覆盆子活性部位化学成分的分离与鉴定△

刘文琴，龚嘉华，王燕霞，练波，黄丽萍，谢一辉

(江西中医药大学，江西 南昌 330006)

国家自然科学基金(30960496)

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谢一辉，教授，硕士生导师，研究方向：中药活性成分分析，E-mail：243619851@qq.com；

黄丽萍，教授，硕士生导师，研究方向：中药药理学，E-mail：jxnchlp@163.com

覆盆子活性部位化学成分的分离与鉴定△

刘文琴，龚嘉华，王燕霞，练波，黄丽萍*，谢一辉*

(江西中医药大学，江西 南昌 330006)

目的分离鉴定覆盆子活性部位的化学成分。方法利用各种色谱技术进行分离，根据化合物的光谱数据(IR，MS，1H-NMR，13C-NMR)和物理化学方法鉴定其结构。结果分离并鉴定了6个化合物，分别为β-谷甾醇(1)，十六烷酸(2)，棕榈油酸(3)，β-谷甾醇棕榈油酸酯(4)，蔷薇酸(5)，山柰酚(6)。结论其中棕榈油酸和β-谷甾醇棕榈油酸酯为首次从覆盆子中得到。

覆盆子；化学成分

覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子RubuschingiiHu的干燥果实，性温，味酸、甘，归肝、肾、膀胱经。具有益肾固精缩尿，养肝明目的功能，用于遗精滑精，遗尿尿频，阳痿早泄，目暗昏花[1]。许多抗衰老古方中均含有覆盆子[2]。近年来有关药理研究表明覆盆子具有抗诱变[3]、提高免疫[4]、延缓衰老、改善学习记忆能力等作用。本课题组在前期进行的药效实验表明，覆盆子具有较强的改善肾阳虚型衰老动物学习记忆的作用，其中三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的活性较强。为了进一步探索覆盆子的活性成分，本课题从三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位分离出8个化合物，鉴定了其中6个化合物，分别为β-谷甾醇(β-sitosterol，1)，十六烷酸(Sixteen Carbinate，2)，棕榈油酸(Gaidic acid，3)，β-谷甾醇棕榈油酸酯(β-Sitosterol gaidic acid ester，4)，蔷薇酸(Euscaphic acid，5)，山柰酚(Kaempferol，6)。药效实验证实，3～6为覆盆子防治老年痴呆的活性成分。

1 仪器与试药

1.1 仪器

INOVA-500型核磁共振仪(内标TMS)，VGZAB-HS型质谱仪，X4型显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司)，IR红外，DU-650紫外可见光谱仪(美国贝克曼公司)。

1.2 试药

硅胶(青岛海洋化工厂)，聚酰胺(浙江台州路桥四甲生化塑料厂)，SephadexLH-20凝胶(Pharmacia公司)，其他试剂均为分析纯。覆盆子药材购于樟树，经江西中医药大学刘庆华老师鉴定为悬钩子属植物华东覆盆子RubuschingiiHu的果实。

2 提取与分离

覆盆子药材粉碎后，用80%乙醇渗漉，直至药液基本无色，回收乙醇得浸膏。浸膏用水混悬，分别用三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。

2.1 三氯甲烷部分的分离与精制

取三氯甲烷部分上硅胶柱，三氯甲烷-甲酸乙酯梯度洗脱。用紫外检测器监测流出峰，每个峰为1个流分，共收集洗脱液40个流分。浓缩各流分，用TLC比较，合并相似组分。流分18～22回收溶剂后重结晶得化合物1。流分6～17回收溶剂后，再用硅胶柱细分，三氯甲烷-甲酸乙酯梯度洗脱得化合物2。流分23～26回收溶剂后，再用硅胶柱细分，甲苯-甲酸乙酯梯度洗脱，分别得化合物3、化合物4。

2.2 乙酸乙酯部分的分离与精制

取乙酸乙酯部分上硅胶柱，分别用三氯甲烷-甲酸乙酯梯度和甲酸乙酯-丙酮梯度洗脱。用紫外检测器监测流出峰，每个峰为1个流分，共收集洗脱液30份。浓缩各流分，用TLC比较，合并相似组分。流分17～27回收溶剂后，再用C18柱细分，甲醇-水梯度洗脱，流分3～4回收溶剂后得化合物5，流分6～8再过SephadexLH-20凝胶柱20%甲醇-水洗脱得化合物6。

3 结构鉴定

化合物1：白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp 136～138 ℃，Liebermann-Burchard 反应显绿色，Molish反应阴性，表示有甾类化合物。将化合物与已知对照品混合，测熔点不下降，经已知对照品共薄层，在3种溶剂系统下展开，Rf值一致。13C-NMR所得数据与文献[5-6]中报道β-谷甾醇基本一致。所以化合物1鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物2：白色粉末(三氯甲烷)，mp 68～70 ℃。易溶于三氯甲烷、乙醚，微溶于甲醇。从1H-NMR可看出，1个活泼氢δ 11.95，1个甲基δ 0.84，14个亚甲基1.22和δ 2.16。13C-NMR显示16个碳信号，δ 179.803为羧基，δ 14.143为甲基，其他碳信号依次为34.046，31.966，29.732，29.721，29.706，29.693，29.628，29.267，29.397，29.277，29.105，24.727，22.728。将其13C-NMR的数据与文献报道的十六烷酸数据一致[7]。因此化合物2为十六烷酸(Exadecanioc acid)。

化合物3：白色无定型粉末(三氯甲烷)，mp 45～47 ℃。可溶于乙醚、三氯甲烷、乙酸乙酯，微溶于甲醇。从1H-NMR可以看出，3个活泼氢，1个甲基，12个亚甲基。将其13C-NMR的数据跟十六烷酸比较，除显示有双键外，其他基本一致。IR 1 660 cm-1显示有烯烃双键峰，IR 650 cm-1显示有烯氢。将该物质的碳谱数据与油酸(十八碳-顺-9-烯酸)的碳谱数据比较，除少了2个碳信号外，其他信号皆一致。综上所述，推断化合物3为棕榈油酸(Gadic acid)，为首次从覆盆子中得到。

化合物4：为白色无定型粉末(三氯甲烷)，mp 52～54 ℃。易溶于三氯甲烷、乙醚，微溶于甲醇，乙酸乙酯，不溶于丙酮。Liebermann-Burchard反应显阳性，Molish反应阴性，表示有甾类化合物。IR 1 738 cm-1处显示有酯基，推断该物质为酯类。碳谱数据显示有45个碳原子，分别为179.87，34.17，29.88，29.47，29.58，29.66，29.66，32.15，130.23，129.94，32.15，29.82，29.88，29.82，24.79，14.34，140.9，121.97，72.10，56.99，56.28，50.35，46.06，42.54，42.37，40.00，37.46，36.72，36.37，34.26，32.13，29.92，29.88，29.82，28.47，26.30，24.79，24.79，22.91，21.31，19.61，19.26，19.00，14.34，12.08。该化合物碳谱信息为β-谷甾醇和棕榈油酸碳谱信息的叠加。所以推断化合物4为β-谷甾醇与棕榈油酸所成的酯，即β-谷甾醇棕榈油酸酯(β-Sitosterol gaidic acid ester)，为首次从覆盆子中得到。该化合物的结构如图1所示。

图1 β-谷甾醇棕榈油酸酯化学结构

化合物5：为黄色粉末(甲醇)，mp 275～277 ℃。可溶于甲醇，盐酸镁粉反应阳性，示为黄酮类化合物：三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，示有酚羟基存在。该物质在甲醇溶液中的紫外最大吸收波长λmax为：209，254(带II)，373(带I)。根据带I波长位置，提示可能为黄酮醇类物质。加入诊断剂AlCl3/HCl后带I红移56 nm提示有3位和5位羟基。将化合物与已知对照品混合，测熔点不下降，经已知对照品共薄层，在3种溶剂系统下展开，Rf值一致。1H-NMR和13C-NMR所得数据与文献报道的山柰酚数据基本一致[8]。所以推断化合物5为山柰酚(KaemPefrol)。

化合物6：为白色无定型粉末(甲醇)，mp 268～270 ℃。可溶于吡啶、三氯甲烷-甲醇、丙酮。在预制硅胶G板上点样展开，30%硫酸加热后显红色。1H-NMR、13C-NMR数据与文献报道的蔷薇酸一致[9-10]，数据如下：41.75，65.49，78.74，38.18，48.15，17.99，32.91，39.98，47.02，38.06，23.47，127.39，139.34，42.27，28.63，26.311，47.66，53.98，72.08，41.57，26.33，37.88，28.83，22.261，16.831，16.66，24.02，180.04，26.47，16.02。故推断化合物6为蔷薇酸(Euscaphic acid)。

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IsolationandIdentificationofChemicalConstituentsfromtheActiveSiteofRubuschingiiHu

LIUWenqin，GONGJiahua，WANGYanxia，LIANBo，HUANGLiping*，XIEYihui*

(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang33004，China)

Objective：To isolate and identify the active chemical constituents ofRubuschingiiHu.MethodsVarious chromatographic techniques were used to isolate the chemical constituents，and their structures were identified by IR，MS，1HNMR，13CNMR，physical and chemical method.ResultsSix compouds were islolated fromR.chingiiand their structures were identified asβ-sitosterol(1)，Sixteen carbinate(2)，Gaidic acid(3)，β-Sitosterol gaidic acid ester(4)，Euscaphic acid(5)，Kaempferol(6).ConclusionCompound3and6were isolated fromR.chingiifor the first time。

Raspherry；RubuschingiiHu；Chemical constituents

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.006

2013-11-02)