KRUPPLE样转录因子6蛋白在口腔癌组织中的表达及其与P21蛋白的关系

刘圆月 侯菊花 李 灿

益阳医学高等专学校病理教研室，湖南益阳 413000

Krupple样转录因子6（KLF6）属于一种核转录调控因子，能够与靶基因启动子区域的GC盒以及CACCC盒等核心元件进行特异性地结合，从而发挥生物效应，是近年来发现的一种抑癌基因，具有抑制细胞生长以及残余细胞衰老调控等功能[1-2]。P21基因是20世纪90年代发现对的一种全新的抑癌基因，可通过与Cyclin cdk复合物之间相结合对Rb蛋白的磷酸化过程起到一定的抑制作用，从而对细胞周期进行负调控[3]。本研究主要以口腔癌组织为研究对象，着重探讨了KLF6蛋白在口腔癌中的表达及其与p21蛋白的关系，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2007年9月～2012年9月入住益阳医学高等专学校附属医院的50例口腔癌组织、50例口腔癌旁组织及50例正常口腔组织作为研究对象。口腔癌患者中，男29例，女21例；年龄19～78岁，平均（50.20±11.38）岁；口腔癌旁组织均取自于本组患者；正常口腔患者中，男27例，女 23例；年龄20～74岁，平均（47.09±9.39）岁。 入选标准[4]：①经病理学诊断为口腔癌；②术前患者均未进行放化疗；③具有完整的临床资料等。两组患者均经医院伦理委员会批准且经患者本人知情同意入组。三组患者在性别、年龄等方面差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫组织化学染色

所有组织均使用10%的甲醛进行固定，使用石蜡进行包埋，4 μm厚连续进行切片，组织切片常规烤片、脱蜡、微波抗原修复以及清除内源性过氧化物酶、DAB显色，苏木精衬染；使用已知阳性切片作为阳性对照，使用磷酸盐缓冲液（PBS）来代替一抗作阴性对照。染色方法具体参考说明书进行操作[5]。

1.3 结果判定标准

KLF6阳性标记部位在细胞核和细胞浆；p21阳性标记部位主要在细胞核。采用双盲法由2名经验丰富且不知道临床资料的临床病理专家分别独立作出判断：400倍视野随机计数4个不同视野的阳性细胞数和细胞总数，计算阳性细胞占细胞总数的比值。参照Fromowit等的方法在高倍镜下对着色反应作评分：a.无着色为 0分，淡黄色为 1分，棕黄色为 2分，棕褐色为3分；b.阳性范围：无着色为0分，＞0%～10%为1分，＞10%～50%为 2分，＞50%～80%为 3分；＞80%～100%为 4 分，两项结果相乘，0～6 分为阴性（-），7～12分为阳性（+）[6]。

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS 16.0对数据进行统计及分析，计数资料以率表示，采用χ2检验，相关性采用线性回归分析的方法进行分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 KLF6及p21表达与口腔癌临床病理因素的关系

由表1可知，KLF6及p21表达在浸润深度方面，差异均有统计学意义（P＜0.05），但在年龄、性别、肿瘤大小、Dukes′分期及淋巴转移等方面差异无统计学差异（P ＞ 0.05）。 见表1。

表1 Krupple样转录因子6（KLF6）及 p21表达与口腔癌临床病理因素的关系（n=50）

2.2 KLF6及p21蛋白在口腔癌、癌旁组织及正常口腔组织中的表达情况

由表2可知，KLF6及 p21蛋白阳性表达率大小为：口腔癌 ＞癌旁组织 ＞正常口腔组织，且两种蛋白在上述三种组织中的阳性表达率相比，差异有高度统计学意义（P ＜ 0.001）。见表2。p21、KLF6在口腔癌组织及口腔癌旁组织中的表达见图1。

表2 Krupple样转录因子6（KLF6）及 p21蛋白在口腔癌、癌旁组织及正常口腔组织中的表达（例）

图1 p21、KLF6在口腔癌组织及口腔癌旁组织中的表达

2.3 KLF6与p21蛋白在口腔癌组织中的关系

由表3可知，口腔癌组织中KLF6与p21具有正相关性（r=0.568，P ＜ 0.01）。 见表3。

表3 Krupple样转录因子6与p21蛋白在口腔癌组织中的关系（例）

3 讨论

相关研究证实，绝大多数肿瘤细胞均存在着一些细胞周期调控因子的表达异常，哺乳动物分裂与分化的主要调节事件发生在G1期，而该时期周期蛋白会出现异常表达可能会引起细胞周期的失调，进而引起肿瘤的发生与发展[7-8]。在这其中，肿瘤的发展受到多种基因的影响，其中KLF6基因等[9]。KLF6基因编码蛋白由283个氨基酸所组成，即82个氨基酸的锌指DNA结合区与氨基端的2012个氨基酸的转录调节区所构成。KLF6参与细胞的生长、繁殖、凋亡、血管生成以及组织损伤修复等过程，同时它在肿瘤的发生与发展过程中发挥着十分重要的作用[10]。相关临床研究表明：KLF6基因的失活与散发性口腔癌存在直接的关系，其机制可能与APC、K-RAS等基因的缺失存在一定的关联性[11]。

有研究报道称，KLF6与肝癌及前列腺癌的发生存在十分密切的关系[12]。该基因主要通过对肿瘤细胞的增殖产生的抑制以及促肿瘤细胞凋亡的作用，且其表达还与体内NO的合成存在一定的关系，可使得细胞内源性NO合成酶的mRNA的表达能力大大增加，有临床研究表明，NO合成酶mRNA的表达速度会提高 4倍左右[9]。 同时，TGF-β1与 TGF-βⅠ、Ⅱ型受体以及诱生型NO合成酶等也是KLF6的靶基因。这些靶基因均能够参与机体的细胞周期的调控以及细胞凋亡等过程之中，上述均说明了KLF6对肿瘤会产生抑制作用[13]。本研究结果表明，KLF6与口腔癌的发生、发展相关。口腔癌组织中KLF6的表达要明显高于正常口腔组织与癌旁组织，且随着细胞分化程度地逐渐降低，细胞增殖能力会逐渐增强以及细胞肿瘤化程度增加，此时，有大量异常的 KLF5会聚集在细胞浆之中，说明了细胞浆表达的KLF6能够作为判定肿瘤恶性程度的一个重要指标[14]。

细胞生长控制是正常组织的一个十分重要的特点，如果细胞的生长控制能力丧失了，那么就会使得肿瘤细胞的生长与繁殖。调控细胞生长的一个非常关键的因子就是p21蛋白，它是一种细胞周期依赖性激酶抑制物，通过阻止Rb基因的磷酸化而对转录因子E2F的活性加以调节[4]。具体的调节过程为：当Rb基因处于磷酸化状态的时候，调节细胞周期进展的某些关键基因的转录不能被E2F激活[15-16]。因此，p21阻止了G1期向S期的过渡过程，将细胞周期阻止在二者之间，从而对细胞的生长产生抑制性作用。刘圆月等[16]推测p21基因的失活是口腔癌发生过程中的早期分子事件。

本研究观察指标为：KLF6及p21蛋白在口腔癌、癌旁组织及正常口腔组织中的表达情况及KLF6与p21蛋白在口腔癌组织中的关系。结果表明：KLF6及p21蛋白阳性表达率大小为：口腔癌 ＞癌旁组织 ＞正常口腔组织，且两种蛋白在上述三种组织中的阳性表达率相比，差异有高度统计学意义（P＜0.001）；口腔癌组织中KLF6与p21具有正相关性（r=0.568，P＜0.01）。

综上所述，KLF6与p21蛋白在口腔癌的发生与发展中可能具有非常重要的作用，且两者在口腔癌组织中呈现正相关关系。

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