%。据有关报道，血标本体积超过12 mL，有可能导致假阳性，同时，细菌自溶、温度不稳定或其他原因也可能导致假阳性的出现［5－6］。1例假阴性标本，盲转培养为表皮葡萄球菌，患者此前血培养结果也为表皮葡萄球菌，推测该次假阴性结果可能与患者接受抗菌药物治疗，外周血细菌浓度太低导致血培养仪无法检出有关。假阴性比假阳性对患者的危害更大，因为其会忽略病情，错过关键治疗时间，造成严重后果，因此，血液培养检测质量显得至关重要［7］。

3.1 检出时间与细菌种类和浓度的关系本研究检出的细菌种类多，分布范围广。其中大肠埃希菌最多，占分离病原菌总数的14.3%，其次依次为金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌及醋酸钙不动杆菌，前6位分离出的菌株数占总数的61.9%，与张冀霞等［8］报道的相符合。本研究表明，细菌浓度与检出时间有相关性，即细菌浓度越高，检出时间越短。

3.2 放置温度和时间对培养结果的影响将含有细菌的培养瓶放置不同温度对检出时间影响不大；送检时间的延迟不影响病原菌检测，但检出的时间有所减少。放置2、4、8h的血培养检出时间之间差异无统计学意义（P＞0.05），放置2、4、8h的血培养检出时间与放置12、24h比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3.3 抗菌药物对检出结果的影响部分患者在接受抗菌药物治疗后采集血培养标本，病原菌的生长会受到血液中药物浓度的抑制，对阳性检出率无影响，仅检出时间稍为延长。虽然添加了一些吸附抗菌药物的物质，如活性炭或树脂在商品培养基中，但这类物质不是对所有抗菌药物都能起到作用。在当前抗菌药物滥用的情况下，各厂家应该考虑进一步改进培养瓶在成分和离子强度上具有对抗菌药物浓度一定的稀释作用，但抗菌药物的长期使用可能会影响检测速度甚至造成假阴性［9－10］。

3.4 采血量及采集套数对检出结果的影响血液采样量不足时会导致检测敏感度下降，成人采血量为5～10mL 时检出率为90.21%，儿童采血量为2～5mL时检出率为87.68%；采集数为3套时检出率最高（96.87%）。成人推荐的采血量为5～10mL，儿童为2～5mL；每次应采集2～3套标本。

综上所述，细菌浓度及种类、抗菌药物、温度及送检时间、采血量及采集套数均会使BacT／Alert3D240全自动血液培养仪对病原菌的检出时间产生影响，不能有效地反映患者准确的检测指标。

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