蚕沙的薄层鉴别研究

史蕾喆 李 柯 陈 丹 李若存

1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208;2.湖南省中医药研究院，湖南 长沙 410013;3.湘潭职业技术学院，湖南 湘潭 411102

蚕沙为蚕蛾科昆虫家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便，具有祛风除湿、活血定痛的功效，用于风湿痹痛、关节不遂、皮肤不仁、腰腿冷痛、风疹瘙痒、头风头痛、烘弦风眼[1]。现代药理和临床研究表明蚕沙有抗肿瘤、降血糖、改善和治疗贫血作用，并且成功地开发了金糖尿胶囊、生血宁片。其中1-脱氧野尻霉素 (1-DNJ)和派可林酸为蚕沙降血糖、抗肿瘤、抗病毒的有效成分[2、3]。《中华人民共和国卫生部药品标准》中药材 (第一册)采用TLC鉴别了蚕沙药材中含有的β-谷甾醇成分，为了更好地控制蚕沙药材质量，我们以1-DNJ和派可林酸为对照品，对蚕沙TLC鉴别条件进行了研究，为其质量标准的制定提供依据。现将结果报道如下。

1 材料与仪器

1.1 仪器 薄层色谱数码成像系统 (瑞士CAMAG公司);超声波清洗器 (武汉恒信世纪科技有限公司，型号HX-06);硅胶G薄层板 (产自德国Merck默克公司);电热恒温干燥箱 (上海跃进医疗器械厂)。

1.2 试药 蚕沙药材分别购自长沙市岳麓区高新大药房、济仁堂大药房、永康堂大药房、湖南上药九旺医药有限公司，均由湖南省中医药研究院李若存研究员鉴定为家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便;1-DNJ对照品 (批号:MUST-1305502，纯度＞98%)，购自成都曼思特生物科技有限公司;派可林酸对照品 (批号:111751-200601)和蚕沙对照药材 (批号:121419-200501)均购自中国药品生物制品检定研究院;其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 1-DNJ薄层鉴别 取蚕沙药材约2g，加水20mL，加热回流20min，滤过，滤液蒸干，残渣加70%乙醇5ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取1-DNJ对照品适量，加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、1-DNJ对照品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水 (16:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

2.2 派可林酸的薄层鉴别 取派可林酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、派可林酸对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

3 讨论

3.1 1-DNJ和派可林酸为降血糖的药效物质，同时1-DNJ也是抗肿瘤、艾滋病病毒 (HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)的药效物质，故以此2种成分来衡量蚕沙药材质量的优劣比β-谷甾醇更加合理。

3.2 显色剂的选择[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均无不饱和结构，不能采用紫外光灯进行检视，且GF254板也未检测到特征斑点，最后决定选用日光检视。1-DNJ为生物碱类成分，常用显色剂为改良碘化铋钾试液、吲哚醌试液;派可林酸为氨基酸类成分，常用显色剂为茚三酮试液。试验结果表明，上述显色剂对1-DNJ不灵敏，经过反复试验，发现样品与1-DNJ对照品用茚三酮试液显色，加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏，日光下检视，可增加显色的灵敏性。因此，采用茚三酮试液和碘蒸气作为1-DNJ的显色剂;茚三酮试液对派可林酸显紫色斑点，灵敏性好、专属性强，所以选茚三酮试液作为派可林酸的显色剂。

3.3 展开剂的选择 1-DNJ分子含有多个羟基，具有较强的极性。因此，考虑采用①乙酸乙酯-甲酸-水 (16:3:1);②乙酸乙酯-无水乙醇 (1:2);③三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1);④正丁醇-醋酸-水 (6:1:1)作为展开剂进行试验。以乙酸乙酯-甲酸-水 (16:3:1)的展开系统，分离得到的斑点最多。所以确定用乙酸乙酯-甲酸-水为展开系统，分别采用 (16:3:1)、(16:4:1)、(16:5:1)不同比例进行比较，经过多次试验，确定以 (16:4:1)的分离度及Rf值最为合适。派可林酸分子中含有羧基，极性较强。采用乙酸乙酯-甲酸-水 (16:3:1)和三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1)作为展开剂进行试验，结果发现，三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1)的展开系统，分离得到的斑点分离度好，斑点非常清晰。考虑到三氯甲烷的毒性，换用二氯甲烷进行试验，但是斑点的分离度不够好。所以，最后确定以三氯甲烷-甲醇-水(5:4.5:1)为展开剂。

3.4 耐用性试验 选用不同厂家的硅胶G板进行了比较，结果市售4个批次的蚕沙药材与蚕沙对照药材试验均与1-DNJ和派可林酸对照品相应的位置上显相同颜色斑点，且分离度好。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药材第一册[M].1992:69.

[2]苏凤莲.高效液相色谱法测定金糖宁胶中派可林酸的含量[J].海峡药学，2001，13(3):42.

[3]梁明，王鹏，张会慧，等.1-脱氧野尻霉素的研究进展[J].安徽农业科学，2012，40(17):9222.

[4]李晓伟，易智彪，曾宝，等.巴豆生物碱薄层色谱鉴别研究[J].北方药学，2013，10(2):3.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:3.