喷雾干燥法制备盐酸千金藤碱微囊

张壮丽，王陆巡，赵 宁，赵志鸿，王桂芳，张小俊

(郑州大学医药科学研究院，河南郑州 450052)

盐酸千金藤碱 (Cepharantine Hydrochloride)是由防己科千金藤属植物地不容块根中提取分离出的单体生物碱—千金藤碱 (Cepharanthine)，经成盐制得的一种双苄基异喹啉类生物碱化合物。盐酸千金藤碱具有逆转肿瘤多药耐药性、抗氧化、抗炎、抑菌、镇痛、免疫调节、抗肺纤维化、抗肿瘤、升高白细胞等生物学活性［1-6］。盐酸千金藤碱目前仅注射剂一种剂型，剂型单一、给药途径单一、患者的顺应性较差。药物微囊化后可制备成多种终端剂型，如片剂、胶囊剂等，可增加给药途径，提高患者顺应性，从而提高其药用价值。喷雾干燥技术是药物微囊化的一个有效方法，具有操作简便、可控性好、成囊率高、产品分散等特点，是最具工业化应用价值的微囊化方法［7-9］。本实验采用喷雾干燥法，将盐酸千金藤碱进行微囊化，为盐酸千金藤碱的新剂型开发提供实验依据。

1 仪器与试药

实验型喷雾干燥机DC-1500(上海达程实验设备有限公司);高效液相色谱仪P680A(美国戴安公司);78-1磁力加热搅拌器 (金坛市华峰仪器有限公司);ABS135-S(METTLER TOLEDO);颗粒图像处理仪PIP8.1(欧美克仪器有限公司);超声波发生器CSF-1A(上海超声波仪器厂);DSC-60A型差示扫描量热仪 (日本岛津公司)。

盐酸千金藤碱 (自制，纯度＞98.5%);Eudragit S100(德国罗姆公司;上海云卓贸易有限公司赠送);甲醇 (色谱纯，赛默飞世尔科技);蒸馏水;其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制备方法 取处方量的Eudragit S100溶于100 mL 95%乙醇中制得4%的溶液，将盐酸千金藤碱溶于少量甲醇中，加入上述乙醇溶液中，加入适量甘油和蓖麻油，充分溶解后进行喷雾干燥。

2.2 色谱条件 Agilent TC-C18色谱柱 (250 mm×4.6mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-氨水(84∶16∶0.2);检测波长283 nm;体积流量0.5 mL/min;柱温为室温。

2.3 溶液的制备 取盐酸千金藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成约200 μg/mL的对照品溶液。取盐酸千金藤碱微囊约0.1 g，精密称定，于100 mL量瓶中，加甲醇适量超声1 h使其溶解，放至室温，加甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液;以空白微囊按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.4 方法学考察［10］

2.4.1 专属性试验 分别吸取“2.3”项下的对照品、供试品和阴性对照品溶液各20 μL进样，按“2.2”项色谱条件试验。供试品溶液色谱图中，有与对照品溶液保留时间相同的吸收峰，阴性对照溶液无此吸收峰。表明该法阴性无干扰，专属性强。

2.4.2 线性关系考察 精密称取盐酸千金藤碱对照品适量，用甲醇配成101 mg/mL贮备液，精密吸取1、5、10、20、30、40、50 μL进样，以峰面积为纵坐标、测定量 (μg)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为:Y=23.379X － 113.55，(r=0.9999)。结果表明:在盐酸千金藤碱0.101～5.05 μg间与峰面积有较好的线性关系。

2.4.3 加样回收试验 取已知含量的盐酸千金藤碱微囊，分别加入一定量的盐酸千金藤碱对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。测得低、中、高质量浓度的样品回收率分别为99.71%、100.94%、100.92%，RSD 分 别 为 2.23%、1.99%、1.88%(n=3)。

2.4.4 精密度和重复性试验 取同一对照品溶液，重复进样测定6次，计算RSD为0.38%。精密称取6份同一供试品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液进行测定，计算RSD为0.22%。表明方法的精密度和重复性良好。

2.4.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、6、12、24、36、48、72h时进样测定。计算RSD为2.21%(n=6)，表明盐酸千金藤碱溶液72 h内稳定。

2.5 包封率及载药量的测定 包封率 (%)=微囊中实际含药量/实际投药总量×100%;载药量(%)=微囊中实际含药量/微囊总重量×100%。按“2.3”项方法处理微囊，计算微囊包封率及载药量。

2.6 制备工艺考察

2.6.1 单因素考察 以包封率为评价指标，对Eudragit S100溶液浓度及其芯材比例进行单因素考察。当Eudragit S100的浓度分别为2%、3%、4%、5%(100mL乙醇中 Eudragit S100的质量浓度)，按“2.1”项方法所制得微囊的包封率分别为46.3%、59.8%、72.4%、65.1%。当Eudragit S100的用量为4%时所制得的微囊包封率最高，外观较好，呈干燥粉末状，显微镜下观察有大量微囊，大小较为均匀，故选定Eudragit S100的浓度为4%。选择芯材比1∶3、1∶4、1∶5，分别进行喷雾干燥，得到的微囊进行包封率检测，结果分别为59.47%、73.62%、66.16%，故选择芯材比为1∶4。

2.6.2 正交试验［11-12］在预实验的基础上，选择进风口温度 (A)、进液速度 (B)、喷雾压强 (C)进行考察，各因素均确定为三个水平，以包封率为考察指标，选用L9(34)正交表安排试验。因素水平见表1;结果及方差分析见表2、表3。

表1 正交试验因素水平Tab.1 Factors and levels

表2 正交试验结果Tab.2 Results of orthogonal design

表3 方差分析Tab.3 Results of variance analysis

方差分析结果显示，各因素影响微囊包封率的顺序是A＞B＞C，即进风口温度＞进样速度＞喷雾压强，其中A、B二因素影响显著。最佳工艺条件为A2B2C2，即进风口温度140℃，进样速度6 mL/min，喷雾压强0.2 MPa。

2.7 验证试验 按正交试验结果选定的最优喷雾干燥工艺进行3批验证试验。结果见表4。

表4 验证试验结果Tab.4 Results of verification test

由验证试验结果可知，3批样品的产率、载药量和包封率重复性较好，表明该处方和工艺可行，重现性良好。

2.8 形态及粒径分布 肉眼观测到的微囊为白色或乳白色粉末，呈疏松状，流动性较好。显微镜下观察，微囊外观圆整、表面光滑，无黏连，测得平均粒径为23.97 μm。见图1。

图1 微囊显微镜图片 (400×)Fig.1 Micrograph of microcapsules(400×)

2.9 差示扫描量热 (DSC)分析［13-14］分别取盐酸千金藤碱、空白微囊、盐酸千金藤碱与空白微囊物理混合物、盐酸千金藤碱微囊适量，均以空Al2O3为参比，在加热速率为10℃/min，加热范围为20～250℃，氮气体积流量40 mL/min的条件下，分别测得各样品的DSC曲线，以确定药物在微囊中的分散状态。结果见图2。

图2 DSC图谱Fig.2 Differential Scanning Calorimetry(DSC)curves

3 讨论

3.1 盐酸千金藤碱味苦，原有剂型单一，给药途径单一，微囊化后不但可以掩味，而且可制备成多种终端剂型，丰富其给药途径，提高患者的顺应性，方便临床使用。

3.2 本实验采用喷雾干燥法制备盐酸千金藤碱微囊，以正交试验法优选制备工艺，以微囊的收率、载药量、包封率为指标，进行验证试验，证实了工艺稳定可行;对所得微囊进行了形态、粒径和DSC考察，结果表明，优化的工艺适合盐酸千金藤碱微囊的制备，为日后盐酸千金藤碱新剂型的开发提供了实验参考。

3.3 喷雾干燥法制备微囊，对工艺参数的考察十分重要。因本实验中采用的喷雾干燥机其出风口温度自动与进风口温度匹配，因此，未考察出风口温度。

3.4 由DSC图谱可看出，盐酸千金藤碱、Eudragit S100自身的特征峰在微囊中均消失，产生了微囊新特征峰，说明盐酸千金藤碱与Eudragit S100不是简单的物理混合，而是以新的相互结合的状态存在，从而形成了微囊。

3.5 制备工艺中加入蓖麻油和甘油可起到良好的增塑作用，有效地减少黏壁和静电吸附现象。

3.6 前期对盐酸千金藤碱的溶解性考察发现，甲醇对盐酸千金藤碱的溶解性好于乙醇，因此，在制备方法中，盐酸千金藤碱先用少量甲醇溶解，再加入Eudragit S100的乙醇溶液中。

3.7 正交试验的预实验发现，包封率和产率基本呈现正相关的关系，载药量范围波动不大，因此，正交试验中采用包封率为主要考察指标。为了更为全面地考察优选工艺的重现性，在验证试验中分别考察了产率、载药量和包封率。

［1］彭有梅，王 宁，王亚峰，等.盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制［J］.药学学报，2012，47(5):594-599.

［2］马 方，张 艳，王 宁，等.盐酸千金藤碱对急性脂肪肝小鼠脂代谢及过氧化的影响［J］.中华中医药杂志，2011，26(6):1429-1432.

［3］王 晓，郑立运，赵志鸿，等.盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究［J］.时珍国医国药，2010，21(12):3109-3111.

［4］王晓丽，郑立运，张 艳，等.盐酸千金藤碱对急性肝损伤小鼠保护作用的研究［J］.中华中医药杂志，2009，24(10):1384-1387.

［5］吴冬梅，崔 英.盐酸千金藤碱对鼻咽癌SUNE-1细胞生长抑制的观察［J］.中华肿瘤防治杂志，2009，16(9):649-652.

［6］夏 薇，马 方，江金花，等.盐酸千金藤碱对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的治疗作用［J］.郑州大学学报:医学版，2007，42(3):494-496.

［7］房信胜，王建华，穆象山，等.丹参素微囊的喷雾干燥法制备及其体外释药的研究［J］.中草药，2009，40(11):1732-1735.

［8］沈 岚，徐德生，冯 怡.喷雾干燥技术制备微囊的研究进展［J］.中成药，2005，27(2):207-209.

［9］蔡鑫君，程巧鸳，赵 宁，等.喷雾干燥法制备川芎嗪壳聚糖微球的研究［J］.中草药，2008，39(5):679-681.

［10］董娟妮，闫高颖，杨 洋，等.HPLC法同时测定乐脉胶囊中9种成分［J］.中成药，2013，35(12):2644-2649.

［11］蒋益萍，张巧艳，张 宏，等.正交试验优选五味子木脂素类成分的提取工艺［J］.中成药，2013，35(11):2390-2394.

［12］杨振亚，卢丹逸，马志国.正交试验法优选沙苁蓉提取工艺［J］. 中成药，2014，36(1):177-179.

［13］吕慧侠，周建平，戴影秋，等.海藻酸钙掩味微囊的制备［J］.中国药科大学学报，2007，38(2):125-128.

［14］王 玮，金邻豫，白 颖，等.不同方法制备壳聚糖微囊形成机理初探［J］.河南大学学报:医学版，2010，29(4):253-257.