参参康心胶囊对冠心病气虚血瘀证模型小鼠TXB2、6-keto-PGF1α 的影响

刘 洁，白 鹤，刘喜平，李沛清

(1．甘肃中医学院2011 级硕士研究生，甘肃 兰州730000;2．甘肃中医学院方剂教研室，甘肃 兰州730000;3．甘肃中医学院基础课部，甘肃 兰州730000)

冠心病是严重危害人类健康的常见病，始于冠状动脉粥样硬化，继而产生管腔狭窄或闭塞，导致心肌缺血缺氧。血栓素B2(TXB2)和6 酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)是一对反映血小板聚集功能与血管收缩舒张的常用指标。文献研究表明:TXB2/6-keto-PGF1α失衡导致冠状动脉痉挛、血栓形成和动脉粥样硬化，是诱发冠心病心绞痛的主要因素［1］。参参康心胶囊源于名老中医验方，由水蛭等3 味药物组成，经现代制药工艺加工而成，临床应用多年，对冠心病、心肌梗死等心肌损伤性疾病有显著疗效［2］。本研究通过观察参参康心胶囊对冠心病气虚血瘀证模型小鼠TXB2、6-keto-PGF1α水平的干预作用，探究其防治冠心病的作用机制，为临床应用提供实验佐证。

1 材料与方法

1．1 动 物

SPF 级昆明小鼠90 只，雌雄各半，体质量(28±2)g，由甘肃中医学院实验动物中心提供，动物质量合格证号:SCXK(甘)2011-1163。

1．2 药品、试剂与仪器

参参康心胶囊由人参等3 味药物按一定比例组成，兰州中药现代化工程技术中心及甘肃中医学院科研实验中心监制，规格为每粒0．5 g，相当于生药1 g，用时以生理盐水溶解为质量分数120 g 生药/L的混悬液;地奥心血康胶囊，成都地奥制药集团有限公司产品，批号1207010，用时以蒸馏水配制成0．003 5 g/mL的混悬液。TXB2、6-keto-PGF1αes试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号20111005。UV－9100 紫外分光光度计，北京瑞利分析仪器公司产品;KDC－2044 低速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司产品。

1．3 动物分组

90 只小鼠依据雌雄、体质量随机分为以下6 组:空白对照组、气虚血瘀证模型对照组(模型对照组)、气虚血瘀证模型+地奥心血康组(地奥心血康组)、气虚血瘀证模型+参参康心胶囊高剂量组(参参康心高剂量组)、气虚血瘀证模型+参参康心胶囊中剂量组(参参康心中剂量组)、气虚血瘀证模型+参参康心胶囊低剂量组(参参康心低剂量组)。

1．4 气虚血瘀证模型的建立与给药

参照文献［3-4］，采用高脂饮食、饥饿等多因素复合方法复制气虚血瘀证模型。空白对照组给予正常饮食，模型对照组和4 个治疗组给予饥饿喂养，食量为正常小鼠每日摄食量的60%，饲料为高脂饲料，造模周期为4 周。给药量按成人常规剂量折算后的剂量。地奥心血康组灌胃地奥心血康0．076 g/kg，参参康心低、中、高剂量组依次灌胃1．5，3，6 g/kg 参参康心胶囊，空白对照组和模型对照组给予等量生理盐水，均1 d 1 次，连续给药4 周。

1．5 心肌缺血模型的建立

气虚血瘀证造模周期结束后，进行心肌缺血模型的复制。6 组按30 单位/kg 剂量注射垂体后叶素，记录注射时间，15 min 后，乌拉坦1 μg/g 麻醉小鼠，心电图机记录小鼠注射垂体后叶素后一定时间的Ⅱ导联心电图，通过软件记录数据，观察心率和T 波高度变化来判断心肌缺血造模是否成功。

1．6 检测指标

心电图检测完成后，立即摘小鼠眼球取血，血液不经任何处理，于室温放置。低温下3 500 r/min 离心15 min，取上层血清检测TXB2、6-keto-PGF1α含量，操作严格按照试剂盒说明书进行。酶标仪测定吸光度值，进行数据统计。

1．7 统计学方法

采用SPASS 19．0 统计分析软件处理。数据以均数()±标准差(s)表示，对符合正态分布的数据两独立样本均数间比较用独立样本t检验;方差齐的样本间两两比较采用S-N-K 检验，方差不齐的样本两两比较采用Dunnet-t 检验，多个样本间的比较采用单因素方差分析。以P＜0．05 为差别有统计学意义。

2 结 果

2．1 各组小鼠心电图T 波高度和心率对比

与空白对照组对比，模型对照组和各治疗组心电图的心率、T 波高度均增加，差别有统计学意义(P＜0．05 或P＜0．01 )，表明心肌缺血模型复制成功。见表1。

表1 各组小鼠心电图T 波高度和心率对比n=10，±s

表1 各组小鼠心电图T 波高度和心率对比n=10，±s

注:与空白对照组对比，* P ＜0．05，＊＊P ＜0．01。

组 别 剂量/(g·kg－1) 心率/(次·min－1) T 波幅度/mV空白对照组 —364．27±26．63 0．267±0．078模型对照组 — 396．80±25．27* 0．207±0．031*地奥心血康组 0．076 397．58±26．76* 0．125±0．094＊＊参参康心高剂量组 6 391．78±27．21* 0．127±0．107＊＊参参康心中剂量组 3 394．62±23．48* 0．123±0．089＊＊参参康心低剂量组 1．5 388．50±22．76* 0．128±0．082＊＊

2．2 各组小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α对比

与模型对照组对比，各治疗组的TXB2含量均降低，6-keto-PGF1α含量(参参康心中剂量组除外)均升高，差别有统计学意义(P＜0．05 或P＜0．01)。各治疗组之间两指标的对比，差别均无统计学意义(P＞0．05)。见表2。

表2 各组小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α对比ng·L －1，n=10，±s

表2 各组小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α对比ng·L －1，n=10，±s

注:与模型对照组对比，# P ＜0．05，## P ＜0．01。

组 别 剂量/(g·kg－1) TXB2 6-keto-PGF1α空白对照组 — 93．69±16．78## 247．67±12．23##模型对照组 — 122．97±23．10 227．65±17．23地奥心血康组 0．076 100．64±20．07# 243．56±12．45#参参康心高剂量组 6 96．25±23．94# 245．94±10．25##参参康心中剂量组 3 100．17±21．42# 241．37±13．43参参康心低剂量组 1．5 101．57±22．06# 240．96± 9．76#

3 讨 论

临床研究证实:气虚血瘀是冠心病中医证型中较为常见的类型，气虚是本虚中最常见的证候要素，血瘀是标实中最常见的证候要素［5］。气虚血瘀型冠心病存在血管内皮功能异常，并贯穿其发生发展过程的始终［6］。改善冠心病血管内皮功能目前已成为冠心病治疗研究中的一个重要靶点。

TXA2、PGI2是反应内皮功能的常用指标。TXA2和PGI2是花生四烯酸在血栓素合成酶及前列环素合成酶的作用下生成的代谢产物。PGI2是强烈的血管舒张剂和血小板聚集抑制剂，具有抑制凝血和血栓形成等防治冠心病作用，而TXA2是强烈的血管收缩剂和血小板聚集促进剂，其作用与PGI2相拮抗［7］。正常状态下，TXA2、PGI2的含量正常，可保障管壁的收缩、血小板的聚集正常，同时保持血液循环通畅。病理状态下，TXA2、PGI2的含量异常，可导致血管痉挛和血栓形成，也是导致心肌缺血、冠心病的重要原因。心肌缺血患者内皮功能异常，TXA2/PGI2浓度异常，会出现血小板聚集性增强，使冠脉血流量减少，心肌耗氧量增加，促使心肌梗死或心绞痛的发生和发展［8］。由于TXA2与PGI2的性质均不稳定，故常测其代谢产物TXB2和6-keto-PGF1α水平来反映TXA2和PGI2在体内的水平与活性。相关的冠心病中医学研究［9－10］表明，TXB2水平与中医证候之间存在一定的关系，气虚血瘀状态下，相对于其他指标，TXB2水平明显升高。

本研究结果显示:模型对照组与空白对照组对比，各项指标都存在一定的差别，提示了气虚血瘀证可能存在血管活性物质的改变。结果表明:参参康心胶囊可以改善气虚血瘀型心肌缺血小鼠血清TXB2和6-keto-PGF1α的失衡，从而起到治疗调节作用，并且较地奥心血康组在改善6-keto-PGF1α方面存在一定的优势，显示了中医药辨证论治的优势。从实验结果可看出:中药的药物浓度与药物疗效不一定成线性关系，当超过一定量的最佳药物浓度后，再增加药物浓度时，药物疗效未必随之增加。实验结果显示中药组调节气虚血瘀证可能存在不同剂量对照的靶点不同，说明了中药和方剂起效作用可能是多靶点的，通过多方面调节起到作用。

本研究根据中医学“方证相应”理论，采用较为符合中医药辨证论治的中医证候动物模型，以益气活血的参参康心胶囊验证了TXB2和6-keto-PGF1α作为气虚血瘀证冠心病的客观变化存在，为冠心病证的本质研究及参参康心胶囊的开发应用提供了科学依据。

［1］许丹灿．P－选择素在心血管疾病中的研究进展［J］．国外医学:生理病理科学与临床分册，1997，17(3):252．

［2］刘喜平，李沛清，刘勍．参参康心胶囊对小鼠缺血心肌线粒体超微结构及Na+、Mg2+、Ca2+含量的影响［J］．中成药，2011，33(2):329－331．

［3］黄丽，雷磊．气虚血瘀证动物模型研究应用现状［J］．中医药导报，2007，13(11):81－83．

［4］尹军祥，田金洲，宋崇顺，等．气虚血瘀证动物模型制作方法与评价［J］．中华中医药杂志，2006，21(7):424－426．

［5］毛静远，牛子长，张伯礼．近40 年冠心病中医证候特征研究文献分析［J］．中医杂志，2011，52(11):958－959．

［6］王师菡，王阶，李 霁．冠心病血瘀证的Gensini 积分与血管内皮因子的关系［J］．世界科学技术——中医药现代化，2010，12(13):355－357．

［7］Wolf G，Wenzel UO．Angiotensin Ⅱand cell cycle regulation［J］．Hypertension，2004，43(4):693－698．

［8］于秀华，欧喜燕．人参花提取物对气虚血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响［J］．辽宁中医杂志，2012，39(10):2071－2072．

［9］骆丽娟．冠心病证型与P2 选择素、TXB2及6-Keto-PGF1a含量变化关系的研究［J］．上海中医药杂志，2002，36(7):13－14．

［10］梁知，顶志兵，顾仁樾．血管性血友病因子、血栓素B2及6－酮－前列环素与冠心病中医证型相关性的临床研究［J］．上海中医药杂志，2006，40(6):13－14．