绒毛和胎盘中Jagged-1/Jagged-2的表达与蜕膜中CD56+NK表达相关性探讨

于 哲 蒋春林

广州中医药大学祈福医院妇产科，广东广州 511495

流产是妇女妊娠过程中的一个过程，妊娠期流产和免疫系统有着密切的关系[1]。该研究2013年3月—2014年2月间通过对该院妊娠期流产病例临床资料分析，观察流产病例胎盘中Notch配体Jagged-1、Jagged-2和CD56+NK细胞定位和表达情况，从而分析妊娠期脱膜中CD56+NK细胞表达水平和Notch配体Jagged-1、Jagged-2之间的关系，为分析流产原因，给予相应的措施以相应的理论依据。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院2013年3月—2014年2月收治的妊娠期流产对象42例和30例正常剖宫产对象临床资料进行分析，其中依据流产方式对42例妊娠期流产对象进行分组，人工流产组22例，年龄 22～36岁，平均年龄（25.6±5.4）岁，孕周 5～11周，平均孕周（7.5±2.0）周，自然流产组 20例，年龄 23～37 岁，平均年龄（25.2±5.1）岁，孕周 6～10 周，平均孕周（7.3±2.1）周。另外取 42例流产对象的绒毛组织标本作为绒毛组，剖宫产对象取其胎盘作为胎盘组，年龄23～37岁，平均年龄（26.5±4.4）岁。人工流产组和自然流产组、绒毛组和胎盘组研究对象的资料差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法

Jagged-1、Jagged-2和CD56+NK细胞均采用免疫组化方法进行测定。首先进行固定标本、对其进行脱水、透明、浸蜡然后包埋，将其切至厚度为3～5μm。染色之前37℃烤箱过夜，脱蜡，水化，酒精、水进行清洗，制成玻片放在湿盒内，加入3%过氧化氢，蒸馏水冲洗，缓冲液浸泡振荡，进行抗原修复。分别滴加鼠抗人单克隆抗体CD56和CD16，兔抗人多克隆抗体Jagged-2、Jagged-1在组织上，通过PBS冲洗切片，加酶标抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30 min，冲洗切片，缓冲液浸润、振荡，加入DAB进行显色，1min通过蒸馏水终止显色，通过苏木素进行复染。通过高倍显微镜进行观察，随机选择15个高倍视野，计算每隔视野阳性细胞面积和视野总面积的比值，呈现黄色或者棕黄色为阳性反应。

1.3 观察指标

①观察绒毛组和胎盘组Jagged-1、Jagged-2表达情况；②观察自然流产组和人工流产组绒毛中的CD56+、Jagged-1及Jagged-2的表达情况；③观察CD56+、Jagged-1及Jagged-2表达的相关情况。

1.4 统计方法

通过采用统计学软件SPSS 19.0建立数据库进行统计学分析，通过t检验主要对计量资料进行分析，运用直线相关性的分析。

2 结果

2.1 绒毛组和胎盘组Jagged-1、Jagged-2表达情况

绒毛组和胎盘组Jagged-1、Jagged-2表达情况，见表1。胎盘组Jagged-1高于绒毛组，Jagged-2低于绒毛组，差异有统计学意义（P<0.05）。

表1 绒毛组和胎盘组Jagged-1、Jagged-2表达情况（）

表1 绒毛组和胎盘组Jagged-1、Jagged-2表达情况（）

组别Jagged-1 Jagged-2绒毛组(n=42)胎盘组(n=30)t值P值13.5±1.015.3±1.17.22<0.0527.6±1.216.7±1.435.44<0.05

2.2 人工流产组和自然流产组绒毛中 Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表达情况

自然流产组和人工流产组绒毛中CD56+、Jagged-1及Jagged-2的表达情况，见表2。自然流产组Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表达均低于人工流产组，差异有统计学意义（P<0.05）。

表2 人工流产组和自然流产组绒毛中Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表达情况（）

表2 人工流产组和自然流产组绒毛中Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表达情况（）

组别Jagged-1Jagged-2 CD56+人工流产组(n=22)自然流产组(n=20)t值P值13.6±1.111.0±1.010.26<0.0527.3±1.113.7±1.053.69<0.059.6±1.26.7±1.010.82<0.05

2.3 Jagged-1阳性细胞和Jagged-2阳性细胞的表达水平

CD56+NK细胞和绒毛组织中的Jagged-1阳性细胞表达水平、Jagged-2阳性细胞表达水平均呈现明显正相关，差异有统计学意义（r=0.91,0.95，P<0.05）。

3 讨论

胚胎与母体之间接触的界面称为母胎界面，它包含了胎儿滋养层和母体子宫蜕膜。由当蜕膜化诱导因子对子宫的内膜间质刺激时导致增殖分化从而形成了异质性组织，这种组织叫做脱膜组织。脱膜组织由多种细胞组成[2]。胚胎及其附属物的主要营养来源是蜕膜，其不仅具有很好的营养作用，同时也是一种局部的免疫器官，对于妊娠有着重要的作用。免疫细胞的入侵和蜕膜化是妊娠早期的主要过程，蜕膜中的B淋巴细胞和T淋巴细胞的在早期妊娠中的数有所减少，大约占蜕膜组织中20%左右的免疫细胞，子宫蜕膜自然杀伤细胞占子宫淋巴细胞的70%，主要分布在受精卵着床部位的周围。Notch信号通路主要包括Notch受体、Notch配体、CSL DNA结合蛋白，其中Notch受体在T细胞、B细胞、干细胞、巨噬细胞等多种细胞表面分布，其包括五种配体，主要是 Jagged-1、Jagged-2、Delta-like1、Delta-like3、Delta-like4.Jagged-1在胎盘、心脏、肺、肾均有广泛的表达，其主要是对组织发育进行调控，对造血前体细胞发育有效的维持，并且参与增殖分化[3]。有研究表明[4]，Notch信号在人胎盘中有重要的调节作用，Notch信号和配体Jagged-1参与了血管的塑性和稳定。Jagged-1通过Notch信号系统参与T/NK细胞的更新和发育。以往资料显示[5]，人体侵袭性胃癌和Notch配体Jagged-1有着密切的关系。经过实验证实Jagged-1对Notch型号途径介导，从而诱发多发性骨髓瘤发生增殖。有资料显示[6]，Jagged-2在造血干细胞上表达丰富，提高了造血祖细胞的增生能力。在正常的妊娠绒毛组织中，有四种Notch受体进行表达，其中第一期绒毛组织中的Jagged-1表达远远低于在妊娠第三期的胎盘组织中的Jagged-1表达，而Jagged-2的表达和 Jagged-1正好相反，Jagged-2、Jagged-1、对妊娠成功起着显著的重要的作用[7]。在早期妊娠中，有不同功能的NK细胞和外周血表型在蜕膜中，其主要是CD56brightCD16dim，此类因子在滋养层细胞和受精卵着床周围浸润。资料显示[8]，自然流产蜕膜中的表达量远远低于人工流产蜕膜中CD56+NK细胞表达量，通过研究显示，当自然流CD56+NK细胞的数量下降，可以导致母胎界面细胞因子中的GM-CSF和TGF-β表达的降低，进一步的对胎儿的生长发育环境造成了影响，最终导致流产。Jagged-1会刺激造血祖细胞发生分化，形成NK细胞Jagged-2可以诱导脐带血 CD34+细胞表达 CD56brightCD16-、CD94-和CD117+NK细胞，并且表达NKG2D表达，对于K256细胞有一定的杀伤活性。综上所述，Jagged-1、Jagged-2可能共同参与了NK细胞表型的变化，从而对妊娠结局造成影响，并且形成妊娠免疫耐受。

[1]张建平.NK细胞与复发性自然流产母胎免疫紊乱[J].中山大学学报：医学科学版，2010,31(4):451-482.

[2]Mali ekal TT,Bajaj J,GiriV,et al.The role of Notch Signaling inhuman cervical cancer:implieations forsolidtum ors[J].Oneogene，2008,27(38):5110-5114.

[3]黄佳圆,王锐,陈龙邦.Notch-1信号通路与肿瘤耐药研究进展[J].医学研究生学报,2011,24(12):1301-1305.

[4]王瑾,邓磊,王艳华，等.激活的 Notch信号系统对许旺细胞调控作用的影响[J].中华显微外科杂志，2010,33(5):378-381.

[5]赵娜，周梅恺，叶玉伟，等.胃癌组织中 Notch1、Jagged1及 NF-κB的表达及临床意义[J].南京医科大学学报：自然科学版，2012,32（8）：1061-1065.

[6]李红,勾朝阳,哈敏文.Notch1在人胃癌组织中的表达及意义[J].中国医科大学学报,2010,39(5):356

[7]康明丽,张延丽,畅学艳.自然流产大鼠蜕膜组织ENA-78和TNF-α的表达[J].中外医疗，2009,28（24）：29-30.

[8]肖海波.galectin-3、CK19、MC和 CD56在甲状腺微小乳头状癌诊治中的应用[J].中外医疗，2014,33（13）：179-180.