微柱凝胶免疫检测法在新生儿溶血病中的应用研究＊

蒋峻峰（重庆市大足区人民医院输血科 402360）

新生儿溶血病（HDN）是由于母亲体内存在可结合胎儿红细胞的IgG血型抗体而引起的被动免疫性疾病，未及时治疗极易导致高胆红素血症等并发症，严重时可导致新生儿智力缺陷，甚至死亡［1－2］。微柱凝胶免疫检测是免疫学检测常用方法，广泛应用于血型抗体检测临床［3－4］。本研究以401例疑似HDN新生儿为研究对象，探讨了微柱凝胶免疫检测在HDN诊断中的应用价值。现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年5月至2014年3月与本院就诊的疑似HDN新生儿401例，出生时间小于或等于5d的新生儿303例，出生时间大于5d的新生儿98例。

1.2 仪器与试剂 FYQ型免疫微柱孵育器、TD－3A型血型血清学检测专用离心机、新生儿ABO及RhD血型检测卡、胎儿及婴儿HDN不完全抗体检测卡、放散试剂盒均购自长春博迅生物技术有限责任公司。

1.3 方法 采集乙二胺四乙酸二钾抗凝静脉血3～4mL，无溶血标本，且采集后立即送检。检测项目包括ABO血型、RhD血型、直接抗人球蛋白试验（DAT）、游离抗体试验、放散试验，其中DAT、游离抗体试验、放散试验同时采用试管法和微柱凝胶免疫法。微柱凝胶免疫法结果判断标准：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中判为阳性，提示血清中含有相应抗体或血细胞被致敏；红细胞完全沉降至凝胶底部并形成红细胞扣判为阴性，提示血清中无相应抗体且血细胞未被致敏。微柱凝胶免疫检测注意事项：检测前采用专用离心机将检测卡离心1次（离心时间2～3min），避免使用有干胶和气泡的检测卡；检测前将静脉血标本3 000 r／min离心3min，使纤维蛋白充分沉降，避免血浆残留的纤维蛋白干扰检测结果；在环境温度15～25℃条件下进行标本检测，避免因温度过低而产生冷凝集；加入标本及试剂的检测卡离心1次后立即判读结果。

1.4 统计学处理 采用SPSS19.0进行数据处理及统计学分析。计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验。P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血型检测结果 401例新生儿中检出HDN患儿检出率为65.58%（275／401）。275例 HDN患儿中，ABO血型系统不合占96.00%（264／275），其中母亲为O型、新生儿为A或B型占95.83%（253／264），母亲为A型、新生儿为B型或母亲为B型、新生儿为 A 型占4.17（11／264）；Rh血型不合占4.00%（11／275）。

2.2 溶血试验检测结果 401例新生儿中，DAT、游离抗体试验与放散试验微柱凝胶免疫检测结果均为阴性者占31.42%（126／401），3项试验中至少1项为阳性者占68.58%（275／401）；3项试验试管法检测至少1项为阳性者占44.39%（178／401）。两种方法阳性检出率比较差异有统计学意义（χ2＝47.73，P＜0.05）。见表1。

表1 新生儿溶血试验检测结果［n（%）］

3 讨 论

HDN是由于母婴血型不合，母亲血型抗体通过胎盘进入胎儿血液循环中，导致胎儿或新生儿体内红细胞被破坏，属于被动免疫性疾病。HDN主要由ABO血型系统、Rh血型系统及其他少见的血型系统不合所致，国内以ABO血型不合最为常见，约占85.3%，Rh血型不合约占14.6%［5－7］。病情较轻的HDN患儿表现为贫血、水肿、肝脾肿大，病情严重时可导致新生儿运动障碍、智力发育不全、核黄疸，甚至死亡。早期诊断和治疗HDN极为重要。目前常用的HDN诊断试验包括：DAT、游离抗体试验和放散试验［8－9］，检测方法包括试管法和微柱凝胶免疫法。试管法可用于血型抗原与不完全抗体检测，但存在操作繁琐、检测耗时长、结果准确率较低等不足。微柱凝胶免疫法可用于血型鉴定、不规则抗体筛查和鉴定、交叉配血等血清学试验，可以代替传统的血型检测方法进行红细胞抗原、抗体检测。与试管法相比，微柱凝胶免疫法该具有标本用量少（更适用于新生儿）、结果容易判断、灵敏度高、准确率高等优点［10］。

本研究采用试管法和微柱凝胶免疫检测法对疑似HDN新生儿进行DAT、游离抗体试验和放散试验检测，结果显示3项试验微柱凝胶法检测阳性率为68.58%，试管法检测阳性率仅为44.39%。血型鉴定结果显示，母婴ABO血型系统不合占96.00%，Rh血型系统不合占4.00%。在ABO血型系统不合的患儿中，母亲为O型、患儿为A或B型占95.83%。母亲为O型时，外周血中的IgG类抗A、抗B抗体可通过胎盘屏障进入胎儿血循环。母亲为A型，胎儿为B或AB型，或母亲为B型，胎儿为A或AB型也可导致HDN，但临床比较少见，主要是由于母亲为A或B型时，外周血中的抗B、抗A抗体主要为IgM类抗体，不易通过胎盘屏障进入胎儿血循环。O型妇女极易在孕前因血型物质（如寄生虫、疫苗等）的刺激产生IgG类抗A、抗B抗体，导致其孕育的胎儿存在较高的HDN发病风险。母婴Rh血型系统不合主要是由于Rh阴性孕妇孕育Rh阳性胎儿，一旦胎儿红细胞在分娩时因胎盘失血进入母亲外周血，可导致母亲产生相应的血型抗体，但由于母亲为初次致敏时产生的抗体为IgM类抗体，只有在抗原长期刺激后才产生IgG型抗体，因此Rh血型系统不合所致HDN不会在第1胎发生。极少数未输过血的母亲第1次孕育的胎儿在分娩后发生HDN，可能与产妇为Rh阴性而产妇的母亲为Rh阳性有关。

综上所述，微柱凝胶免疫检测技术具有操作简单、灵敏度高、准确率高、易于标准化（可减少操作者主观因素的影响）等优点，已广泛应用于临床［11－12］。微柱凝胶免疫检测技术在HDN检测方面也具有一定的优势，在产前及产后HDN早期诊断方面具有极高的应用价值，适合临床推广应用。

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