薄层色谱法鉴定芙蓉散中的主要成分

赵伟峰 车晓平 钱 珊 周明学 曾祖平

(1北京市中医研究所，北京，100010;2首都医科大学附属北京中医医院，北京，100010;3北京中医药大学东方学院09级，廊坊，065001)

芙蓉散为北京市医疗机构制剂法定制剂，收载于《医疗单位制剂规程》中，主要成分有芙蓉叶、生大黄、黄连、关黄柏、泽兰、黄芩、冰片，具有清热解毒、消肿止痛之功效。用于疮疡肿毒，红肿作痛，症见红、肿、热、痛。舌红、苔白、脉数;乳腺炎、各种软组织损伤、关节炎见上述证候者[1]。方中芙蓉叶有凉血解毒、消肿止痛作用，生大黄清热解毒、祛瘀生新，在方中芙蓉叶、生大黄共为君药解毒消肿;黄连、黄芩、黄柏清热解毒，燥湿消炎，助君药清热解毒，在方中行臣药的功能;泽兰活血行水为佐药;冰片化腐生肌，清热凉血，行使药之功。

芙蓉散作为外用药，使用时用黄酒调成稀糊外敷或用凡士林制成软膏，涂敷患处;同时也作为原料药，用于制备芙蓉软膏，在北京中医医院皮外科广泛使用[2]。作为法定制剂，芙蓉散和芙蓉膏在北京市多家医疗机构使用多年，但一直以来只用简单的试管反应控制制剂质量，缺乏专属性强的鉴别手段。为了保证临床疗效，控制制剂质量，本研究采用薄层色谱法对芙蓉散处方中主要药味进行鉴别。

1 仪器、试药和样品

1.1 仪器 AJ150L电子精密天平(上海梅特勒－托利多仪器有限公司)，SK7210HP型KUDOS超声波清洗机(上海科导超声仪器有限公司)，YOKO－ZS紫外线分析摄影仪(武汉药科新技术开发公司)。

1.2 饮片 芙蓉散处方饮片由北京杏林药业有限责任公司提供。经鉴定，芙蓉叶符合《北京市中药饮片标准》2008版“芙蓉叶”项下的有关规定;其余饮片均符合《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2010年版(一部)各项下的质量要求。

1.3 试药 熊果酸(110742－200516，中国药品生物制品检定所)，掌叶大黄对照药材(120904－200914，中国药品生物制品检定所)，黄连对照药材(913－9905，中国药品生物制品检定所)，黄芩对照药材(120955－200607，中国药品生物制品检定所)，关黄柏对照药材(120937－200506，中国药品生物制品检定所)。

硅胶 G预制板(20110508，青岛海洋化工厂分厂);聚酰胺薄膜;所用试剂均为分析纯(北京化学试剂公司)。

1.4 实验样品 芙蓉散(20110929，20120107，20120710，首都医科大学附属北京中医医院)。

2 方法与结果

2.1 大黄的鉴别[3]取芙蓉散2 g，加乙醚20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。称取除大黄外的处方其他饮片，照供试品溶液制备方法制备大黄阴性对照液。另取掌叶大黄对照药材0.1 g，加乙醚20 mL，超声提取20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL溶解，作为大黄阳性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版(一部)附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液、大黄阴性对照液各10 μL、大黄阳性对照溶液5 μL，分别点于同一硅胶G预制板上，以甲酸乙酯－石油醚(30－60℃)－甲酸(5∶15∶1)溶液分层后的上层为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外灯下检视。供试品色谱与大黄阳性对照有对应的橙色荧光斑点;阴性对照无干扰，见图1。

图1 大黄薄层色谱图

图2 黄芩薄层色谱图

2.2 黄芩的鉴别[3－4]上述1中乙醚提取后的残渣挥尽溶剂，加乙酸乙酯与甲醇按3∶1比例混合的溶液20 mL，超声提取20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。称取除黄芩的处方其他饮片，照供试品溶液制备方法制备黄芩阴性对照液。另取黄芩对照药材1 g，加上述混合溶液30 mL，超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为黄芩阳性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版(一部)附录附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液、黄芩阴性对照液各10 μL、黄芩阳性对照溶液5 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(5∶3∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置365 nm的紫外灯下检视。供试品色谱与黄芩阳性对照色谱有对应的暗色斑点;阴性对照无干扰，见图2。

2.3 黄连的鉴别[3，5－6]称取除黄连外的处方其他饮片，照上述2中供试品溶液制备方法制备黄连阴性对照液。另取黄连对照药材0.1 g，加甲醇5 mL，超声处理20 min，滤过，滤液作为黄连阳性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版(一部)附录附录ⅥB)试验，吸取上述2中供试品溶液、黄连阴性对照液各5 μL、黄连阳性对照溶液2 μL，分别点于同一硅胶G预制板上，以乙酸乙酯－环己烷－异丙醇－甲醇－三乙胺－ 水(3.5∶3∶1∶1.5∶1∶0.5)为展开剂，展开缸另一侧加入等体积的浓氨试液，预平衡20 min，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱与黄连阳性对照有对应的亮黄色荧光斑点;阴性对照无干扰，见图3。

图3 黄连薄层色谱图

2.4 关黄柏的鉴别[3]称取除关黄柏外的处方其他饮片，照上述2中供试品溶液制备方法制备关黄柏阴性对照液。另取关黄柏对照药材0.2 g，加乙酸乙酯20 mL，超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为关黄柏阳性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版(一部)附录附录ⅥB)试验，吸取上述2中供试品溶液、黄柏阴性对照液各10 μL、关黄柏阳性对照溶液5 μL，分别点于同一硅胶G预制板上，以环己烷－甲苯－乙酸乙酯(3∶3∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱与关黄柏阳性对照有对应斑点;阴性对照无干扰，见图4。

图4 关黄柏薄层色谱图

2.5 熊果酸的鉴别[3，7－8]称取除泽兰的处方其他饮片，照上述2中供试品溶液制备方法制备泽兰阴性对照液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版(一部)附录附录ⅥB)试验，吸取上述(2)中供试品溶液、泽兰阴性对照液各10 μL、对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶G预制板上，以环己烷－丙酮－乙酸乙酯(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱与对照品色谱有对应的相同颜色的荧光斑点;阴性对照无干扰，见图5。

图5 泽兰薄层色谱图

3 讨论

1)鉴别黄芩时，首先尝试药典收载的色谱条件，结果层析效果不佳;经过摸索，调整展开剂比例为甲苯－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(5∶3∶1∶2)，供试品色谱斑点清晰，阴性对照无干扰。

2)鉴别黄连、关黄柏时，考虑到二者均含有生物碱类成分，其中小檗碱和巴马汀为二者共有成分，而黄连还含有其他生物碱成分如表小檗碱、黄连碱;若将黄连、关黄柏合并鉴别，则对关黄柏的薄层鉴别会产生干扰，无法体现关黄柏的存在。因此，本研究中黄连的鉴别是针对其特有的生物碱类成分表小檗碱、黄连碱，而关黄柏的鉴别是针对其含有的黄柏酮。关黄柏的鉴别是参考药典中鉴别黄柏酮的方法进行的。

3)药材芙蓉叶《中国药典》中未收载。研究中采用乙醇提取药材并制备芙蓉叶阴性;根据文献[9]曾经针对芙蓉叶中的芦丁等黄酮类成分进行了薄层层析鉴别，但阴性对照有干扰，高效液相色谱也显示阴性对照液中含有芦丁，与泽兰中含有芦丁成分的文献记载相符[10];也曾尝试鉴别芙蓉叶中的其他弱极性成分，多次改变供试液制备方法、柱层析除杂及变换展开剂种类等，结果阴性对照仍有干扰，故放弃。

4)冰片在芙蓉散中所占比例很小(0.4%)。曾经按药典方法鉴别，结果供试品色谱与对照药材色谱无明显对应斑点，故放弃。

5)现代药理研究显示，芙蓉散对角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀和醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高具有显著抑制作用，能够抑制和灭活常见浅表感染致病菌，表明芙蓉散具有抗炎消肿作用[11]。处方中黄连、关黄柏中主要药效成分为生物碱类，具有显著的抗菌、抗炎、抗病毒作用[12];黄芩中有效成分为黄酮类化合物，现代药理研究证明具有明显的抗菌、抗炎、抗过敏、抗氧化、抗致癌和抗病毒等作用[13];大黄主要化学成分为蒽醌衍生物，其中游离型蒽醌衍生物主要有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚，是大黄中主要的抗菌成分[14];泽兰中含有的熊果酸具有抗病毒和抗菌作用，也是芙蓉散中的药效成分[15]。因此，本研究制定的芙蓉散质量控制方法可以有效地鉴别芙蓉散中的药效成分，从而保证临床疗效。

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