肾叶打碗花总黄酮含量的分析

尚金燕，历 娜，杨 雪

(山东药品食品职业学院，山东威海264210)

肾叶打碗花 Calystegia soldanella(Linn.)R.Br.，别名:滨旋花、孝扇草、扶子苗、肾叶天剑等。是一种多年生匍匐性草本，生长于海滩沙地、海岸岩石缝中。广泛分布于山东、江苏、辽宁、河北、浙江、台湾等沿海各地。该植物的药用已有悠久的历史，《全国中草药汇编》记载该药材具有祛风利湿，化痰止咳的功效［1］。《中国药用植物图鉴》记载其:治风湿性关节疼痛［2］。《中华本草》记载该植物具有清热解毒，主治丹毒的功效［3］。有关打碗花化学成分的研究很少，《中药辞海》记载其化学成分为合红古豆碱［4］，Tori M 等［5］研究发现该植物的茎中含有一种反式－4－羟基桂皮酸酯。我们初步研究了肾叶打碗花的化学成分，发现该药材含有较高黄酮类物质，为进一步开发利用肾叶打碗花资源，本研究利用紫外－分光光度法测定了该药材全草的总黄酮含量，为肾叶打碗花资源的开发利用提供理论依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 电子天平(梅特勒ME204E);摇摆式粉碎机(LK－1000A);紫外－分光光度计(TU－1810);循环水多用真空泵(SHB－Ⅲ);电热鼓风干燥箱(FG－10)。

1.2 药物和试剂 肾叶打碗花药材采自山东省威海市前双岛海滨(采集时间为2013年8月份)，经山东药品食品职业学院中药教研室曲畅游教授鉴定为肾叶打碗花的全草。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100080－200306);所用试剂亚硝酸钠、氢氧化钠、无水乙醇，硝酸铝均为分析纯，实验用水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 用电子天平准确称取25.00 mg芦丁对照品，加乙醇定容至50 mL，摇匀，配制成0.5 mg·mL－1的溶液。

2.2 样品溶液的制备 打碗花全草室温下风干，用摇摆式粉碎机粉碎，过60目筛后备用。精密称取2 g样品粉末，置于100 mL圆底烧瓶内，加入70%的乙醇60 mL，放置在水浴中，70℃左右回流提取60 min，过滤、定容至100 mL，备用。

2.3 检测波长的选择［6～8］精密量取样品溶液和芦丁对照品溶液各2 mL，分别置于25 mL量瓶中，各加入60%的乙醇10 mL，加入1.00 mL 5%的亚硝酸钠溶液，混合均匀，室温下放置6 min;加入1.00 mL 10%硝酸铝溶液，摇匀，室温下放置6 min;加入10.00 mL 4%的氢氧化钠溶液，然后用纯化水，定容至刻度，摇匀，室温放置15 min。以60%的乙醇溶液作为空白溶液，分别在300～600 nm范围内进行波长扫描，结果显示，制备的肾叶打碗花样品溶液和芦丁对照品溶液在510 nm处均有较平缓的吸收峰，确定检测波长为510 nm。

2.4 标准曲线的绘制 精确量取芦丁对照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL，按照上述“2.3”项下的测量方法，空白为不加芦丁对照品的溶液，分别在510 nm波长处测定吸光度，然后选取对照品的质量浓度C(mg·mL－1)为横坐标，吸光值(A)为纵坐标，绘制标准曲线。结果显示芦丁质量浓度在0.020～0.12 mg·mL－1范围内有良好的线性关系。回归方程为A=9.897C+0.003 4，R2=0.999 5。

2.5 样品含量测定 精确量取样品溶液5份，每份1 mL，按标准曲线制备的方法测定肾叶打碗花样品的吸光度，利用回归方程计算总黄酮含量，测定结果表明，肾叶打碗花全草总黄酮的平均含量为5.73%，结果见表1。

表1 肾叶打碗花全草总黄酮含量测定结果

2.6 精密度试验 精确量取5份1 mL的芦丁对照品溶液，在510 nm处测定各吸光度，计算总黄酮含量，RSD=1.15%(n=5)，结果表明该测量方法精密度良好。

2.7 稳定性试验 精确量取“2.2”项下所制备的1 mL 的样品溶液，按“2.3”项下方法分别在 0、15、30、45、60 min，于510 nm处测定各吸光度，计算后得到RSD=1.05%(n=5)，表明在1 h内样品稳定。

2.8 重现性试验 精确称取肾叶打碗花样品粉末2 g，按照“2.2”项下的方法制备5份样品溶液，按“2.3”项下的方法分别测定5份样品的吸光度，代入回归方程，计算得到总黄酮含量为5.74%，RSD=0.89%(n=5)，重现性良好。

2.9 加标回收率试验 精确称取5份肾叶打碗花细粉，每份2 g，按“2.2”项下的方法处理得到样品溶液，再向每份样品液中精密加入芦丁对照品溶液1 mL(0.5 mg·mL－1)，按照“2.5”项下的方法分别测定5份溶液的吸光度，计算回收率。结果显示，平均回收率为99.6%，RSD值为0.33%(n=5)，说明该方法具有较好的回收率，结果见表2。

表2 加标回收率试验结果

3 结论

肾叶打碗花是分布在沿海沙滩常见的植物，分布广，数量大，易采集;已有研究证明该植物的水提物和醇提物具有抗炎镇痛作用［9］，但目前该植物药用价值和物质基础研究较少，基本上作为杂草，影响了该药材的开发利用。本研究采用乙醇提取法，提取了肾叶打碗花的黄酮成分，并采用紫外－可见分光光度法初步测定了肾叶打碗花中总黄酮的含量，测定结果显示肾叶打碗花黄酮含量较高，为该植物的进一步开发研究提供了一定理论基础。

［1］谢宗万.全国中草药汇编［M］.北京:人民卫生出版社，1996:630.

［2］第二军医大学药学系生药学教研室.中国药用植物图鉴［M］.上海:上海教育出版社出版，1960:923.

［3］国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草(第18卷)［M］.上海:上海科学技术出版社，1999:497－498.

［4］严永清，余传隆.中药辞海(第二卷)［M］.北京:中国医药科技出版社，1996:51－52.

［5］Tori M，Ohara Y，Nakashima K，et al.Caffeic and coumaric acid esters from Calystegia soldanella［J］.Fitoterapia，2000，71(4):353 －359.

［6］何可群，卢文芸，李相兴，等.贵州鼠尾草的总黄酮含量测定［J］.贵州农业科学，2013，41(1):77 －79.

［7］胡海清，韩贺东，王晓玲.双花千里光中总黄酮含量测定［J］.西南民族大学学报(自然科学版)，2013，39(4):505－507.

［8］牛明娟，惠秋沙.泽漆总黄酮的提取与含量测定［J］.药学研究，2013，32(3):131 －133.

［9］谭丽，沈清，黄真.孝扇草抗炎镇痛有效部位的筛选［J］.中华中医药学刊，2012，30(1):155 －157.