肝细胞肝癌超声造影与血管生成的关系

2014-11-13艾迪拜木合买提热沙来提阿不都瓦衣特新疆医科大学第一附属医院新疆乌鲁木齐830054

吉林医学 2014年18期

艾迪拜·木合买提，热沙来提·阿不都瓦衣特（新疆医科大学第一附属医院，新疆乌鲁木齐 830054）

血管生成是促进肝细胞肝癌侵袭、生长以及转移等的重要基础，微血管密度（MVD）在很大程度上反应了肝细胞肝癌组织新生成血管的情况，这也是临床判断肿瘤预后的重要指标[1]。本研究分析了免疫组化法测得的MVD与超声造影所得峰值强度（PI）之间的关系，旨在探讨超声造影征像与血管生成的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2011年1月～2013年9月我院收治的肝细胞肝癌患者43例（51个病灶），男35例，女8例，年龄33～72岁，平均（43.4±2.5）岁。36例为1个病灶，6例为2个结节，1例为有3个结节，结节最大直径在2.0～6.0 cm之间，平均（3.7±2.1）cm。

1.2 仪器和试剂：美国Acuson Sequoia 512型超声诊断仪，探头为4C-1型，配套CPS超声造影成像软件以及ACQ超声造影定量分析软件。采用意大利Bracco公司生产的Sono Vue造影剂，使用前加入生理盐水5 ml溶解并振摇均匀，并抽取2.4 ml经患者的肘部浅静脉予以快速注射，然后在快速注射生理盐水5 ml。羊抗鼠试剂盒以及鼠抗人CD34单克隆抗体均由北京中山生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 超声造影：采用二维与彩超对肝脏以及病灶部位进行扫查，仔细观察并记录病灶的位置、数目、大小、边界、血供情况、内部回声等。启动CPS系统，常规注入造影剂，视患者的探头与病灶的距离以及患者的胖瘦合理调节机械指数，实时监测病灶区域以及周围肝组织的回声强度变化以及灌注过程，并将造影全程数据记录存盘。结束造影后，以ACQ软件进行图像分析。选择动脉期感兴趣区，对强化最明显的病灶部位以及同深度癌旁组织绘制造影时间—强度曲线，即可得出病灶部位以及癌旁组织的造影峰值强度（PI）。

1.3.2 免疫组化检查：选取51个结节经超声造影显示动态增强的区域（ROI）标本，采用苏木素—伊红进行染色，以CD34染色以及MVD进行测定。所有标本均采用4%的福尔马林进行固定，并以石蜡包埋和固定。切片均以SP法进行CD34染色，一抗浓度控制为1:100。本组所有标本均在相同的条件下进行染色，均设置阳性以及阴性对照组，以抑制阳性HCC组织作为阳性对照，以PBS代替一抗进行组织切片孵育，以此作为阴性对照组。在低倍镜（×100）下仔细观察并选择微血管最丰富、肿瘤细胞浸润区域，换为高倍镜（×400）进行观测，并以染色最为清晰的区域，选取5个背景对照较好的视野较小微血管计数，取平均值计数，以此作为MVD。

1.4 统计学分析：使用SPSS 18.0对各项资料进行统计、分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病灶及癌旁组织超声造影特征、PI及血管生成：本组51个病灶在动脉期均表现为增强，且增强时间较周围肝实质更早，其中有46个病灶的造影剂退出时间较周围肝组织明显提前，呈现快进快出的特征，造影时间与峰强度曲线上呈现早期快速增强以及峰值强度较高。另5个病灶的超声造影显示，在门静脉期以及实质期，患者的病灶内部回声似于周围肝组织。经免疫组化染色显示，病灶内部生成丰富微血管。病灶组织的PI以及MVD均显著高于癌旁组织（P＜0.05），在病灶组织中，46例个“快进快出”病灶的PI值与MVD略低于5个回声似于周围肝组织病灶，但差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 病灶及癌旁组织超PI及MVD（）

项目病灶组织与癌旁组织不同病灶组织病灶组织（n=51）癌旁组织（n=51）快进快出病灶（n=46）回声正常病灶（n=5）PI（dB） 135.18±28.15 72.92±19.21 134.25±26.14 145.66±30.19 MVD 43.45±12.21 17.15±9.16 42.09±12.11 47.58±13.25

2.2 PI与MVD间的关系：经线性分析显示，病灶与癌旁组织的PI与MVD之间呈现正相关的关系（r=0.782，P＜0.05）。见图1。

3 讨论

肝细胞肝癌是临床常见的一种恶性肿瘤，具有易于转移和复发、预后不良以及死亡率较高等特点。近年来，随着肿瘤学领域研究的深入，学者们提出了肿瘤生长“血管依赖说”，即肿瘤的生长过程中新生血管具有重要作用，对于肝细胞肝癌的临床治疗以及预后预测等均具有重要意义[2]。新生血管能够为肿瘤细胞的生长提供氧气和营养，还可导致肿瘤转移风险增加，MVD能够客观准确地反应病灶组织的新生血管程度，这也是判断临床预后的重要指标。但目前测量组织MVD的方法主要是取组织学标本测定，操作繁琐，具有创伤性，且其可重复性较差，难以在术前作出准确评估，这在很大程度上限制了组织学MVD计算在临床中的应用[3]。因此，寻找一种无创、简便快捷且能够反复在活体上实施的MVD评价技术非常必要。

超声造影技术是一种新型的影像学检查技术，其利用造影剂进入到组织微循环中，并以低机械指数进行连续成像，可动态、实时地监测肿瘤组织中血液灌流的具体情况，能够对肿瘤进行定性诊断，并可为临床提供间接性病理信息[4]。其定量定性超声造影对于肿瘤血管生成的显示主要表现为恶性肿瘤存在明显强化以及丰富灌注。相比于常规超声技术，超声造影技术应用超声造影剂能够更为敏感地显示出病灶组织，提高临床鉴别诊断的准确性，并能够更为清晰地显示组织血流状况以及灌注情况[5]。

本研究应用Sono Vue超声造影剂进行超声造影检查，在动脉期病灶均显示为快速增强，对病灶组织以及癌旁组织感兴趣区绘制时间-强度曲线，分析显示，病灶组织造影剂达到所需时间以及达到PI时间均较癌旁组织明显提前，PI值显著提高。提示肝细胞肝癌的病灶组织主要为动脉供血，且血流灌注较癌旁组织明显更高。此外，经病灶组织与癌旁组织MVD计算结果显示，病灶组织的MVD显著高于癌旁组织。经相关性分析显示，PI与MVD之间呈现正相关性，与相关研究报道一致。由此可见，肝细胞肝癌病灶组织的PI较癌旁组织更强，且与MVD水平密切相关，测量组织PI可推测肝癌的MVD水平，有效反应肝癌组织新生血管情况。肿瘤的PI值越大，MVD就越大，也说明肿瘤组织的血流灌注较癌旁组织跟高。