植物生长调节剂对川麦冬总皂苷和总多糖含量的影响研究△

林秋霞，李敏，周海玉，刘聪，任敏，赵春艳

(成都中医药大学 中药材标准化教育部重点实验室，中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室，四川 成都 611137)

2013年度国家科技惠民计划，四川省三台县涪城麦冬集成技术推广与应用科技惠民工程(S2013GMF000009)；中央支持地方高校发展，2011年四川省“高等教育质量工程”建设项目，膨大素对川麦冬质量的影响研究(196136)

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李敏，教授，研究方向：中药品种、质量及资源研究；Tel：13980038316，E-mail：028limin@163.com

植物生长调节剂对川麦冬总皂苷和总多糖含量的影响研究△

林秋霞，李敏*，周海玉，刘聪，任敏，赵春艳

(成都中医药大学 中药材标准化教育部重点实验室，中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室，四川 成都 611137)

目的研究植物生长调节剂对川麦冬药材总皂苷和总多糖含量的影响，为川麦冬规范化栽培提供理论依据。方法应用紫外可见分光光度法对施用不同植物生长调节剂的川麦冬药材进行总皂苷和总多糖含量的测定。结果低、中剂量膨大素对川麦冬总皂苷的积累有明显的促进作用；多效唑单用或与膨大素合用对总皂苷的积累均表现出与剂量呈正相关的不同程度的抑制作用。膨大素对川麦冬总多糖的生成与积累有显著的抑制作用；多效唑对川麦冬总多糖的生成与积累有显著的促进作用，作用与剂量呈负相关；两药合用时，产生不对称的拮抗作用，分段施用比混合施用的拮抗作用更明显。结论植物生长调节剂对川麦冬总皂苷和总多糖含量有一定的影响，在川麦冬生产过程中，应严格控制植物生长调节剂的使用，以保证药材的临床疗效。

多效唑；膨大素；川麦冬；总皂苷；总多糖

麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.的干燥块根[1]，为著名川产道地药材，主要含多糖类、甾体皂苷类、高异黄酮类及多种氨基酸和维生素等化合物，具有润肺养阴、益胃生津、清心除烦、美颜益肤等功效。

多效唑(PP333)是一种三唑类植物生长调节剂，能改变作物的内源激素水平，提高植株的抗逆性[2]。膨大素(CPPU)是一种新型的植物生长调节剂，能提高产量，增强作物的抗病、抗逆能力[3]。调研发现，药材产区农户普遍使用多效唑[4]、膨大素[5]等植物生长调节剂来提高川麦冬产量，增加收益。

前期实验研究表明，植物生长调节剂能显著提高川麦冬药材产量，最高可增产2倍之多。该实验在前期研究的基础上，进一步对施用了不同植物生长调节剂的川麦冬化学成分[6]进行跟踪研究，旨在为川麦冬的规范化栽培提供一定的理论依据。

1 实验材料

1.1 仪器与试药

UV-1000紫外可见分光光度计、KQ-500DB数控超声波清洗器，1/1万电子天平，电子恒温水浴锅；鲁斯可皂苷元(中国食品药品检定研究院，批号：111909-201103)，D-无水葡萄糖(中国食品药品检定研究院，批号：110833-201205)；块根块茎膨大素(山东金标生化科技有限公司，批号：201102281629)，多效唑15%可湿性粉剂(江苏建农农药化工有限公司，批号：20120804003)。

无水乙醇、正丁醇、高氯酸、硫酸等均为分析纯。

1.2 材料

试验田选在绵阳市三台县新德镇马脊村，前作油菜，地势平坦，排灌方便，肥力中等，土壤为沙质土。试验小区面积1 m2，小区间隔离带为30 cm。除多效唑、膨大素的施用量和施用方式不同外，其它田间管理与当地常规方法一致。

采用随机区组试验设计，3次重复，分组如表 1所示。多效唑和膨大素在川麦冬果期均采用叶面喷施，2012年10月22日施药，2013年3月6日采挖。

供试品麦冬经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定为Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.，是当地长期栽培品种。

表1 实验材料

2 方法与结果

2.1 川麦冬总皂苷含量测定

按照2010年版《中国药典》“麦冬”项下含量测定方法测定，标准曲线回归方程为Y=0.014 7X+0.019 1，r=0.999 8。样品测定结果见表2。

2.2 川麦冬总多糖含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 精确称取D-无水葡萄糖对照品适量，加水制成浓度为0.100 mg·mL-1的对照品溶液。

2.2.2 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液0、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL分别置于25 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取溶液1.0 mL置于25 mL具塞试管中，加入新鲜配制的蒽酮试剂(0.2%蒽酮的80%硫酸溶液)8.0 mL，沸水浴加热10 min，迅速置冰水浴冷却10 min后，以首管为空白，在波长623 nm处测定吸光度[7]。以对照品浓度X(μg·mL-1)对吸光度Y进行线性回归，得回归方程Y=0.060 4X-0.047 5，r=0.999 5。结果表明，葡萄糖浓度在3.17～11.88 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.2.3 总多糖测定方法 取本品细粉3.0 g，精密称定，加入25 mL 95%乙醇，回流提取2次，每次60 min，残渣挥干溶剂后加水25 mL回流提取3次，每次60 min。合并提取液，抽滤，滤液加入0.2%活性炭脱色，抽滤后减压浓缩至1/10体积，加入无水乙醇至含醇量80%以上，冰箱静置过夜，滤过，得麦冬多糖粗品，无水乙醇洗涤数次，600C烘干，即得麦冬多糖精制品[8-9]。精密称取麦冬多糖2 mg于25 mL容量瓶中，加水溶解至刻度，精密吸取溶液1 mL置于25 mL具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入新鲜配制的蒽酮试剂”起，依法测定吸光度，代入线性回归方程计算多糖含量。

2.2.4 回收率试验 精密称取已知麦冬多糖含量的样品5份，分别加入与样品含量相当的对照品溶液，按2.2.3项下方法操作，623 nm处测定吸光度，计算出平均回收率为98.3%，RSD为2.48%。

2.2.5 稳定性试验 取同一份供试品溶液按2.2.2项下方法操作，间隔0 min、15 min、30 min、60 min、90 min、120 min、150 min、180 min测定吸光度，结果显示RSD为1.43%，表明供试品溶液室温下放置3 h稳定。

2.2.6 精密度试验 从同一份川麦冬样品制备溶液中量取相同量溶液5份，按2.2.2项下方法操作，623 nm处测定吸光度，代入回归方程，计算出川麦冬多糖的平均含量为67.36%， RSD为3.22%，表明该仪器精密性良好。

2.2.7 重复性试验 取同一份川麦冬样品细粉，连续称取5次，平行进行实验，结果表明5次测得川麦冬多糖的平均含量为47.63%，RSD为4.13%，表明该方法重复性良好。

2.3 样品含量测定

按上述含量测定方法测得川麦冬药材样品中的总皂苷和总多糖含量及软件分析结果见表2。

表2 川麦冬药材总皂苷和总多糖含量测定结果

注：同一列不同小写字母表示差异达到5%显著水平，不同大写字母表示差异达到1%极显著水平。

分析表明，川麦冬总皂苷含量均在0.25%～0.39%之间，符合2010年版《中国药典》麦冬项下不得低于0.12%的规定。低、中剂量膨大素处理后的川麦冬总皂苷含量比对照分别增加了0.18%、0.03%；多效唑单用或与膨大素合用均不同程度上降低了川麦冬总皂苷的含量，并随着剂量的增加，降低作用越明显。

膨大素对川麦冬总多糖的生成与积累有显著的抑制作用，随着剂量的增加，作用呈逐渐增强的趋势；多效唑对川麦冬总多糖的生成与积累有显著的促进作用，作用与剂量呈负相关。两药合用时，产生不对称的拮抗作用，分段施用比混合施用的拮抗作用更明显。

3 结论与讨论

皂苷和多糖类成分是川麦冬主要有效成分，本实验以川麦冬中总多糖和总皂苷的含量作为指标对川麦冬进行质量评价。研究表明，植物生长调节剂对川麦冬总皂苷和总多糖含量有一定的影响，膨大素能促进川麦冬总皂苷的生成与积累，而不利于总多糖的积累；多效唑能促进川麦冬总多糖的生成与积累，而不利于总皂苷的积累。

产地调研发现，长期使用膨大素、多效唑等植物生长调节剂，可能导致药材畸形、空心、不耐储藏、环境污染及土壤微生物环境改变等严重负效应。此外，据报道长期食用含有植物生长调节剂的水果或药材，会影响人们身体健康，如引起儿童提前发育、过早成熟等症状的出现[10]。使用植物生长调节剂在增加川麦冬药材产量的同时，对药材化学成分的积累量和组成比有明显的影响，进而可能影响药材的药效。因此，在川麦冬栽培过程中应严格控制植物生长调节剂的使用，以保证药材的临床疗效。

[1] 国家药典委员会.中国药典.[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：144.

[2] 贾洪涛,党金鼎,刘风莲.植物生长延缓剂多效唑的生理作用机理及应用[J].安徽农业科学,2003,31(2)：323-324.

[3] 吴文荣,黄谦,王晓,等.马铃薯叶面喷施膨大素对其品质的影响[J].贵州农业科学，2010,38(3)：64-65.

[4] 侯凯,陈郡雯,翟娟园,等.植物生长调节剂对川白芷生长发育及其产量品质的影响[J].中国中药杂志,2013,38(13)：2082-2083.

[5] 张文彪.膨大素在块根(茎)作物及小麦大豆上的应用试验[J].现代农业科技，2009,13：14-16.

[6] 曹原湘,张兴国,杨言琛.麦冬质量控制技术的研究[J].安徽农业科学，2009,37(33)：16359-16360.

[7] 唐丽琴,李矗,刘圣,等.蒽酮-硫酸比色法测定麦冬多糖的含量[J].安徽医药，2003,7(1)：39-40.

[8] 冯怡,韩宁,徐德生.麦冬多糖含量测定方法的研究[J].中成药，2006,28(5)：705-707.

[9] 王远,秦民坚,戚进,等.不同采收期及加工条件对川麦冬多糖含量的影响[J].现代中药研究与实践,2009,23(2)：3-6.

[10] 何瑞,刘艾平,曹玉广.植物生长调节剂使用中的安全问题[J].中国卫生监督杂志，2003,10(3)：99-101.

StudyoftheinfluenceofPlantGrowthRegulatorsonOphiopogonjaponicus’sTotalSaponinsandTotalPolysaccharideContent

LINQiuxia，LIMin*，ZHOUHaiyu，LIUCong，RENMin，ZHAOChunyan

(CollegeofPharmacy，MOEKeyLaboratoryofstandardizationofChineseherbalmedicine，KeyLaboratoryofMinistryforresearchanddevelopmentoftraditionalChinesemedicineresources,ChengduUniversityofTCM，Chengdu，611137)

Objective：To provide a theoretical basis for standardized cultivation forOphiopogonjaponicus，we studied the influence of plant growth regulators onO.japonicus’stotal saponins and total polysaccharide content.MethodUse the UV-visible spectrophotometric to determine the total saponins and total polysaccharide content in different plant growth regulators conducted onO.japonicus.ResultLow and medium dose of CPPU significantly promotes the accumulation of total saponins inO.japonicus；MET alone or in combination with the CPPU shows different degrees of inhibition which is positive correlated with dose.CPPU shows a significant inhibition effect onO.japonicus’stotal polysaccharides generation and accumulation；MET shows a significant promoting effect onO.japonicus’stotal polysaccharides generation and accumulation which is negative correlated with dose；the combined use of CPPU and MET results in asymmetry antagonism.The antagonism is more notable in segmented administration than in the hybrid administration.ConclusionPlant growth regulators influence the total saponins and total polysaccharides content.In theO.japonicusproduction process，the use of plant growth regulators should be strictly controlled to ensure the clinical efficacy of medicines.

MET；CPPU；Ophiopogonjaponicus；Total saponin；Total polysaccharides

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.013

2013-11-27)