尿液内毒素定量检测对泌尿系统革兰阴性菌感染的诊断价值研究＊

周洪兴，赵文杰，张 平，孙颖昕，白 阳，陈 磊，王 硕，周 韩，徐 哲（南京医科大学附属常州市第二人民医院检验科，江苏常州 213003）

随着各种介入性诊疗手段的应用以及大量广谱抗菌药物的使用，临床条件致病菌的感染率逐年增加。在各种条件致病菌所致感染性疾病中，泌尿系统感染占有重要地位［1］，且以革兰阴性菌感染为主［2－4］。笔者对临床药敏试验检测结果进行了分析，发现多药耐药革兰阴性菌在临床常见致病菌中的所占比例较大。因此，及时监测革兰阴性菌感染并在感染初期采取措施以控制感染显得非常重要。常规尿液病原菌培养检测耗时长，且操作繁琐，灵敏度也较低，无法用于易感患者的筛查。为此笔者根据革兰阴性菌的特点，采用尿液内毒素定量检测的方法对易感患者进行革兰阴性菌感染的筛查，旨在探讨尿液内毒素定量检测在革兰阴性菌感染诊断中的应用价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 本院2012年各病区送检的尿液培养标本100份，其中重症监护病房（ICU）标本18份、肿瘤科标本15份、呼吸科标本16份、泌尿科标本22份、妇科标本10份、烧伤科标本5份、其他病区标本14份。

1．2 仪器与试剂 PhoenixTM－100全自动细菌鉴定药敏系统购自美国BD公司；BET－24A内毒素检测仪购自天津天大天发科技有限公司；鲎试剂动态浊度法内毒素检测试剂盒及配套质控品、校准品购自湛江博康海洋生物公司。各批次质控品检测结果均在控制范围内。

1．3 方法

1．3．1 尿液细菌培养 采用无菌移液器吸取尿液标本20μL接种血平板，37℃培养18～24h，将可疑菌落接种至血平板进行纯培养，之后挑取1～3个菌落至2mL无菌生理盐水中，校正浊度至0．5麦氏比浊度，然后接种至鉴定药敏板，上机进行细菌鉴定。以病原菌浓度不低于105CFU／mL作为尿液细菌培养阳性判断标准。

1．3．2 内毒素测定 按内毒素检测试剂盒说明书的要求处理标本后采用内毒素检测仪进行内毒素水平检测，操作严格按照仪器说明书进行。

1．4 统计学处理 采用SPSS13．0软件进行数据处理和统计学分析。计量资料以中位数（下四分位数，上四分位数），即M（P25，P75）表示，组间比较采用 Kruskall－Wallis H 检验，若比较差异有统计学意义，再采用Mann－Whitney U检验进行组间两两比较。内毒素定量检测对泌尿系统革兰阴性菌感染的诊断效能分析采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）。不同方法检测结果的一致性分析采用Kappa检验。显著性检验水准α＝0．05，P＜0．05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 含有不同致病菌的尿标本内毒素检测结果比较 100份送检尿标本中，细菌培养阳性36例，其中革兰阴性菌阳性18例，占50．0%，革兰阳性菌阳性13例，占36．1%，真菌阳性5例，占13．9%。含有不同致病菌的尿标本内毒素检测结果见表1。

表1 含有不同致病菌的尿标本内毒素水平

2．2 内毒素对泌尿系统革兰阴性菌感染的诊断效能分析 经ROC曲线分析可知，尿液内毒素检测诊断泌尿系统革兰阴性菌感染的cut－off值为71．9EU／L时，其对革兰阴性菌感染的诊断灵敏度为88．9%、特异度为85．4%、阳性预测值为57．1%、阴性预测值为97．2%。Kappa分析显示，细菌培养结果与内毒素检测结果的Kappa值为0．61，可以认为两种方法检测结果的一致性好，见表2。

表2 内毒素检测结果与细菌培养结果一致性分析（n）

2．3 患者随访结果分析 尿液培养确诊革兰阴性菌感染患者18例，经抗菌药物治疗1周后，有15例患者自觉症状显著改善。尿液内毒素定量检测结果显示，该15例患者尿液内毒素水平均值为42．6EU／L，与治疗前检测结果比较差异有统计学意义（U＝77．0，P＜0．05）。

3 讨 论

有调查研究显示，泌尿系统感染约占感染性疾病的20%～30%［1－2］。目前，尿液细菌培养仍为诊断泌尿系统感染的金标准。然而，细菌培养检测周期长，且在标本留取、转运、接收等环节存在较多的不确定因素，易造成杂菌污染而对检测结果产生影响，导致尿液细菌培养检测无法实现泌尿系统感染的早期诊断，不利于疾病的及时治疗。内毒素是革兰阴性菌细胞壁的重要成分，当发生革兰阴性菌感染时，患者血液内毒素水平即可显著升高［5－6］。目前国外已开展了尿液内毒素定量检测，且研究表明尿液内毒素水平与泌尿系统革兰阴性菌感染患者的病情存在一定的相关性［7－10］。

本研究对尿液细菌培养检测结果与尿液内毒素定量检测结果进行了比较，结果显示，泌尿系统革兰阴性菌感染患者尿液内毒素水平显著高于革兰阳性菌、真菌感染患者，且尿液内毒素定量检测对革兰阴性菌感染的诊断灵敏度与特异度均符合临床要求；一致性检验结果亦显示，尿液内毒素定量检测结果与尿液培养检测结果的一致性较好。由此可见，就泌尿系统革兰阴性菌感染诊断而言，尿液内毒素检测可以部分代替尿液细菌培养。与尿液细菌培养检测相比，尿液内毒素检测具有检测速度更快、操作更简便的优势，一般标本送检数小时后即可获得检测结果，适用于易感患者的筛查。与此同时，本研究结果显示，经过治疗后，泌尿系统革兰阴性菌感染患者的尿液内毒素水平较治疗前显著下降，且下降幅度与患者的临床症状缓解程度相一致。因此，尿液内毒素定量检测还可用于泌尿系统革兰阴性菌感染患者的疗效评价。

另一方面，尿液内毒素检测对标本的要求也较严格，例如需要使用无热源的留样杯，在标本留取、运送、接收和检测的各个环节均需严格进行无菌操作。因此，尿液内毒素定量检测需要使用专用的留样杯，且需要对从事标本转运、接收的操作员进行相关培训。有理由相信，随着检测技术的不断发展，尿液内毒素定量检测的临床应用将逐渐普及。

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