陈皮饮片的质量控制

张科卫，陈文星，薛丹丹

(南京中医药大学，江苏南京 210023)

陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulate Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮。药材分“陈皮”与“广陈皮”。产地加工时，采摘成熟果实，剥取果皮，晒干或低温干燥，即为陈皮药材。临床上以饮片入药，将陈皮药材除去杂质，喷淋水，润透，切丝，干燥。即为陈皮饮片。

陈皮饮片苦、辛、温，归肺、脾经。具有理气健脾、燥湿化痰之功，临床上主要用于腕腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多等症［1］。

陈皮中主要含有挥发油及黄酮类成分，其中黄酮类成分是目前已知的具有广泛的药理作用的一类物质。研究表明，陈皮中含有的黄酮类成分具有抗氧化、清除自由基［2-3］、抗炎［4］、抗癌［5-6］、预防心血管疾病［7］、抗诱变［8］等多种生理活性。

由于陈皮中所含有的黄酮类成分在柑橘属植物中广泛存在，且目前市场上陈皮来源广泛，产地和来源不同，其中所含有的黄酮类成分差异显著。《中国药典》2010年版中仅以橙皮苷作为指标来对陈皮饮片的质量进行控制，这对全面评价陈皮的质量显得有点欠缺。

经市场调研，发现目前南京市场上的陈皮饮片主要是以“陈皮”为主，“广陈皮”很少。因此，本次实验，以南京市场上收集到的陈皮饮片为研究对象，对其中的几种黄酮类成分进行了测定。旨在为陈皮饮片的质量控制做一些有益的探索。

1 仪器、药品与试剂

Waters e2695型高效液相色谱仪，2998PDA检测器，Millennium 32色谱管理系统;Sartorius BP211D型电子天平。

橙皮苷对照品 (批号 110721-201115)，购自中国食品药品检定研究院;芸香柚皮苷 (批号120319)、甜橙黄酮 (批号100914)、川陈皮素(批号110902)、橘皮素 (批号120524)，均购自四川维克奇生物科技有限公司。所有对照品均经HPLC检测为单一成分，纯度达到98%以上。

陈皮饮片10批，购自南京各大药店及中医门诊部，均经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授鉴定分别为芸香科植物橘Citrus reticulate Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮经炮制加工而成。

乙腈为HPLC级，水为亚沸蒸馏水 (自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Agilent TC-C18(2)色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为乙腈 (A)-水(B)，梯度洗脱 (0～13 min，20% ～35%A;13～16 min，35% ～50%A;16～30 min，50%A;30～34 min，50% ～62%A;34～35 min，62% ～100%A;35～37 min，100% ～20%A;37～50 min，20%A)。体积流量1.0 mL/min;柱温30℃。

2.2 测定波长的选择 经220～375 nm扫描发现，几种黄酮类成分的最大吸收波长不同。芸香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素的最大吸收波长分别为 283.0、284.2、330.7、334.3、324.7 nm。于是选择在283 nm处测定芸香柚皮苷和橙皮苷，在331 nm处测定甜橙黄酮和川陈皮素，在324 nm处测定橘皮素。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至恒重的芸香柚皮苷299.80 mg、橙皮苷1.9888 g、甜橙黄酮1.58 mg、川陈皮素10.08 mg、橘皮素3.98 mg置于同一100 mL的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得对照品贮备液。

2.3.2 供试品溶液的制备 称取陈皮饮片粉末(过四号筛)0.1 g，精密称定，精密加入甲醇10 mL，超声处理 (功率250 W，频率50 kHz)30 min，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 系统适应性试验 取供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪测试，芸香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素和橘皮素的保留时间分别为9.4、10.5、22.1、24.4、27.9 min。理论塔板数以次橙皮苷计不低于5000，所有对照品所对应的色谱峰与相邻色谱峰的分离度均不低于1.5。见图1。

图1 不同检测波长下的混合对照品及样品 (广西产，批号130111)的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of mixed reference substances and sample(from Guangxi region，Lot 130111)of various detected wavelengths

2.5 标准曲线的制备 精密吸取上述对照品贮备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得混合对照品溶液系列 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)，取10 μL进样，测定。以峰面积为纵坐标，对照品质量浓度(μg/mL)为横坐标，进行线性回归，得各组分的回归方程及相关系数，见表1。可见该方法在试验范围内线性关系良好。

表1 各组分线性关系测定结果Tab.1 Calibration data

2.6 精密度试验 精密吸取“2.5”项下的对照品溶液Ⅲ10 μL进样，重复6次，以峰面积计算RSD，结果芸香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素，橘皮素RSD分别为1.4%、1.8%、1.9%、1.2%和2.0%。

2.7 重复性试验 取同一产地的陈皮饮片粉末(广西产，批号130111，过四号筛)6份，分别制成供试品溶液，测定，计算。结果芸香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素，橘皮素RSD分别为1.6%、1.3%、1.6%、1.4%和1.7%。

2.8 稳定性试验 精密吸取新配制的供试品溶液(广西产，批号130111)，每隔2 h取10 μL进样测定，结果芸香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素，橘皮素 RSD分别为1.6%、1.8%、1.0%、1.0%和1.7%。表明供试品溶液在12 h内保持稳定。

2.9 加样回收率试验 配制含芸香柚皮苷113.80 μg/mL、橙皮苷 799.80 mg/mL、甜橙黄酮 0.64 μg/mL、 川 陈 皮 素 3.80 μg/mL、 橘 皮 素1.50 μg/mL的混合对照品溶液，作为加样回收对照品溶液。称取陈皮饮片粉末 (广西产，批号130111，过四号筛)0.05 g，共6份，分别精密加入上述混合对照品溶液5.0 mL，照“2.3.2”项下供试品溶液制备方法制成加样回收样品液，测定，计算平均加样回收率，结果芸香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素，橘皮素平均加样回收率分别为 99.91%、99.59%、100.22%、99.85% 和99.71%，RSD分别为 1.3%、1.2%、1.3%、1.3%和1.5%。

2.10 样品测定 取南京市场上收购到的陈皮饮片10批，照“2.2.2”项下操作，制成供试品溶液，取10 μL进样，以外标法计算，每个批号平行3份，每份进样2次。结果见表2。

表2 样品测定结果 (n=6)Tab.2 Determination of flavonoids in samples from different growing regions in China(n=6)

3 讨论

3.1 陈皮饮片中的黄酮类成分比较多，从已有文献看，有一些学者已经尝试着对其中的几个成分进行了测定。郑国栋对“广陈皮”进行研究时，以283、330 nm两个波长对其中的橙皮苷、川陈皮素、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黄酮、橘皮素、5-羟基-6，7，8，3’，4’-五甲氧基黄酮进行了检测［9］;封宇飞在研究陈皮时，以300 nm为检测波长对其中的柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黄酮、红橘素进行测定［10］;肖建春研究陈皮时，以283 nm为检测波长，对其中的橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素、橘红素进行检测［11］。这些实验对陈皮的质控方法进行了有益的探索，但选择的测定波长并不是其中某些成分的最大吸收。本实验对目前南京市场上常见的“陈皮”饮片进行研究，有针对性地对其中具有明显生理活性的几个黄酮类成分进行研究，在摸清其最大吸收波长的基础上，采用PDA检测器逐个进行定量分析。测定结果的重复性和稳定性都比较高。

3.2 这次收集到的主要是浙江和江西的饮片，只有一个批次的饮片来自于广西。从实验结果看，其中所含的橙皮苷量均大于6.0%，远远高于《中国药典》2010年版所规定的不低于2.5%的标准［1］，也高于以往文献记载的“广陈皮”中橙皮苷量［9］;芸香柚皮苷的量也明显高于以往文献记载的“陈皮”中的量［10］，差不多高了一倍左右;川陈皮素的量低于“广陈皮”［9］，但与以往文献记载的“陈皮”中量相一致［10］;橘皮素量低于以往文献的记载［10］。甜橙黄酮的量为本实验首次测定，结果发现收集到的南京市场上陈皮饮片中所含的甜橙黄酮量非常低。

3.3 本实验测定的均为陈皮中具有生理活性的黄酮类成分，且以多甲氧基黄酮为主，此次测定的5种黄酮成分中，除芸香柚皮苷外，其余4种均为甲氧基黄酮类物质。近年来研究表明，陈皮中的多甲氧基黄酮类成分显著抗肿瘤活性［12-13］，其中川陈皮素在体外试验中表现出很强的抗肿瘤活性，能对抗多种肿瘤细胞的增殖［14-15］，还能有效刺激小鼠气管黏膜下腺液体分泌速度［16］。

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