高效液相色谱法测定脂降宁片中葛根的含量

天津市宝坻区药品检验所（301800）尹立平 刘宝珠

脂降宁片由制何首乌、葛根等8味中药及氯贝酸铝等制成的复方制剂，具有降脂、活血通络等作用，降低甘油三酯效果显著。脂降宁片的质量标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂第七册，只有制何首乌薄层鉴别及氯贝酸铝的含量测定标准，因此为了能更好地控制制剂质量，本实验研究并建立脂降宁片中葛根（以葛根素计）的HPLC含量测定方法。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药 岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪；梅特勒托利多天平AB265-S；岛津UV-2401PC紫外可见分光光度仪；昆山市超声仪器有限公司生产的KQ5200E型超声波清洗器；葛根素对照品（来源：中国药品生物制品检定所，批号：110752-200912，含量：96.0%）；脂降宁片（A厂批号为130901、B厂批号20121209、C厂批号20121001）；阴性对照样品市售药材自制；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件 色谱柱：迪马-platisil ODS C18（5μm，250×4.6mm）；柱温30℃；流动相：乙腈-水（11:89）；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；检测波长：250nm。

1.3 方法与结果

1.3.1 供试品溶液的制备 取本品10片，去糖衣，精密称定，研细，精密称取细粉约0.3g，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇溶液补足减失重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

附表1 加样回收试验结果

附图1 葛根素标准曲线

附图2 阴性样品

附图3 对照品

附图4 样品

1.3.2 阴性样品溶液的制备 按处方配比及工艺自行制备阴性样品，再按“供试品溶液制备”方法制备阴性样品溶液。

1.3.3 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品约12.5mg（对照品取量为13.45mg），置50ml量瓶中，加70%甲醇溶液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加70%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含葛根素0.025mg）。

1.3.4 线性及范围 精密称取葛根素对照品13.45mg，按“对照品溶液的制备”方法制得溶液（0.02582mg/ml），分别 进 样1、2、5、10、15、20、25、30μl，按上述色谱条件测定，以葛根素浓度mg/ml（0.02582、0.05165、0.1291、0.2582、0.3873、0.5165、0.6456、0.7746）为X轴，峰面积（108999、119011、599179、1176081、1779843、1431088、2966459、3558551）为Y轴绘制标准曲线，得葛根素线性回归方程y=5E+06X-4840，r=0.9998，表明葛根素在0.02582～0.7746μg的范围内呈良好线性关系。见附图1。

1.3.5 精密度试验（重复性） 取同一供试品（编号1）6份，精密称定，按“供试品溶液的制备”方法制备溶液，依上述色谱条件进行检测，得峰面积分别为1127381、1127852、1127321、1128554、1126616、1125617，RSD=0.1%（n=6），表明该方法重现性好。

1.3.6 专属性 将对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液按上述色谱条件测定，供试品溶液中葛根素峰与相邻色谱峰分离度符合要求，阴性样品无干扰。表明该方法专属性强。见附图2～4。

附表2 三个厂家样品葛根素含量

1.3.7 加样回收试验 精密称取已知含量（葛根素含量1.93mg/g）的脂降宁片（批号130901）细粉约0.15g，置具塞锥形瓶中，精密加入葛根素对照品溶液（浓度0.3228mg/ml）1ml，按“供试品溶液的制备”方法制备溶液，依上述色谱条件进行检测，计算回收率。见附表1。

1.3.8 样品测定 取A、B、C三个厂家样品，按“供试品溶液的制备”方法制备溶液，依上述色谱条件进行检测，计算葛根素的含量。见附表2。

1.3.9 稳定性试 取同一供试品溶液，在室温下分别放置0、1、2、3、4、5、6、7天后按“1.2色谱条件”测定，峰面积为1127381、1119701、1125539、1120390、1126348、1129331、1122018，RSD=0.3%，表明供试品溶液在7天内稳定。

2 讨论

2.1 吸收波长确定 配置0.01μg/ml的葛根素对照品甲醇溶液，用UV-2401PC型紫外分光光度仪在100～400nm范围内扫描，在249.9nm有最大吸收，故确定葛根素检测波长为250nm。

2.2 供试品溶液制备 分别采用乙醇、甲醇、70%甲醇等溶媒进行超声10、30、40min等不同方法对供试品进行提取，经筛选以70%甲醇超声提取30min效果最好。

2.3 流动相的选择 实验中曾选用甲醇-水，甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相，甲醇-水峰型不好，甲醇-0.1%磷酸溶液对色谱柱适用性差。经多次实验选择乙腈-水（11∶89）为流动相效果最好。