β-catenin和Ki67在涎腺腺泡细胞癌中的表达及意义

张丽慧，吴兰雁，姚 甜，赵 业，郑亚鸽

(1陕西省西安医学院口腔系，西安 710021;2四川大学华西口腔医院病理科;3中国解放军第四一一医院;4山西大同市第三人民医院口腔科;5成都市双流县妇幼保健院;*通讯作者，E-mail:lanyan777@gmail.com)

腺泡细胞癌(acinic cell carcinoma，AciCC)是一相对少见的涎腺上皮源性肿瘤，大约占所有涎腺肿瘤的2%－9%，所有涎腺恶性肿瘤的10%－17%［1，2］。通常发生在腮腺，儿童也可发生。由于AciCC组织学类型及细胞形态复杂多样，与其他涎腺肿瘤组织形态存在交叉重叠，所以对该瘤的病理诊断、鉴别诊断及预后的判定尚存在一定困难。β－连环蛋白(β-catenin)不仅在细胞黏附中发挥作用，还是一种多功能蛋白，在信号传导、细胞的增殖、分化等方面起到重要的作用。β-catenin可以在细胞骨架中连接E-cadherin和α-catenin组成E-cadherin-catenin复合物来调节并维持细胞间的黏附。β-catenin的减少或丢失可能会破坏E-cadherin-catenin复合体的稳定性和完整性，导致肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移［3］。Ki67与细胞周期密切相关。本研究通过检测β-catenin和Ki67在46例AciCC中的表达情况，旨在探讨与该瘤预后相关的客观指标，为临床预后评估提供有价值的参考资料。

1 材料和方法

1.1 标本和试剂

收集四川大学华西口腔医院1988－2011年间的46例AciCC石蜡标本，10例腮腺肿瘤瘤旁正常组织做为对照。

鼠抗人β-catenin单克隆抗体，鼠抗人Ki67单克隆抗体，聚合物辅助剂，辣根酶标记羊抗兔/小鼠IgG多聚体，DAB试剂盒，以上试剂均为北京中杉金桥生物技术有限公司生产。

1.2 试验方法

采用免疫组化染色(PV二步法)。

按照试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司，PV二步法)中提供的说明书进行，抗体为即用型，抗原修复用高压锅抗原热修复，修复液为枸橼酸钠(0.1 mol/L，pH6.0)。染色过程中以 PBS 代替一抗设为空白对照，腮腺多形性腺瘤及腺泡细胞癌瘤旁正常涎腺组织作为正常对照。β-catenin以扁桃体为阳性对照，Ki67以乳腺癌为阳性对照。

1.3 统计学分析

实验结果采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析处理。计数资料采用χ2检验、Fisher确切概率法比较，检验水准α=0.05。

1.4 结果判定

根据 Maruyama［4］的判定方法:β-catenin 的细胞膜阳性率＞70%为正常表达，否则为异常表达;如果胞质或细胞核阳性率＞10%，也同样为异常表达。

Ki67表达定位于细胞核，呈棕黄色。在高倍镜下(×400)随机选取10个视野，每个视野计数100个细胞，共计1 000个细胞，记录其中的阳性染色细胞数，测定 Ki67标记指数(Ki67 label index，LI)，LI=(阳性细胞数/计数的细胞总数)×100%。

图1 β-catenin在瘤旁正常腺体和AciCC复发病例中的表达 (IHC，×400)Figure 1 Expression ofβ-catenin in adjacent normal gland and recurrent cases of AciCC (IHC，×400)

图2 Ki67在瘤旁正常腺体和AciCC复发病例中的表达 (IHC，×400)Figure 2 Abnormal expression of Ki67 in adjacent normal gland and recurrent cases of AciCC (IHC，×400)

2 结果

2.1 β-catenin的免疫组化检测结果

在瘤旁正常组织的β-catenin蛋白主要定位于腺泡细胞、导管上皮细胞的细胞膜。在细胞质有时也会有少量的表达(图1，见第549页)。在46例AciCC中，14例正常表达，32例异常表达，β-catenin主要异位表达在细胞质(图1，见第549页)。统计学分析表明，β-catenin的异常表达在复发组高于无复发组(P＜0.05)。β-catenin的表达与肿瘤直径、组织类型、浸润包膜、浸润周围组织等各临床病理参数无相关性(P＞0.05，见表1)。β-catenin的表达与AciCC的分型无相关性(见表2)。在不同生物学行为中β-catenin的表达与AciCC的复发与否相关，与淋巴结转移与否无相关性(见表3)。

表1 β-catenin表达、Ki67表达与AciCC临床病理参数Table 1 Correlation between the expression ofβ-catenin，Ki67 and the clinicopathologic parameters of AciCC

表2 β-catenin表达与AciCC组织学类型Table 2 Correlation between the expression ofβ-catenin and histological types

表3 β-catenin表达与AciCC的复发和转移Table 3 Correlation between the expression ofβ-catenin and recurrence and metastasis

2.2 Ki67的免疫组化检测结果

在正常涎腺组织中未见Ki67阳性信号(图2，见第549页)。在 AciCC中，34例 Ki67标记指数＜10%，12例LI≥10%。经统计学比较，Ki67标记指数≥10%组与Ki67标记指数＜10%组比较，复发率较高 (P＜0.01)，淋巴结转移率较高(P＜0.01，见表4)，说明与其有显著相关性。Ki67的表达与肿瘤直径、浸润包膜、浸润周围组织无相关性(P＞0.05，见表1)。Ki67在各组织学类型中的表达与AciCC的分型无相关性(见表5)。

3 讨论

3.1 β-catenin在腺泡细胞癌的表达及意义

β-catenin是一种多功能蛋白，在信号传导、细胞黏附、细胞的增殖、分化等方面起到重要的作用。氨基端、羧基端及arm区域为它的三个主要结构域。氨基端，有GSK－3β和酪氨酸蛋白激酶的磷酸化位点，此位点的磷酸化可使β-catenin翻译后保持稳定;羧基端，负责激活靶基因的转录;而结构紧密的arm区域，可防止蛋白水解，并且是 β-catenin与其配体相互作用的基础［5］。

β-catenin在细胞骨架中连接E－钙黏蛋白和α－catenin组成E－cadherin－catenin复合体来调节并维持细胞间黏附。β-catenin或其他分子的减少或丢失可能会破坏E－cadherin－catenin复合体的稳定性和完整性，导致肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移［3］。β-catenin复合体降解障碍可能是导致肿瘤发生的关键环节［6］。Chetana等［7］报道 β-catenin 表达的减少或异常在恶性涎腺肿瘤较多见，主要在细胞质表达，在良性涎腺肿瘤中表达程度较弱。Renata等［8］报道在发生于涎腺的基底细胞腺瘤中检测到β-catenin的核异常表达。Furuse等［9］检测到在涎腺上皮肌上皮癌中肌上皮细胞有β-catenin的异常核表达。在多形性腺瘤，腺样囊性癌和多形性低度恶性腺瘤中没有核表达异常，但在细胞膜和细胞质中有异常表达。Chetana等［7］报道在腺样囊性癌中有60%的β-catenin异常表达，然而Shibuya等［10］研究显示在腺样囊性癌中β-catenin有100%的异常表达。Namba等［11］观察到β-catenin在涎腺肿瘤(18例多形性腺瘤，7例透明细胞瘤，4例Warthin瘤，4例腺样囊性癌，7例乳头状腺癌)中表达较低，在腺样囊性癌微囊型的腔面细胞表达阳性，在Warthin瘤中肿瘤细胞膜阳性表达。Liu等［12］研究发现在成釉细胞瘤的滤泡型和丛状型中可以观察到β-catenin的核定位。袁健等［13］在研究β-catenin在口腔鳞癌中的表达情况时发现，在60例口腔鳞癌中有70%β-catenin异位表达，并且其异位表达与有无淋巴结转移有关。

Li等［14－16］观察到 β-catenin 的异常表达与肿瘤的转移和预后有关。Amsha等［17］发现β-catenin的异常表达与临床组织学分型及预后无显著相关性。

据我们所知，β-catenin与涎腺腺泡细胞癌的相关研究尚未见文献报道。

本组资料，β-catenin的异位表达主要位于细胞质，而且复发组的异常表达高于无复发组(P＜0.05)。

表4 Ki67在不同生物学行为的AciCC中的表达Table 4 Expression of Ki67 in different biological behavior of AciCC

表5 Ki67表达与AciCC组织学类型Table 5 Correlation between the expression of Ki67 and histological types

3.2 Ki67在腺泡细胞癌的表达及意义

Ki67与细胞周期密切相关，除了不存在于静止的G0期外，在细胞周期的G1后期、S1、S2、M期都可出现，在G2和M期达到峰值 ，随后迅速下降。故可利用Ki67指数检测肿瘤及非肿瘤疾病的增殖细胞的活性［18］。

Ki67指数的检测在预测许多恶性肿瘤的预后方面都有着重要价值。Luukkaa等［19］在研究涎腺癌时发现Ki67抗原的表达与患者的生存率显著相关。Danyel等［20］研究发现Ki67在多形性腺瘤中均无表达，在黏液表皮样癌中分化较差的表达显著高于分化较好的。Nordgard等［21］发现Ki67的表达可以很好地预测腺样囊性癌的短期生存率。

与Ki67相关的涎腺AciCC研究中仍缺少有随访信息的大宗病例相关研究。Ki67指数的检测在预测AciCC预后方面是否有意义，什么样的Ki67指数具有预后意义尚存在争议。Danyel等［20］研究发现，Ki67在1例AciCC中表达阴性，但此例患者死亡。Murakami等［22］研究发现1例AciCC中Ki67 LI＞20%，但遗憾的是没有此患者的随访信息。Martino等［23］研究发现在 AciCC中，Ki67表达指数高于15%时，患者易复发。刘婷姣等［24］观察到 Ki67指数＞5%时，病人预后不好。孙妍［25］研究发现Ki67在复发和转移组表达指数＞25%，在转移组中，Ki67表达指数＞50%。Katherine等［26］研究发现Ki67表达指数＞10%时，病人预后较差。在我们的研究中当Ki67标记指数≥10%时，病人更容易复发和淋巴结转移。

本研究结果发现β-catenin异常表达的腺泡细胞癌患者复发率较高，ki67的标记指数≥10%时，患者易复发，淋巴结转移率也较高，提示β-catenin和Ki67免疫组织化学染色可以作为预测涎腺AciCC预后的辅助工具。

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