反相液相色谱法测定盐酸去氧肾上腺素注射液中依地酸二钠的含量

蒋宇丹 施建国

( 上海禾丰制药有限公司 上海 201206)

盐酸去氧肾上腺素为肾上腺素受体激动药，具有收缩血管的作用。临床上用于治疗休克及维持血压。盐酸去氧肾上腺素具有酚羟基结构，易被氧化，故制成注射液需加入依地酸二钠作为稳定剂[1]。常用的依地酸二钠的浓度一般为0.005%～0.1%（W/V）[2]。依地酸二钠大量吸收时将引起钙的减少而出现低血钙症状[3]。因此，控制依地酸二钠的加入量是非常必要的。目前该注射液现行国家标准尚未对依地酸二钠的含量进行控制，也未有相关报道。依地酸二钠在中国药典现行版中虽有收载，但含量测定方法为容量分析法[4]，无法对微量依地酸二钠进行测定，也无法消除注射液中其他成分的干扰，不适合注射液中依地酸二钠的检测。本文参考文献[5]建立了反相液相色谱法测定盐酸肾上腺素注射液中依地酸二钠的含量。

1 仪器与试药

Agilent L1260液相色谱仪，VWD检测器、自动进样器（安捷伦科技中国有限公司）。Sartorius CPA225D电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。依地酸二钠对照品（批号：20110601，含量100.2%，湖南尔康制药股份有限公司）。盐酸去氧肾上腺素注射液（1 ml：10 mg）由本公司提供。甲醇、10%四丁基氢氧化铵为色谱纯，水为超纯水，甲酸及其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Kromasil C8色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 µm），流动相为甲醇-10%四丁基氢氧化铵-98%甲酸-水( 125：12：0.5：875)，检测波长254 nm，柱温40 ℃，流速1.5 ml/min，进样量 20 µl。

2.2 依地酸二钠对照品溶液的配制

取依地酸二钠对照品适量，加水溶解并稀释制成1 mg/ml的溶液。测定前，精密量取1 ml置100 ml量瓶中，加水20 ml，再加0.1 mol/L的三氯化铁溶液2.0 ml，摇匀，超声15 min；加水至刻度摇匀，备用。

2.3 供试品溶液的配制

取盐酸去氧肾上腺素注射液10 ml置100 ml量瓶中，加水20 ml，再加0.1 mol/L的三氯化铁溶液2.0 ml，摇匀，超声15 min，加水稀释至刻度，摇匀。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性试验

按处方量，不加依地酸二钠，配制空白辅料溶液，按2.3项下方法配制溶液，结果显示盐酸去氧肾上腺素注射液中盐酸去氧肾上腺素及其他辅料对本方法中依地酸二钠的测定均无干扰，该方法具有较强专属性（图1）。2.4.2 线性范围

B：含依地酸二钠峰（1为依地酸二钠峰）图1 依地酸二钠的RP-HPLC图谱

分别精密量取依地酸二钠对照品溶液0.5、0.8、1.0、1.5、2.0、3.0 和 5.0 ml置 100 ml量瓶中，加水 20 ml， 加0.1 mol/L的三氯化铁溶液2.0 ml，摇匀，超声15 min，加水稀释至刻度，摇匀，得到浓度为5.06，8.09，10.11，15.16，20.22，30.33，50.55 µg/ml的溶液。分别精密量取上述溶液20 µl，按2.1项下方法测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，做线性回归，回归方程（n=7）为：Y=20.27 X-17.08，r=0.999。结果表明，依地酸二钠在5.06~50.55 µg/ml 浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.3 精密度试验

取同一批供试品，分别按2.3配制6 份供试品溶液并测定，测得依地酸二钠平均含量为0.010 0%（W/V），RSD为0.96% （n=6），表明本方法重复性良好。

2.4.4 回收率试验

分别按处方量配制含依地酸二钠80%、100%、120%的盐酸去氧肾上腺素注射液各3份，按2.3配制供试品溶液，测定并计算回收率，平均回收率为101.0%，RSD=0.31%（表1）。

表1 样品的回收试验

2.5 供试品测定

取2.2对照品溶液和2.3供试品溶液各20 µl注入液相色谱仪分析，按外标法以峰面积计算含量。测定三批盐酸去氧肾上腺素注射液中依地酸二钠的含量分别为0.009 3%，0.009 1%，0.010 0%（W/V）。

3 讨论

3.1 依地酸二钠与三氯化铁反应时间的确定

将依地酸二钠与三氯化铁溶液分别于超声仪超声5、10、15、20、25、30 min 后配制溶液，分别精密量取20µl注入液相色谱仪分析，结果表明测定样品在超声10 min时反应已基本完全，为减少对照品与供试品的反应误差，将反应时间定为15 min。

3.2 色谱柱的选择

文献[6]采用苯乙烯-二乙烯苯柱对依地酸二钠进行测定。考虑到色谱柱的通用性，本法采用三根不同品牌的C8柱进行试验，其对依地酸二钠的测定无差异，峰形与分离效果均好，因此选用C8柱建立检验方法。

3.3 结论

经方法学验证，本文所建立的反相液相色谱法操作简单、专属性强，能准确测定盐酸去氧肾上腺素注射液中依地酸二钠的含量。

[1] Smith G, Hasson K, Clements JA. Effects of ascorbic acid and disodium edetate on the stability of isoprenaline hydrochloride injection [J]. Pharm Sci, 1984, 9(3): 209-215.

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[3] 萧三贯. 最新国家药用辅料标准手册[M]. 北京: 中国医药科技电子出版社, 2006: 50-52.

[4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典: 2010年版（二部）[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 1206.

[5] 卢京光, 裴琳, 周景岳, 等. 反相离子对色谱法测定硫普罗宁注射液中乙二胺四醋酸盐的含量[J]. 药物分析杂志,2011, 31(4): 772-775.

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