HPLC-CAD法测定棕榈酸中的有关物质

李 琴 胡春勇 陈刚胜 李孝壁 马平平

江苏豪森药业股份有限公司，江苏连云港 222069

HPLC-CAD法测定棕榈酸中的有关物质

李 琴 胡春勇 陈刚胜 李孝壁 马平平

江苏豪森药业股份有限公司，江苏连云港 222069

目的建立了一种高效液相色谱电雾检测器法（HPLC-CAD）测定棕榈酸中有关物质的方法。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱Phenomenex Gemini C18（150mm×4.6mm，3.5μm）；进行梯度洗脱，流速为0.8mL/min，柱温为35℃，电雾检测器（CAD），雾化器温度15℃，气体压力35.0psi。结果在0.44～22.0μg/mL范围线性关系良好，相关系数r＞0.990（n=6），重复性试验的RSD＜2.0%（n=6），回收率为95.1%～98.3%，RSD为1.7%～3.1%（n=9）。结论本方法测定简单、准确、重现性好，可用于测定棕榈酸中的有关物质。

高效液相色谱；电雾检测器；棕榈酸 ；有关物质

棕榈酸（palmitic acid），又称软脂酸、十六（烷）酸，是一种饱和高级脂肪酸，以甘油脂的形式普遍存在于动植物油脂中，在自然界中分布广泛。目前随着药物的不断发展，棕榈酸被大量用到药品生产上，用来和其他活性药物结合并制成制剂，比如棕榈酸帕利哌酮长效注射剂、维生素A棕榈酸酯眼用凝胶、盐酸克林霉素棕榈酸酯分散片等，因此对棕榈酸的质量控制[1-2]是否有效直接关系到人们的用药是否安全、可靠。

由于棕榈酸没有紫外吸收，不能通过常规的高效液相色谱-紫外检测法进行检测，同时由于制备的特殊性，棕榈酸中无法避免的会有少量的十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸等长链烷酸，棕榈酸的有关物质检测一直是药物分析领域的一个难点。传统方法采用衍生化法，利用气相FID进行检查[3-4]，操作比较麻烦、而且准确度差，对棕榈酸的同系物检测有很大的缺陷。

电雾式检测器（CAD）又称荷电气溶胶检测器，它基于独特的新型设计原理[5-6]，HPLC洗脱液经雾化器中氮气的作用而雾化，其中分析物液滴在室温下干燥形成溶质颗粒。同时用于载气的氮气经过电晕式装置（含高压铂金丝电极）形成带正电荷的氮气颗粒，与溶质颗粒反向相遇时经碰撞使溶质颗粒带上正电，最后用一个高灵敏度的静电检测器测出带电溶质的信号电流，由此产生的信号电流与溶质分析物质的含量呈正比。该检测器解决了其他检测器设计原理的一些局限性[7-10]，他的检测技术完全不依赖化合物的分子结构，达到了通用目的，能对大多数化合物提供一致响应性，同时能达到较高的灵敏度和最低检出限，很容易检测到纳克数量级的化合物，并且与液相色谱分离手段联用，其重现性、稳定性很好，对于大部分非挥发性或半挥发性有机物能做到准确的定量分析或半定量分析。因此选择该检测器和液相联用来检测棕榈酸中可能含有的长链烷酸等有关物质[11-12]。

1 仪器与试剂

仪器：电子分析天平，梅特勒XS205；美国Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪（DGP-3600泵，WPS-3000TSL自动进样器，TCC-3000SD柱温箱），Corona Ultra CAD电雾检测器；CHROMELEON 6.8色谱数据处理系统，美国Thermo公司生产；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱Phenomenex Gemini C18（150mm×4.6mm，3.5μm）。

试剂：醋酸为分析纯，国药集团化学试剂股份有限公司生产（批号：10000218）；纯化水，由江苏豪森药业股份有限公司生产；乙腈（批号：I735830418）为色谱纯，由德国merk公司生产；四氢呋喃（批号：10071761）为色谱纯，美国Burdick&Jackson公司生产。

2 试验过程与结果

2.1 色谱条件

照高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱Phenomenex Gemini C18（150mm×4.6mm，3.5μm）；以40mmol/L醋酸溶液为流动相A，乙腈-四氢呋喃（95:5）为流动相B；进行梯度洗脱，流速为0.8mL/min；CAD电雾检测器条件：雾化器温度15℃，气体（氮气）压力为35.0psi，数据采集速率5Hz；进样量为20μL；色谱柱柱温35℃。

表1 流动相梯度程序

2.2 专属性试验

将十四烷酸、十五烷酸、棕榈酸（十六烷酸）、十七烷酸、十八烷酸等，用乙腈溶解并定量稀释制成每1mL约含0.1mg的混合溶液，进入液相色谱仪，各物质的分离情况见表2，专属性图见图1。从表和图中可以看出各杂质与棕榈酸分离良好，说明该方法的专属性良好。

2.3 定量限与检测限

在上述色谱条件下，分别精密称取十四烷酸、十五烷酸、棕榈酸（十六烷酸）、十七烷酸、十八烷酸少许，置量瓶中，用乙腈溶解，制成储备液。逐步稀释储备液，分别进样至信噪比（峰高／基线噪声3±1为检测限，至信噪比10±2为定量限，试验结果见表3。

表2 方法专属性

图1 方法专属性色谱图

2.4 线性关系试验

按照标准限度浓度配制线性关系试验溶液，十四烷酸在0.19～9.5μg/mL、十五烷酸在0.17～8.5μg/mL、棕榈酸在0.44～22.0μg/mL十七烷酸在0.22～11.0μg/mL、十八烷酸在0.20～10.0μg/mL范围内测定结果线性相关系数皆大于0.990，说明本方法线性良好，线性方程及相关系数见表4。

表4 回归方程及相关系数

表5 重复性

2.5 重复性

精密称取十四烷酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、十八烷酸适量，用乙腈溶解并定量稀释制成每1mL约含十四烷酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、十八烷酸各1μg的溶液，作为供试品溶液。按上述色谱条件，连续六针进样，记录色谱图，计算峰面积的相对标准偏差RSD，结果见表5。

由表可见，各组分峰面积的RSD＜2.0%，表明方法的重复性良好。

2.6 回收率测定

精密称取十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸各约25mg，置50mL量瓶中，用乙腈溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为杂质储备溶液（25μg/mL）。以各烷酸的含量限度（0.1%）的浓度为基准100%，分别精密量取上述储备溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、置25mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，分别配制成限度为50%、100%和150%的溶液各三份，作为供试品溶液。另精密称取十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸适量，用乙腈溶解并定量稀释制成每1mL各约含1μg的溶液，作为对照品溶液。分别精密量取上述供试品溶液和对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测量峰面积，采用外标法计算回收率，十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸的平均回收率分别为95.1%、98.3%，96.9%，97.4%，RSD分别为2.3%、1.7%、2.7%、3.1%（n=9），表明该方法检测棕榈酸中可能含有的其他同系物含量准确、可靠。

3 讨论

棕榈酸传统方法采用衍生化法，利用气相FID进行检查，操作比较麻烦、而且准确度差，灵明度底，尤其对棕榈酸的同系物检测有很大的缺陷，本文所建立的方法解决了棕榈酸中同系物杂质测定的难点，由于CAD电雾检测器不检测原理不依赖于化合物的分子结构，并且能检测分析大范围化学结构和种类，可以实际应用于绝大多数非挥发性或半挥发性化合物。

本文利用新型CAD电雾检测器，建立了棕榈酸有关物质的测定方法，并通过对的十四烷酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、十八烷酸等棕榈酸同系物的专属性考察，充分说明了该方法有良好的专属性和灵敏度，且系统比较稳定，操作方便、简单。

通过检测限、定量限，线性范围、重复性、回收率等项目的方法验证，说明该新型CAD电雾检测器的灵敏度高，对棕榈酸有关物质的测定结果准确、可靠；对于没有紫外吸收或紫外吸收比较弱的化合物，新型CAD电雾检测器无疑是比较好的选择，它对该类化合物的检测较紫外检测器和ELSD有很明显的优势。

[1] 国家药典委员会.中国药典[M].二部附录.北京：化学工业出版社，2010：54.

[2] 国家食品药品监督管理局.化学药物杂质研究技术指导原则//药品研究技术指导原则[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[3] 邱颖姮.硬脂酸中棕榈酸和硬脂酸的GC法测定[J].中国医药工业杂志，2010，41（8）：599-601.

[4] 逄楠楠，于勇，毕开顺，等.GC法同时测定芫花中棕榈酸与亚油酸的含量[J].沈阳药科大学学报，2011，28（1）：47-50.

[5] 刘立洋，刘肖.一种新型的通用型检测器-电喷雾检测器（1）[J].环境化学，2011，30（9）：1683-1685.

[6] 刘立洋，刘肖.一种新型的通用型检测器-电喷雾检测器（2）[J].环境化学，2011，30（10）：1830-1832.

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[10] 姜庆伟，杨瑞，梅兴国.HPLC-电雾式检测器（CAD检测法测定脂质体中磷脂含量[J].中国药学杂志2007，42（23）：1794-1796.

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Determination of related substances in Palmitic acid by HPLCCAD

LI Qin HU Chunyong CHEN Gangsheng LI Xiaobi MA Pingping

Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Co.Ltd.,Lianyungang 222069,China

ObjectiveTo establish a method for the determination of related substances in Palmitic acid by HPLCCAD.MethodsThe determination was carried out on a Phenomenex Gemini C18(150mm×4.6mm,3.5μm)column with gradient elution.The flow rate was 0.8mL/min,the column temperature was 35℃,and the temperature of atomize with Charged Aersosol detection(CAD)was 15℃,gas was 35.0 psi(house nitrogen).ResultsThere was a good linearity over the range of 0.44-22.0μg/mL with the correlation coefficientr＞0.990(n=6).The RSD for repeatition was less than 2.0%(n=6),The average recovery was 95.1%-98.3% with RSD of accuracy at 1.7%-3.1%(n=9).ConclusionThe accurate and reliable method was applicable for the control of related substances in Palmitic acid.

HPLC;Charged aersosol detection;Palmitic acid;Related substances

R284

B

2095-0616（2015）05-45-04

2014-12-10）