敦煌固本方对运动负荷小鼠股四头肌细胞内钙离子含量和相关酶活性的影响*

李希斌，彭雪晶

(甘肃中医学院，甘肃 兰州730000)

运动性疲劳的有效恢复是运动员、教练员及运动医学工作者普遍关心的问题。在寻找安全、有效的抗运动性疲劳方法和途径中，中医药以其副作用少、绝大多数不含兴奋剂成分而日益成为国内学者研究的热点之一，也成为体育竞赛事业中的科技研究焦点。国内外许多学者已通过实验证实，中药补剂对提高运动能力，消除疲劳有一定的效果［1-3］。在本课题前期临床研究中，选用敦煌医学文献经方“敦煌固本方(人参、黄芪、岷当归、马鹿茸、橘皮、女贞子)”进行了初步实验观察。结果显示:敦煌固本方具有显著的抗氧化作用和机体免疫调节功能，初步验证了敦煌固本方具有防治运动性疲劳综合征的显著作用［4-5］。本实验测定运动负荷小鼠股四头肌细胞内钙离子含量、线粒体Ca2+-Mg2+-ATP 酶和己糖激酶活性，用以综合分析此方是否具有抗疲劳作用。

1 材料与方法

1.1 动 物

昆明种SPF 级小鼠50 只，雌雄各半，由甘肃中医学院动物实验中心提供。基础饲料饲养，食水自由，观察小鼠进食、活动、睡眠情况，均确认为健康后以备实验使用。SPF 级动物合格证号为SCXK(甘)2011 -0001 -0002722，SPF 级实验设施合格证为SYXK(甘)2011 -0001 -0001167。动物颗粒饲料由北京科奥协力饲料责任有限公司提供。

1.2 药品与试剂

敦煌固本方处方组成:人参10 g，黄芪15 g，岷当归10 g，马鹿茸1.5 g，女贞子10 g，橘皮10 g 等。上述药材由甘肃中医学院附属医院中药房提供。将药材置于7 倍药量的蒸馏水中浸泡1 ～2 h，煮沸30 min，过滤，为1 煎;药渣加5 倍量蒸馏水，继续煮沸20 min，过滤，为2 煎;将1 煎、2 煎合并，浓缩至35 mL，即配制成2 000 g 生药/L 溶液。钙测定试剂盒(批 号 20120422)、ATP 酶 试 剂 盒(批 号20120618)、己糖激酶测定试剂盒(批号20120604)，均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 分组与给药

小鼠购进后适应性喂养1 周，然后随机分为正常对照组、模型对照组和敦煌固本方高、中、低剂量组5 组，每组10 只。正常对照组、模型对照组每日灌胃生理盐水0.4 mL，敦煌固本方低、中、高剂量组每日依次灌胃敦煌固本方药液0.1，0.4，0.8 mL，连续30 d。除正常对照组外，其余4 组每天进行递增负荷游泳负荷实验［6］。

1.4 检测指标

每周周一、周四称量体质量，取平均值，观察敦煌固本方对小鼠体质量有无影响。30 d 给药结束后，脱臼处死小鼠，摘取小鼠股四头肌，用预冷的生理盐水洗净血污，滤纸吸干，用匀浆介质低温匀浆制备100 g/L 的肌匀浆液，0 ～4 ℃下以5 000 r/min 转速离心25 min，取上清液，-20 ℃保存，待测。检测钙离子含量、ATP 酶和己糖激酶活性［7］，操作严格按试剂盒说明书进行。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0 统计分析软件处理。计量资料数据以均数(¯x)± 标准差(s)表示，组间比较采用t 检验。以P ＜0.05 为差别有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组小鼠体质量对比

各组小鼠体质量组间对比，差别无统计学意义。结果见表1。表明:敦煌固本方对小鼠体质量无影响。

表1 各组小鼠体质量对比 n=10

表1 各组小鼠体质量对比 n=10

组 别 第1 周/g 第2 周/g 第3 周/g 第4 周/g正常对照组 22.15 ±2.90 25.21 ±3.74 28.73 ±4.27 29.67 ±4.26模型对照组 22.25 ±2.73 25.06 ±1.94 27.85 ±2.74 27.91 ±3.47敦煌固本方低剂量组 22.24 ±2.47 25.10 ±1.54 29.40 ±2.72 31.55 ±2.64敦煌固本方中剂量组 22.26 ±2.37 26.05 ±2.12 28.70 ±2.47 30.45 ±2.08敦煌固本方高剂量组 22.30 ±2.35 26.18 ±2.19 29.95 ±3.46 32.17 ±2.58

2.2 各组小鼠钙离子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性对比

钙离子含量方面，模型对照组与其他各组对比，差别具有统计学意义(P ＜0.05 或P ＜0.01)。ATP酶活性方面，模型对照组低于其他各组，差别有统计学意义(P ＜0.05 或P ＜0.01);正常对照组与敦煌中、高剂量组对比，差别有统计学意义(P ＜0.01)。己糖激酶方面，敦煌高剂量组与其他各组对比，差别有统计学意义(P ＜0.05 或P ＜0.01)。见表2。

表2 各组小鼠钙离子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性对比 n=10 ±s

表2 各组小鼠钙离子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性对比 n=10 ±s

注:与正常对照组对比，* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01;与模型对照组对比，# P ＜0.05，## P ＜0.01;与敦煌高剂量组对比，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

组 别 钙离子/(nmol·mgpro -1) Ca2+ -Mg2+ -ATP 酶/(U·mgprot -1) 己糖激酶/(U·mgprot -1)正常对照组 16.74 ±2.27## 2.141 ± 0.568#△△ 0.042 ±0.005△模型对照组 32.84 ±0.16＊＊ 1.682 ±0.612△△ 0.039 ±0.007△△敦煌低剂量组 26.16 ±1.62* # 3.542 ±1.012## 0.046 ±0.003△敦煌中剂量组 24.09 ±2.05# 4.044 ±1.522＊＊## 0.052 ±0.006△敦煌高剂量组 22.12 ±1.62# 5.572 ±0.814＊＊## 0.067 ±0.004＊＊

3 讨 论

本项目工作假说立论于运动训练耗气伤津(表现为乏力、大汗、口渴、易感冒等症状)和“气阴两虚”的中医理论，采用运动训练小鼠优化模型，以敦煌固本方进行干预治疗，从相关药效学角度观察该方对运动负荷小鼠股四头肌细胞内钙离子含量及糖代谢相关酶活性的影响，进一步为其被开发为运动保健食品提供理论依据。本方组成中，人参可补元气;黄芪营卫固表;鹿茸被称为血肉有情之品，为补血圣药;女贞子敛阴补肾。按照中医基础理论，以上各药配伍有补血行气的功效，对于从事体力活动较多的人群有延缓或消除疲劳的作用［8］。本次研究从实验角度验证了这一假说。就钙离子含量而言，随着敦煌固本方给药量的增加，由于运动多量导致胞浆内钙离子大量聚集得到逐渐减缓。ATP 酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，在物质运送、能量转换及信息传递方面具有重要的作用。就本研究测定的Ca2+-Mg2+-ATP 酶活力而言，服用敦煌固本方30 d 后，中、高剂量组负荷游泳运动小鼠股四头肌Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性高于正常对照、模型对照组(P ＜0.01)，说明该方可以增强股四头肌中Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性，保持组织细胞和线粒体中钙的稳态，从而减少负荷运动后产生的过多自由基对组织细胞的损害，使组织在负荷运动中能够保持细胞结构及功能的完好状态，避免了运动性损伤，延缓了运动性疲劳的产生或有助于促进机体运动性疲劳消除作用［9］。就己糖激酶而言，敦煌高剂量组小鼠股四头肌己糖激酶含量明显高于模型对照组，说明敦煌固本方可以修复因为负荷运动而造成糖酵解异常，但具体作用机制仍需进一步研究。

［1］余谦，李明富，宋开源，等. 中医药抗体力性疲劳的整体思辨与应用前景［J］. 中国运动医学杂志，2001，20(1):3.

［2］刘晓莉，张琴.复方中药消除运动性疲劳的优势［J］. 中国临床康复，2003，7 (4):649.

［3］李丽.补气活血方抗运动性疲劳的实验研究［J］.中医药信息，2006，23(3):65.

［4］陈奇. 中药药理研究方法学［M］. 北京:人民卫生出版社，1993:334.

［5］李丽.补气活血方抗运动性疲劳的实验研究［J］.中医药信息，2006，23(3):65.

［6］熊正英，唐量. 芦荟对运动训练小鼠骨骼肌自由基代谢及运动能力的影响［J］. 中国运动医学杂志，2003，22(2):182 -183.

［7］曲绵域，高云秋，浦钧宗，等. 实用运动医学［M］. 北京:北京科学技术出版社，1995:52.

［8］罗琼. 阎俊. 李瑾玮. 等. 枸杞多糖粗品与纯品抗疲劳作用 的比较［J］. 湖北医科大学学报，1999，12(5):296 -299.

［9］吴新正，何迎春，刘红萍，等. 红景天复方制剂对小鼠抗运动性疲劳的作用及机制研究［J］.现代检验医学杂志，2008，23(2):73 -75.