淫羊藿通络丸薄层色谱鉴别方法的研究

吴世福，王 红

(1.山东省医疗器械产品质量检测中心，山东济南250101;2.济宁市第一人民医院西院区，山东济宁271000)

淫羊藿通络丸由炙淫羊藿、桂枝、炒白术、茯苓、人参等7味中药组成，具有温补脾肾、祛湿通络的功效，用于糖尿病周围神经病变之脾肾阳虚、湿瘀阻络证。本文通过对样品处理方法、展开剂的考察，建立了专属性强、简便可行的薄层色谱鉴别方法，可有效地控制产品质量，保证临床用药安全有效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 十万分之一电子分析天平(密特勒－托利多仪器有限公司);万分之一电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司);数显恒温水浴锅(金坊市医疗仪器厂);智能电热恒温鼓风干燥箱(上海琅轩实验设备有限公司);超声波清洗器(上海科导超声波有限公司);硅胶G(青岛海洋化工厂);定量毛细管(日本岛津)，MERCK薄层层析板(批号:OB678541)。

1.2 试药 淫羊藿苷(批号:110737－200415)、人参皂苷Rb1对照品(批号:110704－200921)、人参皂苷Re对照品(批号:110754－200822)、人参皂苷Rg1对照品(批号:110703－201128)、川芎对照药材(批号:120918－201110)、芍药苷对照品(批号:110736－201136)、白术对照药材(批号:120925－201109)桂枝对照药材(批号:121191－201103)、人参对照药材(批号:120917－200609)，均由中国药品生物制品检定所提供;淫羊藿通络丸(批号为120801、120403、120902，由济宁市中医院提供);阴性样品(自制):按处方工艺分别制备不同药材相应的阴性样品;试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 炙淫羊藿 取本品14 g，研细，加乙醇80 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，水溶液备用;合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。取不含炙淫羊藿的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版(一部)附录Ⅵ B］试验，吸取上述三种溶液各6 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板，以乙酸乙酯 － 丁酮 － 甲酸 － 水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，加热至斑点清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰，见图1。

图1 淫羊藿薄层色谱图

图2 人参薄层色谱图

图3 人参薄层色谱图

2.2 人参 取“2.1”项下的水溶液，加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，依次用浓氨试液25 mL、正丁醇饱和的水25 mL各洗涤2次，分取正丁醇液，蒸干，残渣加水10 mL使溶解，通过D101大孔树脂柱(内径为1.5 cm，柱高为12 cm)，依次用水50 mL、20%乙醇50 mL洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。取不含人参的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。另取人参对照药材1 g，加乙醇30 mL，超声处理30 min，滤过，残渣加水20 mL溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，弃去乙酸乙酯液，自“水溶液加水饱和正丁醇振摇提取”起，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版(一部)附录ⅥB］试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液和对照药材溶液各10 μL、对照品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水(65∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点;紫外光灯(365 nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰，见图2～3。

2.3 川芎 取本品粉末14 g，加乙醚40 mL，超声处理30 min，滤过，药渣备用;滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含川芎的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。另取川芎对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版(一部)附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰，见图4。

2.4 炒白芍 取“2.3”项下的药渣，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含炒白芍的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版(一部)附录Ⅵ B］试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各6 μL及对照品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－浓氨试液(50∶20∶10∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰，见图5。

图4 川芎薄层色谱图

图5 炒白芍薄层色谱图

2.5 炒白术 取本品粉末14 g，置烧瓶中，加水200 mL，照挥发油测定法［《中国药典》2010年版(一部)附录ⅩD］试验，自冷凝管上端加石油醚(60～90℃)1.5 mL，加热至沸并保持微沸2 h，分取石油醚液，作为供试品溶液。取不含炒白术的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。另取白术对照药材2 g，同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版(一部)附录ⅥB］试验，吸取上述三种溶液各4～6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点。阴性样品无干扰，见图6。

图6 炒白术薄层色谱图

2.6 桂枝 取桂枝对照药材2 g，置烧瓶中，加水200 mL，照挥发油测定法［《中国药典》2010年版(一部)附录ⅩD］试验，自冷凝管上端加石油醚(60～90℃)1.5 mL，加热至沸并保持微沸2 h，分取石油醚液，作为对照药材溶液。取不含桂枝的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版(一部)附录ⅥB］试验，吸取阴性样品溶液、“2.5”项下的供试品溶液4～8 μL及上述对照药材溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365 nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰，见图7～8。

图7 桂枝薄层色谱图

3 讨论

3.1 本品为中药复方制剂，参考有关文献［1～6］，采用薄层色谱鉴别方法对方中的主要药味均进行了鉴别，并进行了阴性对照试验，结果其方法简便且专属性强，可有效控制本品的质量。

图8 桂枝薄层色谱图

3.2 提取方法的选择 分别以乙醚、正己烷为溶剂，采用超声波提取法及提取挥发油方法制备供试品溶液，对白术和桂枝进行薄层鉴别，结果以提取挥发油法效果较好，薄层色谱斑点清晰，阴性样品无干扰。

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