咽炎宁含片制备工艺的优选方法

孙 昕，杨雪萍，张 强，谷媛媛，吕泰省，刘 卫

咽炎宁含片是在笔者所在医院协定处方元参甘橘汤的基础上添加木蝴蝶精制而成。原处方经多年临床验证，在阴虚火旺，虚火上浮，口鼻干燥，咽喉肿痛等症的治疗中取得了显著的疗效。添加木蝴蝶可增强清肺、利咽、止咳作用，减少对胃肠道的刺激。咽炎宁含片使用方便，生物利用度高，可克服原制剂的剂量不准确、口感欠佳、生物利用度低等缺点。本研究采用单因素考察、正交优化法，以哈巴苷、哈巴俄苷为指标性成分，对提取、浓缩；以崩解时限、含片口感为指标对成型工艺进行考察。优化了咽炎宁含片的制备工艺。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 高效液相色谱仪（安捷伦1200，四元泵，自动进样），电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司 BT124S），超声仪（HS3120），转篮式压片机（山东青州市精诚机械有限制造公司 THP-4T），真空泵（巩义市英峪予华仪器厂），2B-1B智能崩解仪（天津大学精密仪器厂）。

1.2 材料和试剂 哈巴苷、哈巴俄苷（中国药品生物制品检定所，化学对照品），甲醇（色谱纯，天津市四通化工厂），乙腈（色谱纯，天津市四通化工厂），醋酸（分析纯，天津市巴斯夫化工有限公司）。

2 方法与结果

2.1 哈巴苷、哈巴俄苷的含量测定方法的建立［1］

2.1.1 色谱条件 色谱柱 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相由乙腈和0.03%磷酸溶液组成，梯度洗脱（乙腈的体积变化为 0～7 min，3→10%；10～20 min，10→33%；20～25 min，33→50%；25～30 min，50→80%；30～35 min，80%；35～37 min，80→3%；流速 1.0 ml／min；检测波长为 210 nm；进样量 10 μl。

2.1.2 对照品溶液制备 取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品适量，精密称定，加 30%甲醇制成含哈巴苷 60 μg／ml，哈巴俄苷 20 μg／ml的混合溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液制备 取样品约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，称重，超声（500 w，40 kHz）处理45 min，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。如图1。

2.1.5 线性关系考察 取哈巴苷、哈巴俄苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成含哈巴苷0.12 mg／ml、哈巴俄苷0.04 mg／ml的溶液。分别精密吸取对照品溶液 1、2、4、6、8、10 ml至10 ml量瓶，加甲醇至刻度摇匀。分别精密吸取上述溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，计算回归方程。哈巴苷 Y=8.0589X-1.1283，r=0.9999，在 12～120 μg／ml范围内线性良好；哈巴俄苷Y=49.7304X-3.8475，r=0.9999，在4～40 μg／ml范围内线性良好。

图1 哈巴苷、哈巴俄苷及样品高效液相色谱图

2.1.6 精密度试验 吸取哈巴苷、哈巴俄苷对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积积分值，结果哈巴苷RSD为1.074%，哈巴俄苷RSD为1.261%。

2.1.7 稳定性试验 取样品溶液， 分别在0、2、4、8、12、24 h测定，测得哈巴苷、哈巴俄苷峰面积积分值，哈巴苷RSD为1.374%，哈巴俄苷RSD为1.823%。

2.1.8 重复性试验 精密称取同一批次样品6份，按供试品溶液制备方法制备。按色谱条件测定哈巴苷、哈巴俄苷的含量，计算RSD分别为哈巴苷1.508%、哈巴俄苷1.669%。

2.1.9 加样回收率试验 分别精密称取已知含量的样品6份，各1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入哈巴苷（1.1 mg／ml）、哈巴俄苷（0.38 mg／ml）的对照品溶液 4 ml，按供试品溶液制备法制备，按拟定方法测定哈巴苷、哈巴俄苷含量，计算回收率，哈巴苷平均回收率为99.54，RSD为1.62%；哈巴俄苷平均回收率为98.71，RSD为1.85%。

2.2 提取工艺考察

2.2.1 提取物中哈巴苷、哈巴俄苷含量测定 称取干燥后的各试验号提取物2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇 50 ml，密塞，称重，超声（500 w，40 kHz）处理 45 min，再称重，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，按上述色谱条件测定。

2.2.2 正交试验设计 采用正交试验设计对提取工艺进行优化，考察提取次数、提取时间、溶剂倍量、浸泡时间对提取工艺的影响。以哈巴苷、哈巴俄苷的提取量为指标，建立L9（34）正交试验表，因素与水平见表1，正交试验结果见表2。

2.2.3 结果 以上试验结果进行方差分析后发现，A因素的差异有统计学意义（P<0.05），B、C、D因素的差异无统计学意义（P>0.05），各因素对咽炎宁含片药材提取工艺的影响程度为：A>C>B>D，即因素A对提取工艺影响最大，因素C次之，因素D影响最小。因素D的极差最小，数据处理时作为最小误差项。虽然加10倍量水提取得率较高，但与加8倍量水提取相差不大，为了节省能源，将提取加水倍量定位8倍。最佳工艺为条件为A3B1C2D2，即加8倍量水，浸泡1.5 h，提取次数3次，提取时间1 h／次。

表1 提取工艺因素和水平

表2 正交试验结果

2.3 成型工艺考察 根据预试验结果，确定主药投料量为50%；选取糊精、甜菊苷、薄荷脑、硬脂酸镁为辅料［2］。

2.3.1 润滑剂选择及用量的考察 咽炎宁含片主药为中药提取物，压片前颗粒流动性不好。为增加颗粒的流动性，减少与模孔壁的摩擦，防止粘冲，保证含片表面光滑美观，需在颗粒中添加一定润滑剂。硬脂酸镁为常用的润滑剂，具有质地轻，比表面积大，易与颗粒混匀，用量较少（其常规剂量为0.3%～1.0%）等优点。故选择硬脂酸镁为含片的润滑剂，并设计试验，考察不同用量硬脂酸镁对颗粒流动性、压片时粘冲情况及片剂质量的影响。结果见表3。

表3 硬脂酸镁用量对制剂工艺的影响

以上结果表明，1%的硬脂酸镁制得片剂各项指标均较优。

2.3.2 正交试验设计 以糊精、薄荷脑、甜菊苷为考察因素，每个因素选取3个水平，采用正交试验考察处方中糊精、薄荷脑、甜菊苷的用量对含片口感的影响。因素水平见表4。

表4 制备工艺因素与水平

以口感为指标，确定评分标准。0分为口感过苦或过甜，清凉感过重；1～6分为甜度适中，清凉感差或甜度差，清凉感适中；7～10分为甜度适中，清凉感适中。按以上标准分别进行评分，正交试验结果见表5。

表5 制备工艺正交试验结果

以上试验结果进行方差分析后发现，C因素的差异有统计学意义（P<0.05），A、B、D因素的差异无统计学意义（P>0.05），各因素对咽炎宁含片口感的影响程度为：C>B>A>D，即因素C对口感影响最大，因素B次之，因素D影响最小。因素D的极差最小，数据处理时作为最小误差项。由此确定辅料的最佳组合为：C3B2A2，即糊精用量为0.7 g，薄荷脑用量0.01 g，甜菊苷用量 0.03 g。

3 讨 论

3.1 提取工艺 提取溶剂用量对咽炎宁含片的提取有一定的影响。加10倍量水提取哈巴苷、哈巴俄苷的量稍高，但与加8倍量水相差不大。为了节省能源，将溶剂倍量定为8倍量。正交试验结果表明，最佳工艺为条件为A3B1C2D2，即加8倍量水，浸泡1.5 h，提取次数3次，提取时间1 h／次。

3.2 制备工艺 在处方筛选中，曾对辅料的选用进行了考察，以甜菊苷代替葡萄糖进行试验，发现甜度和黏度较合适，具有高甜度、低热量、口味好、防龋齿等特点，对糖尿病和高脂血症也同样适用，是一种较为理想的甜味剂。

口含片对口感要求较高，因此对这个指标进行重点考察。此外，还对该含片的片重差异进行的考察，结果按该工艺条件所制得的含片各项指标均符合要求。且其制备工艺简单，适合于工业化大生产，具有良好的开发应用前景。

3.3 含量测定方法 咽炎宁含片以玄参为君药，而玄参中哈巴苷、哈巴俄苷为其指标成分，故以哈巴苷、哈巴俄苷的含量作为控制制剂质量的指标。样品处理方法简单，精密度高、重现性好。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］刘石林，向建南，吕守本.从甜菊叶中提取和精制甜菊苷的方法［J］. 蚌埠医学院杂志，1995，20（6）：425.