弥罗松酚胃漂浮片的制备

付英杰，王建安，侯 林，田景振*

(1.济宁医学院药学院，山东日照 276826;2.山东中医药大学药学院，山东济南 250355)

弥罗松酚 (Ferruginol，化学名称 (4bS，8aS)-4b，5，6，7，8，8a，9，10-八氢-4b，8，8-三甲基-2-(1-甲乙基)-3-菲酚，分子式 C20H30O，Mr为286.45)，又被称为铁锈醇、铁锈罗汉柏醇，母核为三环二萜松香烷。其提取或合成方法较多，如从松柏纲 (如罗汉松、侧柏叶、日本雪松、美国红杉、香榧)或唇形科 (如丹参、轮叶婆婆纳、三叶鼠尾草)的新鲜植株或粗提物中进行分馏提取［1］，利用植物细胞培养技术进行提取［2-3］，以脱氢松香胺为起始原料进行合成［4］等。弥罗松酚已被发现具有多种活性，如抗菌、保护心脏、抗氧化、抗疟原虫［5-6］、抗溃疡、保护由乙醇诱导的胃损害、改善胃黏膜抗氧化特性［7］、抗肿瘤［8］等，但在医药上的应用较少，目前仅在工业上被用作增香剂。

国内因酒精所致胃损伤的病例甚多，临床常用组胺受体拮抗剂、质子泵抑制剂或抗幽门螺旋杆菌药物。如替丁类药物往往具有苦味或不愉快的硫磺气味，且具有较大的副作用及不良反应。Areche［7］等研究了弥罗松酚的作用机制及毒性，其作用机制为:刺激前列腺素2(PGE2)的合成而加强胃壁的抗炎作用和维持还原型谷胱甘肽 (GSH)的水平而改善胃黏膜的抗氧化能力，此外还可促进胃液的分泌而升高胃液pH值及降低可滴定酸度，但对胃黏液分泌无影响。弥罗松酚安全性高 (口服急性毒性实验LD50＞3 g/kg)，来源广泛，气味患者易接受。但由于在胃内持续时间较短，且用量较小 (小鼠25 mg/kg)，因此制成能够持续在胃内释药的制剂较为合适，本实验拟将其制备成胃内漂浮片。

1 实验材料

1.1 仪器 电子天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司);天平 (上海精科天平厂)，单冲压片机(上海远东制药机械总厂);标准检验筛 (浙江省上虞市沪江仪器沙筛厂);UV-754紫外分光光度计(上海精密科技仪器有限公司);FW100型高速万能粉碎机 (天津市泰斯特仪器有限公司);YD-1片剂硬度测试仪 (天津创兴电子设备制造有限公司);电热温度控制干燥箱 (上海申光仪器仪表有限公司)。

1.2 试剂 弥罗松酚 (纯度95.7%，实验室自制)。II号丙烯酸树脂 (Eudragit II，连云港万泰医药材料有限公司，20110108);微晶纤维素(MCC，浙江中维药业有限公司，20071124);十八醇 (广州越迪化工有限公司，20110415);硬脂酸 (SA，天津市恒兴化学试剂制造有限公司，20101008);羟丙甲纤维素 (HPMCK4M，山东阳谷江北化工有限公司，20100826);硬脂酸镁(MS，诸暨市三合化工工贸有限公司，20090321);其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 弥罗松酚测定方法

2.1.1 对照品溶液的配制 精密量取槲皮素对照品溶液 (154.6 μg/mL)1 mL于25 mL量瓶中，加80%乙醇定容。制成每1 mL含槲皮素6.184 μg的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的配制 取弥罗松酚 (自制)20 mg，精密称定，置1000 mL量瓶中，加80%乙醇适量溶解并稀释至刻度。

2.1.3 显色剂的配制 为0.1 mol/LFeCl3-0.008 mol/L K3［Fe(CN)6］(1∶1)的混合溶液，临用前现配。

2.1.4 测定波长的确定 精密量取对照品溶液和供试品溶液各1.0 mL，置10 mL量瓶中，加入显色剂0.8 mL，暗处放置5 min，加0.1 mol/L的HCl至刻度，暗处放置30 min。以蒸馏水为空白，于200～800 nm波长范围内扫描，结果样品和对照品在相同波长处有最大吸收，最大吸收波长为755 nm。

2.1.5 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置于10 mL量瓶中，加入显色剂0.8 mL，暗处放置5 min，加0.1 mol/L的HCl至刻度，暗处放置30 min。以蒸馏水为空白，在755 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，质量浓度 (μg/mL)为横坐标，绘得标准曲线为 A=0.0334C+1.0413，r=0.9992。所得标准曲线在0.618μg/mL～3.710 μg/mL范围内线性关系良好。

2.1.6 含量测定方法学考察

2.1.6.1 精密度实验 精密量取供试品溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加入显色剂0.8 mL，暗处放置5 min，加0.1 mol/L的HCl至刻度，暗处放置30 min。以蒸馏水为空白，在755 nm波长处测定吸光度。连续5次测定同一供试品，结果RSD为1.53%，表明方法精密度良好。

2.1.6.2 稳定性实验 精密量取供试品溶液1.0 mL，按“2.1.6.1”项下操作，分别于显色后15、30、45、60、90、120、150、180 min 测定，结果在120 min内RSD为2.58%。120 min后吸光度不稳定，表明在2 h内方法稳定性良好。

2.1.6.3 重复性实验 精密量取5份供试品溶液各1.0 mL，分别按“2.1.6.1”项下操作，测定吸光度。结果RSD为2.86%，表明方法重复性良好。

2.1.6.4 加样回收率实验 精密量取9份供试品溶液 (总酚含量19.14 μg/mL)各1.0 mL，分为3组，每组分别加入槲皮素对照品溶液 (6.182 μg/mL)1.6、2.0、2.4 mL，按 “2.1.6.1”项下操作，测定吸光度，计算回收率。结果回收率为98.57%，RSD为3.04%。

2.2 休止角的测定 制备胃漂浮制剂时常用到的辅料有 HPMC、Eudragit、SA、十八醇、MCC等，设计表1中8个处方进行辅料筛选。首先将原辅料过80目筛混匀，加入硬脂酸镁，充分混匀，测定休止角，结果见表1。8个处方的粉末流动性均较好，可采用直接粉末压片的制备工艺。

2.3 片剂的制备方法 按处方量称取各组分，分别粉碎，过80目筛，充分混合后加入硬脂酸镁，混匀。使用单冲压片机浅凹冲模干法直接压片，控制片重1 g，压力4 kg/cm2，得外观白色片剂。

2.4 片剂漂浮性能测定 以体外释放度和体外漂浮性为指标，进一步进行处方筛选。将8个处方片剂各取50片，分别放入900 mL的0.1 mol/LHCl中，观察起漂情况、8 h后漂浮片数及最大持漂时间，结果见表1。

2.5 片剂释放性能测定 采用《中国药典》2010年版二部附录X D释放度测定法第一法［10］，用转篮法测定8组处方所制备片剂 (每组6片)的体外释放度。方法:释放介质为0.1 mol/L HCl 900 mL，转速为100 r/min，温度为37℃，每隔0.5 h取样1次，每次1 mL，所取样品经0.45 μm微孔滤膜过滤，并及时在操作容器中补充相同介质1 mL，自取样至滤过在30 s内完成。滤液置10 mL量瓶中，加入显色剂0.8 mL，暗处放置5 min，加0.1 mol/L的 HCl至刻度，暗处放置30 min，于755 nm波长下测定吸光度。由标准曲线计算不同时间的药物浓度和累积释放度，并换算为累计释放率。结果见表2。

2.6 实验结果

表1 片剂处方及漂浮性能考察Tab.1 Prescription of tablet and investigation of tablet floating performance

表2 片剂累计释放率考察 (%)Tab.2 Investigation of tablet cumulative release rate(%)

2.7 结果分析

2.7.1 处方1和2采用HPMC为胃漂浮材料，HPMC量越高，起漂时间显著延长。在考察中初期缓释性能较好，但多数片剂在1.5 h后出现裂口现象，片型逐渐破碎，药物迅速释放，漂浮时间较短。

2.7.2 处方3和4采用EudragitⅡ为胃漂浮材料，结果由EudragitⅡ制得漂浮片的起漂时间极短，但由于不使用HPMC，凝胶骨架不能形成，其缓释性能差，溶蚀速度快，2 h内药物基本全部释放，且多数片剂发生变形，因而漂浮片数少，但发现最大漂浮时间较长;同时含有硬脂酸处方 (9 h)的漂浮时间较十八醇 (7.5 h)长，且十八醇在压片过程中容易出现粘冲，因而不宜选用十八醇作为助漂剂。

2.7.3 综合上述因素考虑，在处方5、6、7、8中同时加入HPMC和EudragitⅡ，并相应调整了其他辅料的比例。结果起漂时间均在60 s以下，其中处方5加入HPMC量为20%，凝胶骨架形成时间较慢，漂浮及缓释性能有一定改善，但片剂5 h后开始破碎，药物迅速释放;处方6、7漂浮性能和缓释性能均较好，其中7为优选处方。处方8加入HPMC量为50%，释放性能较好，但6 h后多数片剂开始沉没，漂浮性能较差。

2.7.4 处方7漂浮片2 h平均累积释放度为19%，药物没有出现有突释现象;6 h累积释放度为64.19%，且释药速率出现减慢趋势。10 h累积释放度大于90%，符合2010版中国药典二部附录XIX D缓释制剂指导原则［11］。

2.7.5 按照《中国药典》2010年版二部附录XIX D的要求对处方7漂浮片释放数据用以下方程进行拟合:Higuchi方程:Q=kt1/2，一级方程:ln(1-Q)=-kt，零级方程:Q=kt，Ritger-peppas方程:Q=ktn(Q为t时间的累计释放率)。结果显示，采用Ritger-peppas方程拟合相关系数最高，方程为:lnQ=1.0617lnt+2.2085，R=0.9980，线性相关显著。释放参数n＞0.89，表明片剂主要以骨架溶蚀机制进行释放。

2.8 制剂工艺 本实验以HPMC和EudragitⅡ作为骨架，以MCC作为赋形剂，以SA作为助漂剂，制备胃内漂浮片，通过体外释放度和体外漂浮性考察，最终确定最佳处方为:弥罗松酚20 g，羟丙甲纤维素400 g，丙烯酸树脂Ⅱ号200 g，微晶纤维素126 g，硬脂酸250 g，硬脂酸镁4 g，共计1000 g，制成片剂1000片。

制备工艺 称取原料与辅料，过80目筛混匀，再加入硬脂酸镁，充分混匀后，直接粉末压片，片重1 g，压力4 kg/cm2。每片含药量为20 mg。按照文献［7］对小鼠的有效剂量换算，成人用量为每日125 mg，即每次2片，一日3次。

2.9 工艺验证实验 按“2.8”项下工艺制备3批片剂，并考察其释放度及漂浮性，结果见表3。

表3 3批片剂验证性考察Tab.3 Confirmatory research on 3 batches of tablets

结果表明，3批漂浮片的漂浮性能和释放性能较为稳定:无突释现象，持漂时间均在9 h以上，10 h累积释放度大于95%。符合《中国药典》2010版二部附录XIX D缓释制剂指导原则所规定“释药全过程时间不应低于给药间隔时间 (该片剂每日给药3次，即不低于8 h)、累计释放百分率要求达到90%以上”的要求。

3 小结与讨论

3.1 弥罗松酚 (Ferruginol)与目前上市的多数胃保护剂作用机理不同，它可增加PGE2的分泌，维持GSH的水平，具有一定的制酸效果，特别是对乙醇诱导的胃损害显示强保护活性。另外，由于其安全性高，使用范围广，因此具有一定的开发价值。Ferruginol直接灌胃胃溃疡小鼠有效，但由于在胃内保持时间较短，且用量较轻 (对于小鼠为25 mg/kg，折合成人用量为125 mg/d)，因此制成能够持续在胃内释药的制剂较为合适。

3.2 本实验以HPMC作为亲水凝胶骨架材料，EudragitⅡ作为不溶性骨架材料，以MCC作为填充剂，以SA作为助漂剂，可延长弥罗松酚在胃内漂浮时间，使其缓慢释放。弥罗松酚的水溶性较低，结合释药方程分析，其缓释机制为药物通过HPMC凝胶层的逐步溶蚀，加之EudragitⅡ的不溶性骨架，使药物扩散速度进一步减缓，且能在胃中长时间保持完整形状。SA为助漂剂，比重小且具有较大的疏水性，可降低骨架的水化速度。HPMC和EudragitⅡ联合使用制备得到的胃漂浮片，漂浮片数同比明显增多，漂浮时间得到延长。根据体外释放度和体外漂浮性实验确定最终处方为:Ferruginol∶HPMC ∶EudragitⅡ∶SA ∶MCC ∶MS(2 ∶40∶20∶25∶12.6∶0.4)。

3.3 除处方因素外，制片时的压力是影响体外漂浮性能的重要因素，为获得性质均一，稳定的制剂必须注意压片时的压力。经过实验，当压力控制在1～3 kg/cm2时所得片剂易碎。当压力控制在5～6 kg/cm2时，片剂漂浮性不好。最终压片压力控制在4 kg/cm2。

3.4 弥罗松酚的含量测定可选用气相色谱法。由于在此片剂中主药的纯度高，且实验目的为工艺优选，因此本实验采用更为简单的总酚含量测定法。

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