骨髓涂片中性粒细胞碱性磷酸酶染色诊断非霍奇金淋巴瘤的临床价值

2014-11-14钟礼瀑吴青青吕赛平徐光明邹学森陈岳青刘琴

实验与检验医学 2014年1期

钟礼瀑，吴青青，吕赛平，徐光明，邹学森，陈岳青，刘琴

(江西省肿瘤医院1、输血科，2、检验科，江西南昌 330029)

非霍奇金淋巴瘤 (non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)是一种病因仍不明确的恶性实体瘤，其淋巴组织(或器官)由不同类别或阶段的淋巴细胞过度增生，易发生淋巴结外多部位或多器官的浸润，临床表现和预后多样，临床常将Ann Arbor分期的Ⅰ、Ⅱ期称为早期，Ⅲ、Ⅳ期称为晚期[1]。当前临床对NHL的诊断主要还是症状结合病理[2]、影像等检查手段，实验室检查也起重要作用，但有关骨髓片中性粒细胞碱性磷酸酶染色 (neutrophil alkaline phosphatase，NAP)在NHL中的应用报道不多，本文探讨骨髓细胞NAP染色在非霍奇金淋巴瘤诊断中的价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料观察组病例来源于我院2009年1月到2013年2月有淋巴结肿大的患者经临床组织病理学、淋巴结穿刺物涂片、淋巴结印片等方法[3]检查确诊、临床资料完整的NHL住院患者共117例，其中男性84例，女性33例，中位年龄56岁，属NHL早期41例，晚期76例；正常对照组17例，系我院同期首诊取材时确诊为非肿瘤、无感染、发热等征象，骨髓象基本正常的良性病患者，其中男性7例，女性10例，中位年龄39岁。

1.2 方法

1.2.1 试剂配制 (1)称取 α-磷酸萘酚钠40mg，固兰B盐15mg，临用前溶于40ml 0.1MTris缓冲液中即成应用液；(2)称取1克甲基绿溶于100ml蒸馏水，配成1%甲基绿溶液。

1.2.2 取材与染色所有入组病例均取其首诊时第一次骨髓片2张(一张备用)；标本先95%乙醇固定15min后以洁净自来水轻缓冲洗0.5～1min,凉干；取固定好的髓片放入经37℃预温10min后的应用液中染色1h，取出以自来水轻缓淋洗0.5～1min后凉干；再以1%甲基绿溶液复染10min，取出自来水轻缓淋洗0.5～1min后凉干待检。

1.2.3 判断标准和计分方法先用低倍镜找好细胞均匀分散的视野后换油镜观察100个中性粒细胞，以细胞浆内无红色物质为-，胞浆内有1/4面积显褐色为+，红褐色占胞浆面积1/2以下为2+，胞浆内有致密的黑色颗粒为3+，胞浆内或胞核上充满了致密深染的棕黑色颗粒为4+；以+、2+、3+、4+阳性的细胞数分别乘以1、2、3、4即为各级阳性细胞积分，最后计算出阳性率和总积分。

2 结果

2.1 观察组与对照组骨髓细胞碱性磷酸酶积分及阳性率的比较观察组骨髓细胞碱性磷酸酶积分、阳性率均显著低于对照组，两者相比差异均有统计学意义(P＜0.01)，见表1。

表1 观察组与对照组骨髓细胞碱性磷酸酶积分及阳性率比较(±s)

组别积分(分) 阳性率(%)观察组(n=117)对照组(n=17)t P 77.50±43.45 108.53±29.80 2.844<0.01 52.95±22.66 75.53±15.31 3.973<0.01

2.2 早期与晚期非霍奇金淋巴瘤患者骨髓细胞碱性磷酸酶积分及阳性率的比较早期与晚期非霍奇金淋巴瘤患者的骨髓细胞碱性磷酸酶积分、阳性率相比差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

3 讨论

NAP是一种存在于成熟中性粒细胞浆内的非特异性水解酶，幼稚粒细胞中此酶含量很低，可视作成熟粒细胞功能的标志物之一，也间接反映着机体由成熟粒细胞协同参与的一些免疫机能状况的强弱。从我们的研究结果来看，NHL组中无论是骨髓中性粒细胞碱性磷酸酶积分还是其阳性率均显著低于正常对照组，提示骨髓细胞NAP积分和阳性率减低对NHL的诊断均有较大的参考价值，或可成为NHL一项新的观察指标，与参考文献一致[4]；但本NHL早期组与晚期组的积分和阳性率两两相比又均无显著差异，说明NHL的NAP积分并不随病程的进展而升高，不能以此来判别NHL的病程，与此前非严格按Ann Arbor分期设计的相关报道[5，6]结论不符，也有报道NHL的NAP积分与淋巴细胞类型有关[7]，故我们的结果是否因Ann Arbor分期与NHL的细胞类型无关所致，仍有待进一步研究。

表2 早期与晚期非霍奇金淋巴瘤患者骨髓细胞碱性磷酸酶积分及阳性率的比较(±s)