脂氧素A4对颅脑损伤伴失血性休克心肌损伤保护作用的实验研究

王 丽，张焕丽，王华伟，李 瑞

颅脑损伤伴失血性休克（TBIS）病情凶险、并发症多见，是临床上常见的危重症之一，救治难度大，预后较差，而过度炎症反应是引起机体二次损伤的重要原因［1，2］。在 TBIS 进展过程中，心肌的损伤对患者的预后起着非常重要的作用。因此，如何抑制过度炎症反应，减轻心肌的损伤，对改善患者预后具有重要的意义。脂氧素A4（LXA4）是一种内源性脂类介质，被称为是炎症反应的“刹车信号”，其通过抑制中性粒细胞的趋化、黏附和炎性介质的释放而发挥广泛的抗炎作用［3，4］。

本研究对TBIS大鼠进行术前LXA4干预，对大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及肌酸激酶同工酶（CK-MB）进行检测，对心肌梗死面积及炎性细胞浸润进行观察，旨在探讨LXA4对TBIS大鼠心肌损伤的保护作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组 清洁级雄性Wistar大鼠36只（山东大学医学院实验动物中心），体重220～250 g。随机分成假手术组（C组）、TBIS模型组和LXA4干预组（C组），每组12只。

LXA4干预组于术前6 h及2 h尾静脉注射LXA4（脂氧素A4，Lipoxin A4methyl ester， 美国Cayman公司生产，溶于10%乙醇），给予量为0.1 mg/kg体重。C组及TBIS组尾静脉注射等量生理盐水及10%乙醇溶液。

1.2 动物模型制备 大鼠实验前禁食12 h，不禁水。采用自由落体复制颅脑外伤合并失血性休克模型［1］。假手术组仅开颅窗后骨蜡封闭骨窗，不予打击及放血。

1.3 标本留取及指标测定

1.3.1 丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及CK-MB测定 在各组模型制成120 min后快速从颈动脉采血2 ml，37℃水浴30 min，离心15 min（3500 r/min），取上清，-70℃保存。丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。CK-MB试剂盒购自上海申能-德赛有限公司。测定步骤完全按照试剂盒说明书进行。

1.3.2 心肌梗死面积计算 参照文献［5］，在各组模型制成120 min后，将左冠状动脉前降支结扎，颈静脉注射0.5%伊文蓝1.5 ml，取心脏，区分左心室缺血区（非蓝染区）和非缺血区（蓝染区），吸干水分，称重。将缺血区心肌剪下并进行TTC染色后，用生理盐水冲洗，梗死区呈灰白色，非梗死区呈深红色，分别剪下，吸干水分，称重。缺血面积=缺血区质量/左心室总重量×100%，梗死面积=梗死区质量/缺血区质量×100%。

1.3.3 心肌组织炎性细胞观察 取心肌组织，先用生理盐水清洗，用10% 甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片及HE染色，在光镜下观察中性粒细胞的浸润情况。

1.4 统计学处理 采用SPSS 12.0统计软件包进行分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血清MDA、SOD及CK水平变化 与C组比较，TBIS组血清MDA、CK-MB水平及心肌梗死面积明显升高（P<0.01），而SOD水平明显下降（P<0.01）；LXA4治疗组血清 MDA、CK-MB 水平及心肌梗死面积较TBIS组明显下降（P<0.01），而SOD水平明显升高（P<0.01）。见表1。

表1 血清 MDA、SOD 及 CK-MB 水平变化（±s，n＝12）

表1 血清 MDA、SOD 及 CK-MB 水平变化（±s，n＝12）

注：与C组比较，*P<0.01；与TBIS组比较，#P<0.01

组别 MDA（nmol/mg pro） SOD（U/mg pro） CK-MB（U/L）C 组 3.34±0.82 29.55±7.43 379.2±28.6 TBIS 组 6.71±1.59* 14.91±5.31* 1185.3±106.9 LXA4治疗组 4.39±0.94*# 22.47±4.92*# 837.8±93.1

2.2 LXA4组与TBIS组心肌缺血情况比较 LXA与TBIS组比较，缺血面积及梗死面积均明显降低（P<0.05）。见表2。

表2 各组大鼠心肌缺血情况比较（±s，n＝12）

表2 各组大鼠心肌缺血情况比较（±s，n＝12）

注：#P<0.05

组别 缺血面积 梗死面积TBIS 组 41.2±3.9 57.2±5.3 LXA4治疗组 35.1±3.6# 51.1±4.8#

2.3 心肌组织炎性细胞浸润比较 C组大鼠无炎性细胞浸润，TBIS组心肌缺血区与坏死区可见大量中性粒细胞浸润并出现聚集。LXA4组中性粒细胞浸润较TBIS组明显减轻。

3 讨 论

颅脑损伤伴失血性休克（TBIS）病情凶险、并发症多见，是临床上常见的危重症之一，救治难度大，预后较差。在TBIS进展过程中，心肌的损伤对患者的预后起着非常重要的作用。因此，如何抑制过度炎症反应，减轻因过度炎症反应所引起的机体二次损伤，减轻心肌损伤，对改善患者预后具有重要的意义。

脂氧素LXA4是LX最主要的家族成员之一，在促炎性介质前列素E2和白三烯之后产生，属于二十烷家族中一类花生四烯酸酯加氧酶代谢产物，是目前所知体内重要的内源性促炎症消退介质。一方面，LXA4通过促进巨噬细胞对凋亡的中性粒细胞的吞噬，及时清除中性粒细胞，促进炎症消退另一方面，LXA4通过拮抗白三烯、抑制白细胞游走、黏附分子及趋化因子受体表达，抑制炎症反应的进一步恶化［3，4］。

本研究应用LXA4对TBIS大鼠进行干预，结果显示，LXA4治疗组血清CK-MB水平及心肌梗死面积较TBIS组明显下降（P<0.01）；病理组织切片显示，TBIS组大鼠心肌缺血区与坏死区可见大量中性粒细胞浸润并出现聚集，而LXA4组中性粒细胞浸润较TBIS组明显减轻。表明应用LXA4对TBIS干预能够减轻模型大鼠的心肌损伤。

创伤后机体会发生氧应激损伤，由此引起多种炎性介质的释放，会进一步加剧休克进程。丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）能较好反映机体内氧自由基水平和机体对氧自由基的清除能力。本研究结果显示，TBIS组与LXA4治疗组血清MDA的水平均高于C组，SOD活性均低于C组。说明在TBIS早期，机体产生了大量氧自由基。而SOD水平的降低使得机体对氧自由基的清除能力下降，并可进一步造成机体的氧化与抗氧化平衡体系被打破，导致心肌组织中氧自由基的蓄积，加剧心肌组织的损伤。与TBIS组比较LXA4治疗组血清MDA活性降低，SOD活性升高。说明LXA4干预，能明显降低机体氧自由基的产生，有效增强机体的抗氧化水平。

总之，LXA4干预可有效降低TBIS大鼠的脂质过氧化水平，增强清除氧自由基的能力，减轻炎症反应，对TBIS所致心肌损伤具有保护作用。

［1］许会彬，王 青，王化芬，等.大鼠颅脑损伤伴休克所致小肠过氧化损伤及ω-3多不饱和脂肪酸的保护作用［J］.中华实验外科杂志，2011，28（9）：1584.

［2］李 晖，杨永锐，杨晓冬，等.慢性乙型肝炎患者血浆脂氧素A4水平与疾病临床分度的关系研究［J］.昆明医科大学学报，2014，35（02）:80-82.

［3］陶缘发，李宏宾，王广志，等.脂氧素受体激动剂BML-111减轻大鼠机械通气肺损伤［J］. 临床麻醉学杂志，2014，30（03）：279-282.

［4］王学莹，关为群.脂氧素A4与炎症性疾病［J］.国际口腔医学杂志，2013，40（03）：334-338.

［5］李 进，袁世荧，丰新民，等.舒芬太尼延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的影响［J］. 中华麻醉学杂志，2009，19（8）:692-695.